适合库尔勒香梨SCoT分析用的DNA提取方法研究

[目的]有效利用SCoT分子标记法对库尔勒香梨优良营养系中相关基因,获得高质量基因组DNA,对目前常用的3种提取植物基因组DNA的方法进行比较研究,研究最适合库尔勒香梨SCoT分析的DNA提取方法.[方法]采用改良CTAB法,改良SDS法和试剂盒法从库尔勒香梨优良营养系的叶片中提取基因组DNA.采用NANODROP 2000核酸仪检测DNA浓度和纯度,并用1.2;琼脂糖凝胶电泳检测其完整性.以3种方法提取的基因组DNA为模板分别进行SCoT-PCR.[结果]改良CTAB法提取的基因组DNA的浓度为600 ～1 600 ng/μL,A260/A280为1.8 ～2.0,A260/A230＜2.0,电泳结果显示:有一条清晰的带,有拖尾现象,点样孔发亮;改良SDS法提取的基因组DNA的浓度为600 ～ 900 ng/μL,A260/A280为1.8 ～2.0,A260/A230为1.9 ～2.2,电泳结果显示:一条清晰的带,无拖尾现象只有一个点样孔发亮;试剂盒法提取的基因组DNA的浓度为100 ～ 200 ng/μL,A260/A280为1.8 ～2.0,A260/A230为2.2 ～2.5,电泳结果显示:一条清晰的带,无拖尾,无点样孔发亮现象,蛋白、多糖、酚类物质、RNA等去除彻底;以3种方法提取的基因组DNA为模板进行SCoT-PCR,PCR产物电泳结果显示:试剂盒法提取的DNA可以扩增出7条清晰明亮的带,改良CTAB法提取的DNA只能扩增出4条清晰的带,改良SDS法提取的DNA只能扩增出2条带.[结论]比较目前常用的3种提取植物基因组DNA的方法,综合成本高低,毒性大小,步骤多少,时间长短,试剂盒法是最适合提取库尔勒香梨优良营养系叶片基因组DNA的方法.     

大豆基因组DNA提取纯化方法研究

[目的]通过逐步富集的方法,提高大豆DNA的纯度和质量,为其他动植物基因组DNA的提取纯化提供参考。[方法]以梅桥大豆为试验材料,在CTAB法提取大豆基因组DNA的基础上,对大豆基因组DNA进行了纯化,对纯化后的DNA进行了光密度、紫外光谱、琼脂糖电泳和RAPD-PCR等的检测。[结果]光密度和紫外光谱检测表明A260/A230介于1.678~1.722,平均为1.697,A260/A280介于1.733~2.022,平均为1.844;琼脂糖电泳检测证实DNA分子量较大、完整性好、RNA残留少;RAPD-PCR检测得到了谱带清晰、多态性丰富的电泳谱带。DNA的得率为66.969μg/g。该试验的研究方法具有DNA质量高、操作简便、试验条件要求不高的特点。[结论]该方法可以应用于其它动植物的DNA提取纯化。     

石斛F1作图群体基因组DNA提取研究

选用PEX法、改良CTAB法、SDS法和尿素法对石斛F1作图群体基因组DNA提取进行研究。结果表明:前3种方法提取出DNA的A260/A280值在1.8～2.0之间,A260/A230值在2.0～2.2之间;最后种方法取出DNA的A260/A280值为2.75,A260/A230值为3.04;不同方法提取出DNA得率为PEX法>改良CTAB法和>SDS法>尿素法。结论:PEX法提取DNA质量好、得率高以及用时短,最适用于石斛F1作图群体基因组DNA提取。     

