一株具有纤维素降解能力的链霉菌LLJ-03的鉴定及初步研究

在经过一次堆积发酵的双孢蘑菇栽培基质中筛选到一株放线菌LLJ-03,根据16S rDNA序列及生理生化特征鉴定为灰变红链霉菌(Streptomyces griseorubens)。初步研究了该菌降解纤维素的能力,其纤维素酶活力可达97.0 U/mL,该菌对栽培基质的发酵预处理具有重要作用。     

纤维素降解菌K7-2产纤维素酶培养条件的优化

对新筛选出的产纤维素酶菌株K7—2进行了产酶培养条件的优化。结果表明．菌株K7—2的最优产酶条件为培养液初始pH值7．0、培养温度34℃、摇瓶转速150r·min^-1、培养时间60h、接种量3．5％：最适碳源是麸皮,最适氮源是黄豆粉。为进一步改造、构建更适合生产纤维素酶的工程菌株开辟了新的途径。     

一株纤维素降解菌的筛选与鉴定

从落叶覆盖的腐殖层土壤中富集、分离得到12株纤维素降解菌,从中筛选出一株高效降解菌(X10),研究其最适宜的培养条件为:配制以葡萄糖+微晶纤维素(1∶1)为碳源、以蛋白胨+牛肉膏(1∶1)为氮源的培养基,pH值7.5,30℃下培养40 h,测得纤维素降解酶酶活可达到67.44 U。通过对其16s rRNA测序鉴定,该菌与氧化微杆菌(Microbacterium oxydans)有99%的同源性。纤维素降解菌的选育可为高效生产纤维素酶提供新的菌种来源。     

一株高纤维素酶活力纤维素分解菌的分离与鉴定

从腐烂朽木及附近土壤筛选分离到一株高纤维素酶活性的纤维素分解菌CDY-3,经初步鉴定其为芽孢杆菌属菌株。pH5时,该菌羧甲基纤维素酶活性最高达14.59IU,对滤纸有较强的降解能力。生理生化特性表明该菌最适生长条件为30℃,pH7。     

牛粪纤维素降解菌的筛选与初步鉴定

通过"富集—初筛—复筛"流程,筛选出4株对纤维素有强降解能力的菌株,分别标记为TG1、HN1、HP2、P3。对4株菌的纤维素酶活性进行了定量测定;通过生理生化试验,初步鉴定TG1为放线菌,HP2为地衣芽孢杆菌,P3、HN1为枯草芽孢杆菌。     

一株纤维素降解菌的鉴定及其对饲料粗纤维的降解效果

【目的】对本课题组分离的一株纤维素降解菌进行鉴定,优化其产酶条件并检测其对饲料粗纤维的降解效果,以期为该菌在饲料粗纤维降解中的应用提供理论依据。【方法】通过菌株形态特征和16SrDNA序列分析鉴定了实验室分离保存的一株纤维降解菌;研究该菌所产纤维素酶的部分酶学性质和酶谱,并优化其产纤维素酶的条件;利用体外发酵和尼龙袋法测定菌株N3所产粗酶液对3种饲料(麸皮、麦草、燕麦)粗纤维的降解率;利用RB亮蓝脱色试验检测该菌的木质素降解能力。【结果】经鉴定,该菌株为枯草芽孢杆菌,命名为Bacillus subtilis N3;N3菌株不产生漆酶,主要向胞外分泌分子质量70ku以上的纤维素酶组分;N3菌株所产纤维素酶的最适反应温度和pH分别为60℃和5.5;N3菌株以体积比1∶50接种至最适发酵培养基(碳源为麸皮、氮源为蛋白胨,初始pH为5),37℃培养24h时,所产纤维素酶活性最高,可达3.50U/mL;菌株N3所产粗酶液对麸皮的粗纤维降解率最高,对麦草秸秆的粗纤维降解率最低。【结论】分离到的纤维降解菌Bacillus subtilis N3主要分泌分子质量70ku以上、耐热的纤维素酶,对饲料粗纤维具有较强的降解能力。     

一株放线菌对辣椒青枯菌的拮抗作用及其鉴定

为获得拮抗辣椒青枯菌的生防放线菌,从烟草青枯病和辣椒青枯病重病地块健康植株的根围土壤中分离筛选放线菌。结果表明,采用平板对峙培养法筛选得到一株编号为M3-3①的拮抗菌,其拮抗作用表现为:对峙培养24、48、72h后,平均抑菌圈直径分别为42.73、38.80、32.60mm。经16SrDNA序列分析和形态学特征(菌落整体形态、菌丝、孢子和孢子链等特征)观察,将该菌鉴定为淡紫灰(薰衣草)链霉菌(Streptomyces lavendulae)。     

