边缘无浆体病动物模型的建立及其生理指标变化规律的研究

建立边缘无浆体病的动物疾病模型。采用地塞米松注射液长期抑制实验动物的免疫力,通过犊牛颈静脉接种含有无浆体病原的牛血液,监测奶牛无浆体感染过程中其生理指标的变化趋势,以及在实验动物体内的消长规律,建立起无浆体人工感染动物模型。无浆体感染实验动物有5～7d的潜伏期,感染早期体温先升高后回复正常,呼吸先加快后回复正常水平,心率无明显变化。边缘无浆体感染过程中,红细胞出现大量变形和破碎,数量减少,白细胞呈现减少升高再减少的过程后,逐步恢复到正常水平,而血小板数量增加。因此,可用1月龄犊牛在免疫抑制情况下建立无浆体人工感染动物模型,揭示犊牛在感染边缘无浆体过程中其生理与血液指标的变化规律。     

基于绵羊无浆体Groel基因的PCR方法的建立

利用绵羊无浆体(Anaplasma ovis)高度保守的Groel基因,建立了快速、特异、敏感的绵羊无浆体检测方法。根据Gen Bank上登录的绵羊无浆体Groel基因序列(FJ460438),设计1对特异性引物,建立了绵羊无浆体PCR检测方法,并对其进行特异性、敏感性、重复性试验及临床样品检测。结果显示,该方法能特异性地检测绵羊无浆体,与山羊无浆体、嗜吞噬细胞无浆体、牛无浆体、边缘无浆体、吕氏泰勒虫、绵羊泰勒虫、羊附红细胞体、弓形虫基因组均无交叉反应;该方法检测下限可达到7.7×10-15g·μL-1,比文献报道的PCR敏感10倍(77×10-15g·μL-1);具有良好的重复性;对81份羊临床血液样品检测结果表明,绵羊无浆体感染率为32.1%(26/81),高于文献报道的PCR(MSP4基因)检测结果(18.5%,15/81)。     

河南部分地区湖羊血液无浆体感染情况调查

为了解湖羊血液无浆体病的流行情况,采用巢式PCR对采自河南省驻马店、洛阳、安阳、汝州市共4个地区湖羊的165份血液样品,基于无浆体16S rRNA和MSP4基因进行检测。结果表明,共测出嗜吞噬细胞无浆体(Anaplasma phagocytophilum)、牛无浆体(A. bovis)和绵羊无浆体(A. ovis) 3种无浆体,阳性率分别为1. 21%(2/165)、9. 70%(16/165)和24. 85%(41/165);无浆体总阳性率为32. 73%(54/165)。表明湖羊无浆体感染普遍存在,不同饲养方式、不同年龄湖羊的无浆体阳性率存在差异。     

4株奶牛源左氏无绿藻的分离与鉴定

无绿藻是一种普遍存在的微藻,属于绿球藻,可引起人类和动物广泛地感染,其中的左氏无绿藻与一种严重的牛乳腺炎有关。该研究采集江苏部分地区患乳房炎奶牛奶样,用绵羊血琼脂培养、分离,用革兰氏染色镜检及PCR方法确定得到4株左氏无绿藻(P.zopfii)。这是首次在江苏地区发现奶牛源左氏无绿藻。     

肉牛无浆体病临床症状与防治措施

肉牛的特点是:体躯丰满、增重快、饲料利用率高、产肉性能好,肉质口感好。肉牛不仅为人们提供肉用品,还为人们提供其他副食品。肉牛养殖的前景广阔。经济效果可观。肉牛无浆体病又称牛边虫病,是由无浆体引起的一种慢性和急性传染病,其特征为高热、贫血、消瘦、黄疸。对其流行情况、临床症状、病理变化、诊断及防治措施进行了介绍。     

阿克苏地区羊感染无浆体病情况调查分析

为了解阿克苏地区羊无浆体病流行分布情况,采用PCR方法对965份羊抗凝血样品进行了检测。结果显示,羊血液样品中检出2种无浆体,分别为嗜吞噬细胞无浆体和绵羊无浆体,阳性率分别为29.43%(284/965)和33.16%(320/965),差异无统计学意义(χ2=3.12,P>0.05);舍饲和散养条件下,嗜吞噬细胞无浆体阳性率分别为4.04%(19/470)和53.54%(265/495)(χ2=284.35,P<0.05),绵羊无浆体阳性率分别为21.49%(101/470)和44.24%(219/495)(χ2=56.31,P<0.05)。调查结果表明,阿克苏地区是羊无浆体病流行地区。     

牛羊蜱传性血液原虫超微结构的研究——边缘无浆体的超微结构观察

电镜观察显示,人工感染边缘无浆体,多数位于红细胞内边缘部位,外面有一个不规则的边缘和一个界限膜,带有6个或7个周边突起.边缘无浆体内由3个、4个或8个初级小体组成.每个初级小体都有一个细胞壁和原生质的膜.初级小体有一个时呈卵圆形、或椭圆形。叵初级小体数目增加时,边缘无浆体大部份呈不定形,四角形或五角形.     