甘蔗基因组DNA提取方法的研究

甘蔗是重要的糖料及能源作物之一。甘蔗基因组DNA的提取是甘蔗分子生物学研究的前提。试验以甘蔗的嫩叶为材料,通过对前人的CTAB提取方法进行改良,建立了甘蔗基因组DNA的CTAB提取方法Ⅲ。该方法具有成本低、操作简单、省时和量多等特点,并且得到的DNA经核酸蛋白质分析仪测得A260/A280值处于1.673～1.929之间、A260/A230集中处于1.903～2.358,经琼脂糖凝胶电泳检测各样品具有一条分子量大于23.37kb的明亮主带并无拖尾现象,经RAPD-PCR检测各样品均能扩增出清晰而多态性丰富的条带,说明方法Ⅲ提取得到的DNA完整性好,纯度高,可以直接用于各种分子标记。     

一种改良的鞘翅目昆虫核酸的提取方法

介绍了一种简单快速地提取鞘翅目昆虫核酸的方法.以异色瓢虫和青杨脊虎天牛为试验材料,采用改良的CTAB法分别提取这2种昆虫不同部位的核酸.电泳检测和紫外分光光度分析结果表明,改良的CTAB法提取的DNA和RNA具有较高的质量和纯度,其A260/A280分别为1.7～1.9和1.9～2.0.RT-PCR和ISSR-PCR分析结果表明,利用该方法提取的总RNA和总DNA可用于基因克隆和分子标记等下游技术实验.     

红掌基因组DNA提取方法的优化

[目的]采用改良的SDS法提取红掌基因组DNA。[方法]以4种不同花色的红掌品种为材料,分别采用改良SDS法和CTAB法提取红掌基因组DNA,用紫外分光光度计测定英DNA在A260nm和A280nm下的吸光值,根据A260nm/A280nm的比值检测DNA的纯度和浓度。[结果]用改良SDS方法提取的DNA透明且无杂质,A260nm/A280nm比值在1．6—2．0,DNA纯度较高,可满足红掌分子生物学试验的要求;用CTAB法提取的DNA呈褐色或淡黄色,A260nm/A280nm,比值小于1．6,DNA纯度较低并且浓度低,舍有大量蛋白,此方法不适于提取红掌基因组DNA。[结论J采用改良SDS法可以提取到高质量的红掌基因组DNA,所提取的DNA的纯度和浓度可以满足红掌分子生物学研究的要求。     

适合核桃AFLP分析用的DNA提取方法研究

为从核桃叶片中提取高质量的基因组总DNA,比较了9种DNA提取方法。结果表明,改良的CTAB法9提取的DNA溶液无色透明,紫外分光光度计测得A260/A280为1.8~2.0,用0.8%琼脂糖胶电泳,为一条清晰的带,蛋白、多糖、酚类物质、RNA等去除较彻底,DNA无降解现象,该DNA能够适应AFLP分析的要求。     

改良CTAB法提取益智基因组DNA

益智叶片中多酚和多糖等杂质的含量较高,为获得高质量的益智基因组DNA,试验在传统CTAB法的基础上加以改良,提取益智基因组DNA,并对所得DNA的质量和浓度进行了检测。结果表明,改良后的方法较之传统方法简单高效,所获得的基因组DNA质量较好,OD260/OD280在1.7~2.0之间,RNA消化彻底,DNA无明显降解,进行ISSR分析条带清晰,多态性好。适合于进行以PCR为基础的DNA多态性的研究。     

适于AFLP分析用的桃韧皮部DNA提取方法

[目的]研究适于AFLP分析用的桃韧皮部DNA提取方法,为冬季无法获得幼叶和其他幼嫩材料时从事桃基因组研究打下了基础。[方法]以8种野生桃冬季1年生休眠枝的韧皮部为试验材料,采用改进的CTAB法提取基因组总DNA,与其相应幼叶DNA的提取效果进行了比较分析,并进行了AFLP验证分析。[结果]从野生桃韧皮部提取的DNA除产量低于幼叶外,DNA纯度和完整性都较好,OD260/OD280均为1.8~2.0,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化,其AFLP分析条带清晰,多态性好。[结论]该法提取的野生桃韧皮部基因组总DNA完全适于AFLP分析。     