1株纤维素分解菌的初步鉴定及酶活检测

从河北地区农田土壤中分离出1株具有纤维素酶活的细菌FS-1,经形态学和生理生化实验初步鉴定为芽孢杆菌属(Bacillusspp.)菌株。该菌株在液体纤维素培养基中发酵46 h后,其滤纸酶活达6.03 IU/mL,羧甲基纤维素酶活高达22.19 IU/mL,微晶纤维素酶活为4.03 IU/mL。     

一株细菌纤维素产生菌的鉴定

细菌纤维素由于具有高结晶度、生物可降解性和合成可调控性等优良特性,被广泛应用于食品、医学、造纸等许多领域。实验室自制荞麦醋自然放置一段时间,液面上长出厚厚的凝胶状膜,经成分分析,确定其为纤维素,其结晶度为78%,Iα型纤维含量为60%。取该荞麦醋醪液,经自然筛选,最终筛选出1株性能稳定的纤维素高产菌株J2,纤维素产量可达87.62 g·L~(-1)(湿重)。通过形态学、生理生化指标及基于16S rRNA序列的分子生物学鉴定,确定菌株J2为汉森氏葡糖醋杆菌(Gluconacetobacter hansenii,Gen Bank登录号为GU213109)。     

一株高环境适应性纤维素降解菌的筛选及鉴定

从造纸厂废纸浆中分离到一株纤维素降解细菌CP4,在温度为20~50℃和pH为5~10的条件下,CP4能够快速生长并分泌纤维素酶。在35℃和pH为9的条件下,培养8 h后CP4开始产酶,培养3 d后相对酶活为5.43 mm/d。为确定CP4的分类学地位,PCR扩增后测定其16S rDNA基因序列,在GenBank中进行同源性比较,并与一些相关细菌构建系统发育树,结合其形态特征和生理生化特征,初步鉴定为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)。该菌环境适应能力高,在纤维素类物质污染的治理中具有潜在的应用前景。     

1株产纤维素酶真菌的鉴定及其酶学性质初探

[目的]对筛选得到的1株产纤维素酶的优良菌株进行鉴定,并研究其酶学性质。[方法]利用传统分类学方法、电子显微镜观察、18SrDNA和序列的测定以及系统发育分析对1株分离自腐败水葫芦中产纤维素酶真菌D1进行分类鉴定,并对其产酶性能进行了初步研究。[结果]各种指标鉴定表明其为青霉属真菌斜卧青霉(Penicillium decumbens)。该菌株经发酵培养120h,产酶酶活达到最高;活性在pH值4~6内稳定;pH值为5时酶活最高,50℃处理1h活性稳定。[结论]该研究为纤维素酶的分离纯化和稳定性研究提供了必要的参考。     

纤维素降解细菌的分离、鉴定及其系统发育分析

采用选择性培养基从不同地区土壤中筛选得到具有纤维素分解能力的菌株共65株,从中选取纤维素降解能力较高的细菌1株并对其进行表型、生理生化和分子鉴定。结果表明株菌NJ2-008属于不动杆菌属（Acinetobacter）,与乙酸钙不动杆菌（Acinetobacter calcoacetirum）的序列相似度达98%。     

杭州湾海域产纤维素酶海洋真菌的分离筛选及鉴定

[目的]筛选产纤维素酶的海洋真菌资源。[方法]从杭州湾海域采集海水和海泥(沙)等样品,采用海水PDA培养基进行富集培养,然后在羧甲基纤维素钠培养基上进行真菌分离纯化,采用刚果红染色法筛选产酶菌株,并对其中纤维素酶活性较高的菌株进行了26S rDNA ITS扩增及序列测定。[结果]共筛选到72株产纤维素酶的海洋真菌,两株高产菌株的同源序列比对结果分别与Penicilliumfuniculosum和Pseudocercosporella fraxini的同源性高达100%和99%。[结论]该研究为纤维素酶高产菌株的改造和定向进化奠定了资源基础。     