新疆革蜱源性绵羊无浆体病原DNA检测

[目的]探究新疆部分地区羊体表寄生的优势革蜱携带病原状况.[方法]采用形态学(借助显微镜)和分子生物学(革蜱种属特异性ITS-2F、ITS-2R引物进行扩增)方法,对采集于阿勒泰、巴音郭楞州等地州羊体表寄生的蜱虫(N =267)进行种属鉴定,对其携带的绵羊无浆体病原(MSP4基因为靶标)DNA进行PCR检测.[结果]当地羊体表寄生的优势种革蜱为草原革蜱(D.nuttalli)、森林革蜱(D.slivarum)和边缘革蜱(D.marginatus),均能携带病原MSP4基因,且这三种革蜱种特异基因扩增产物序列(820 bp)与已登录记载的同种革蜱的核苷酸同源性为99;.被革蜱叮咬的126份羊全血样品中34份为绵羊无浆体阳性,均能扩增出850 bp目的基因条带.[结论]新疆阿勒泰地区、巴音郭楞州等地州羊群感染了绵羊无浆体病,其阳性率为27; (34/126).为进一步研究新疆革蜱的公害州及羊无浆体病的综合防治提供科学依据.     

巢式PCR扩增SRY基因进行奶牛胚胎性别鉴定

依据牛Y染色体上SRY基因的特异序列设计、合成2对内外引物,从妊娠奶牛血浆中提取胎儿游离DNA,富集、浓缩后进行特异性巢式PCR扩增以鉴定奶牛早期胚胎的性别.结果表明,巢式PCR扩增SRY基因对不同发育阶段奶牛胚胎性别鉴定的平均准确率为80％,其中1～2月龄、2～3月龄、4～8月龄的性别鉴定准确率分别为60％、85,7％、92,3％.试验证明该方法可行,准确率较高.     

Detection of Staphylococcus aureus in Dairy Products by Polymerase Chain Reaction Assay

A polymerase chain reaction （PCR） assay was employed for direct detection of Staphylococcus aureus without enrichment in dairy products. A solvent extraction procedure was successfully modified for the extraction of Staphylococcus aureus DNA from artificially contaminated whole milk, skim milk, and cheese. A primer targeting the thermostable nuclease gene （nuc） was used in the PCR. A DNA fragment of 279 bp was amplified. The PCR product was confirmed by DNA sequencing. In this study, the PCR, GB-4789.10-94, Perifilm RSA.Count Plate, and Baird-Parker ＋ RPF Agar were compared. The sensitivity of the PCR was 10 CFU mL^-1 of whole milk, skim milk, and 55 CFU g^-1 of cheese. The developed methodology allowed for detection of Staphylococcus aureus in dairy products in less than 6 h. The time taken for the development of this PCR assay was 12-24 h, less than the time taken by the general PCR assay using the enrichment method, and the coincidence rate of this developed PCR was 94.3%, the sensitivity was 100%. It was a rapid, sensitive, and effective method for PCR to detect Staphylococcus aureus in milk and milk products.     

PCR检测乳品中金黄色葡萄球菌

【目的】利用PCR技术,无需增菌，直接检测乳品中的金黄色葡萄球菌。【方法】通过溶剂提取的方法从人工样品中提取模板，以金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因（nuc）为靶基因，经过PCR扩增得到279 bp的产物。经过DNA测序证实该产物为目的扩增产物。采用PCR方法实际检测了乳品中的金黄色葡萄球菌，同时，与国标GB 4789.10-94方法及两种快速检测致病性金黄色葡萄球菌测试片Petrifilm RSA.Count Plate 及Baird-parker+RPF Agar进行了比较。【结果】PCR方法的灵敏度高，全脂乳和脱脂乳检测的检出限为10 CFU/ml，奶酪检测的检出限为55 CFU/g，可在6 h内完成对乳品中金黄色葡萄球菌的检测，比目前普遍采用的先增菌再进行PCR检测的方法缩短了12～24 h。与国标方法相比，PCR方法的符合率为94.3％，敏感性为100％。【结论】采用溶剂提取制备模板的方法可有效的用于PCR直接检测(无需增菌)乳及乳制品中的金黄色葡萄球菌。     