适合山杏AFLP分析的DNA提取方法研究

以山杏幼叶为材料,比较了4种DNA提取方法。结果表明,处理为100mmol/LTris2HCl（pH8.0）、20mmol/LEDTA（pH8.0）、1.4mmol/LNaCl、2%CTA、10mmol/LNa2S2O5、2%β-巯基乙醇、1%PVP-40、1%Vc的CTAB4方法提取的基因组总DNA质量较高,DNA溶液无色透明,紫外分光光度计测得OD260/OD280为1.8～2.0,无降解现象,RNA去除干净,经AFLP分析条带清晰,多态性好,说明此法提取的DNA能够适应AFLP分析的要求。     

糯玉米自交系通系5的选育·主要特征特性及应用

[目的]改良和创新糯玉米种质资源,优化育种基础群体,选育优良自交系,为高产优质单交种的育成提供保证。[方法]介绍糯玉米自交系通系5的选育、主要特征特性及其应用,探讨其应用推广价值。[结果]通过直接从糯质基础群体选系,使产量和优良糯性品质等性状在更高水平上结合,江苏沿江地区农业科学研究所采用"分离小群体"选系的育种方法,聚合了多品种优良基因,成功选育出综合性状优良、配合力高的糯玉米自交系通系5及其"通系5类群",这种育种方法是对轮回选择改良群体概念的拓展和补充。[结论]以通系5及其衍生系为亲本,育成了一批高产优质糯玉米新品种,这些糯玉米系列杂交种在生产上已大面积推广应用,取得了良好的经济与社会效益。     

9个糯玉米自交系产量及其主要产量性状的配合力分析

试验选用9份不同来源的鲜食糯玉米自交系,按照Griffi ng完全双列杂交方法Ⅳ组配出36份杂交组合,对所获得的杂交组合产量及其主要产量性状进行配合力分析。结果表明:W6、W9、W4、W3、W1等5个糯玉米自交系产量一般配合力较高,可以组配出产量较高的杂交种后代,其中产量特殊配合力(SCA)值最大的组合是W4×W7(90.377 8);自交系W1、W3、W6、W4等4个自交系可以组配出果穗较粗、穗行数较多的杂交组合;自交系W3、W7、W9等3个自交系作为亲本组配杂交组合,易获得果穗较长、秃尖较小、行粒数较多糯玉米杂交品种;W6、W9、W1、W8等4个自交系,用作亲本组配杂交种可以较明显地提高子代百粒重,有利于高产品种的育成;自交系W4、W6、W3、W2等4个自交系作为亲本可以组配出出籽率较高的杂交种后代。     

新郑灰枣基因组DNA提取方法比较

以新郑灰枣苗叶片为材料,采用CTAB方法提取叶片DNA,并对该方法进行改良。比较4种DNA提取方式,对提取结果进行紫外分光光度、电泳、酶切等方法的鉴定,结果表明,提取的灰枣叶片DNA得率约为0.370~0.530μg/mg,A260/A280约为1.90~2.00,A260/A230在2.00以上,分子量在23 kb以上,能够被EcoRⅠ,HindⅢ酶切。其中,第2种处理方法提取效果较好。     

一种适宜于文库构建的土壤微生物总DNA提取方法

采用改良的方法提取2种土壤微生物总DNA,并采用透析法对提取的DNA进行纯化,与MO BIO公司PowerSoil DNA isolation Kit试剂盒法进行比较,结果表明,改良的土壤微生物总DNA提取方法提取到的DNA明显高于试剂盒提取的DNA,且A260/A280及A260/A230与试剂盒提取的相差不大,片段也较大,是一种经济方便的土壤微生物总DNA提取方法,比较适合用于构建高质量的宏基因组文库.     