PCR法进行胚胎性别鉴定的研究进展

通过胚胎性别鉴定,可控制家畜后代性别比例,获得巨大经济效益。早期胚胎性别鉴定的方法有,核型分析法,H-Y抗原法,X-连接酶检测法和PCR扩增法等。PCR法因其简单、快速、准确等优点,成为目前比较理想的胚胎性别鉴定方法。笔者对性别决定基因、PCR法胚胎性别鉴定的几个关键环节进行了综述,并对其前景进行了展望。     

检测牛奶中布鲁氏菌套式PCR方法的建立

为检测牛奶中的布鲁氏菌,通过对布鲁氏菌外膜蛋白31 k Da的一段基因进行套式PCR扩增,建立从临床奶样中检测布鲁氏菌的方法。改进了奶样中布鲁氏菌基因组DNA的提取方法,通过正交试验的方法优化了套式PCR试验的反应条件,优化后的一扩PCR反应条件为:退火温度56.4℃,Mg~(2+)浓度1.5 m M,rTaq酶0.2μL,引物0.3μM,d NTP浓度0.2 m M;二扩PCR反应条件为:退火温度53.3℃,Mg~(2+)浓度1.5 m M,rTaq酶0.25μL,引物0.4μM,d NTP浓度0.1 m M。其敏感性为8 CFU·m L~(-1),比细菌分离试验敏感1 000倍;与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌、隐秘杆菌和克雷伯氏菌均无交叉反应;与试管凝集试验检测布鲁氏菌病的阳性符合率是100%,阴性符合率是86.36%。试验建立的套式PCR方法可用于检测奶样中布鲁氏菌。     

STR基因座在奶牛个体识别中的应用

通过分析2份冷冻精液样本和4头可疑种公牛血样的BM1862、BM2113、BM720和TGLA122 STR基因座遗传多样性,旨在判断该2份冷冻精液的种公牛来源,为建立奶牛个识别方法奠定基础。结果表明,应用STR基因座对个体进行识别,鉴别能力达0.9999。说明四个STR基因座可以用于冻精质量监测或奶牛个体识别和亲子鉴定。     

沙门氏菌PCR快速检测技术研究

通过改良热裂解法提取沙门氏菌基因组DNA,设计特异性引物进行PCR扩增,并对热裂解的时间进行了比较试验,对PCR检测的敏感性和所用引物的特异性进行了试验.结果表明,煮沸时间为2 min即可获得满足PCR要求的基因组DNA;设计的引物特异性好,能专一性扩增出约500 bp条带;该引物灵敏度高,能进行有效检测的核酸最低起始量为129 pg.采用热裂解法提取沙门氏菌基因组DNA进行PCR快速检测技术大大缩短了沙门氏菌检测时间.     

Development and Application of Nested PCR Assay for Detection of Dairy Cattle-Derived Cyclospora sp.

To develop a nested PCR assay for the detection of cattle-derived Cyclospora sp.,two pairs of primers were designed on the basis of the cattle-derived Cyclospora sp.sequences.These primers selectively amplified a 168-bp DNA fragment of the 18S rRNA gene of cattle-derived Cyclospora sp.With these primers,a nested PCR assay for the detection of cattlederived Cyclospora sp.was developed.The nested PCR assay was specific and there is no cross-reaction with other parasites,such as Eimeria spp.,Cryptosporidium spp.,Giardia sp.,Toxoplasma sp.,Trichuris sp.and cattle ciliate.The assay was able to detect as low as 2.85 x 10-2 fg of the control positive DNA.The results of the detection of clinical samples indicated that the assay coincided with microscopic examination.The results show that the nested PCR assay will be an effective tool for the detection of Cyclospora sp.in cattle feces.     

Sex Identification of Red-crowned Crane by the Polymerase Chain Reaction

Sex determining gene primers of Oriental White Stork were used to amplify sex-linked gene of the Red-crowned Crane‘s W chromosome-specific by PCR for sex identification. The sexes of 7 couples of grown Red-crowned Cranes and 15 youngs were identified. Through DNA sequence analysis, the identity is 94.7-% between Red-crowned Crane and Oriental White Stork. The results of this study suggest that the application of the polymerase chain reaction technique is practicable for determining sex in the Red-crowned Crane.     

奶牛乳腺炎预防和治疗的研究进展

通过预防接种J5 菌苗和用抗菌素、细胞因子、细菌素及激素治疗奶牛乳腺炎 ,可有效地控制该病。