内切酶接头引物对柿属SSAP分子标记扩增的影响

SSAP(sequence-specificam plification polymorphism,序列特异扩增多态性)是种质遗传多样性分析和系统进化研究的有力工具之一。根据10个SSAP引物组合对28份柿属基因型的扩增结果探讨内切酶因素对SSAP逆转座子分子标记扩增的影响。结果表明,在以MseI和EcoRI组合消化的SSAP反应系统,且均以3个碱基作为末端选择性碱基的前提下,MseI与逆转座子引物组合的SSAP扩增性能优于EcoRI与逆转座子引物组合。研究结果为有目的和高效选择内切酶引物进行植物种质资源SSAP分析提供参考。     

雷公藤叶片基因组DNA不同提取方法比较

[目的]比较雷公藤叶片中基因组DNA的提取方法。[方法]采用常规CTAB法、改良CTAB法、常规SDS法、高盐低pH值法和一步法分别提取雷公藤叶片基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法测定样品OD260与OD280的比值以及RAPD扩增结果,判断所得DNA样品的纯度,并根据OD260值计算不同提取方法的DNA得率。[结果]改良CTAB法提取效果最佳,所提DNA的平均得率为219.3μg/g,OD260/OD280比值在1.869～1.903,用于RAPD-PCR均有较好的扩增结果。[结论]改良CTAB法是雷公藤叶片基因组DNA提取的最佳方法。     

用于RAPD分析的树莓基因组总DNA提取初报

以树莓嫩叶为材料,进行树莓基因组总DNA不同提取方法的比较试验.结果表明:CTAB法、SDS法、改良CTAB法均可成功提取树莓DNA,但无论在质量上还是在数量上,改良CTAB法都优于常规CTAB法和SDS法,所提取的DNA大多呈现无色透明状,A260/ A280值多数介于1.65～1.90,完全可以用于RAPD分析.     

南方地区120份甜、糯玉米自交系重要目标性状和育种潜力分析

[目的]评价120份甜、糯玉米自交系的产量、品质和农艺性状,解析各性状间的相关性,筛选优良自交系,开展育种潜力评价.[方法]测定120份甜、糯玉米自交系的农艺性状(花期、株高、穗位高)、产量性状(鲜苞穗重、鲜穗重、鲜粒重等)及品质性状(皮渣率、糖度、粗蛋白、粗淀粉、脂肪含量等).选择产量、糖度、皮渣率最优的前50％自交...     

凉粉草基因组DNA提取与分析

[目的]为分子生物学研究提供高质量、高产量的凉粉草总DNA。[方法]采用改良CTAB法提取总DNA,通过测定OD260/OD280值、琼脂糖凝胶电泳和RAPD扩增对所得DNA的浓度和质量进行检测,考察该方法对DNA的提取效果。[结果]改良CTAB法提取的总DNAOD260/OD280值为1.6～2.0;电泳条带清晰,完整性好,纯度高,总DNA分子量与λDNA相近;以所提DNA为模板进行RAPD扩增时,可得到稳定的扩增条带。[结论]改良CTAB法适合凉粉草基因组DNA的提取。     

从活性污泥中提取微生物总DNA的方法比较

[目的]探索适宜的畜禽废水中活性污泥微生物总DNA提取的方法。[方法]采用2种方法提取畜禽废水中活性污泥微生物总DNA,即"提取缓冲液+蛋白酶K+SDS"提取法以及"溶菌酶-SDS-蛋白酶"提取法。通过对这2种方法进行比较,以确定最佳试验方案。[结果]紫外分光光度法分析表明,"提取缓冲液+蛋白酶K+SDS"提取法所得的OD260/OD280大于1.81。电泳结果显示,"提取缓冲液+蛋白酶K+SDS"提取法提取DNA亮度高,有大片断DNA的存在且拖带较少,条带集中,能成功进行16S rDNA的PCR扩增;通过PCR扩增所得的DNA的纯度检测结果显示,扩增出了条带分子约为1 500 bp的特异性条带"。溶菌酶-SDS-蛋白酶"提取法所提取的DNA没有得到较好的效果,点样孔较亮则可能存在一定的蛋白质残留,或其他杂质等,通过PCR扩增没有扩出特异性条带。[结论]"提取缓冲液+蛋白酶K+SDS"提取法为畜禽废水中微生物群落在分子水平上的研究提供了1种简便、可靠的DNA提取方法,为分析畜禽废水中细菌多样性提供了条件。