假单胞菌属四氯化碳降解菌的筛选和初步鉴定

[目的]为污染地域四氯化碳的生物降解提供一条可行的途径。[方法]用富集培养基对采自四氯化碳污染区域土样中的茵种进行富集培养,然后用筛选培养基对富集培养液中的菌种进行分离和纯化,用气相色谱法测定各样品中的四氯化碳残留量,进而计算出其四氯化碳降解率。[结果]通过试验筛选出了10株具有降解四氯化碳能力的菌种,其编号分别为SL-1、SL-2、SL-3、SL-4、SL-5、SL-6、SL-7、SL-8、SL-9和SL-10,其四氯化碳降解率分别为11．2％、14．5％、14．9％、18．3％、8．8％、20．1％、19．2％、13．2％、17．5％和15．3％,其中菌株SL-6呈灰色,边缘整齐呈半圆形,其四氯化碳降解率最高。生理生化鉴定结果表明,菌株SL-6属于假单胞茵属。[结论]该试验筛选出了10株能降解四氯化碳的菌株,但它们的四氯化碳降解率需要通过诱变育种等微生物技术来提高。     

产蛋白酶生防细菌的筛选及其对病原真菌的拮抗作用

从小麦根际土壤中分离到一株高产蛋白酶并对多种植物病原真菌具有拮抗作用的生防细菌T2.通过形态特征、生理生化及16S rDNA同源性序列分析,初步鉴定该菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).其发酵液经硫酸铵沉淀后的粗酶液可明显抑制棉花枯萎病菌菌丝生长及孢子萌发,在显微镜下观察到棉花枯萎病菌孢子萌发的芽管短、孢子膨大变形呈泡囊状,菌丝呈串珠状膨大、细胞破裂、细胞质外渗,表明该细菌菌株产生的胞外蛋白酶可能与病菌菌丝生长受抑制密切相关.     

产纤维素酶低温菌株的分离鉴定

为促进秸秆还田,加快秸秆在北方设施土壤中的降解速度,以腐烂秸秆为待筛菌株原料,以玉米秸秆粉为培养基,在15℃低温条件下,采用刚果红平板法进行初筛,得到16株菌株,对16株菌株进行酶活测定复筛,其中L-13酶活最高,达1 679.61 U/ml。对L-13菌株的菌体形态、菌落特征进行观察,并进行了一系列生理生化试验和16S rDNA序列分析,初步鉴定L-13为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。此菌可以在15℃下快速生长繁殖并高产纤维素酶,低温条件下能快速降解秸秆。     

一株产纤维素酶枸杞内生菌的分离鉴定

通过组织分离法从健康枸杞植株体内分离到10株内生菌,经反复筛选及刚果红染色鉴定,获得一株较高活力纤维素酶内生菌GQP-3。结合菌落形态、生理生化特性及菌株特异性序列分析等手段,确定其分类归属。结果表明GQP-3为类芽孢杆菌属,该菌的发酵液在中性条件下的CMC酶活力可达20.0 U/mL。     

一株苦马豆素降解菌的分离与鉴定

旨在从小花棘豆(Oxytropis glabra DC)生长环境中分离可降解其主要毒性成分苦马豆素(Swainsonine,SW)的微生物。通过富集驯化培养,以SW为唯一碳源,从埋置小花棘豆的土壤中分离得到1株SW降解菌。形态学观察表明该降解菌为革兰氏阴性短小杆菌,无荚膜,无鞭毛;生理生化检测发现该降解菌氧化酶阳性,不产吲哚,不水解淀粉;16SrDNA序列比对分析表明该降解菌属于假单胞菌科假单胞菌属微生物,序列比对发现与恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)同源性最高。在SW无机盐液体培养基中培养24h,菌株对100mg/L SW的降解率为30.12%,延长培养时间不能提高其降解SW的能力,但可在高质量浓度SW(1 000mg/L)的处理下生长;该降解菌在无SW刺激的条件下转接50代,对100mg/L SW的降解率无明显影响。     

高效盖草能降解菌的分离与鉴定

针对海南地区长残效除草剂残留对后茬产生药害问题,以高效盖草能作为研究对象,采用富集培养的方法从长期施用长残效除草剂的土壤中分离到3株细菌,经过对这3株降解菌的培养特性及生理生化特征的测定试验,经传统鉴定方法对3种菌种进行鉴定,结果显示,HM1和HM2同为芽孢杆菌属（Bacillus sp.）,HM3为甲基球菌属（Methyloeoccus sp.）。并分别研究了培养含糖量、温度、pH和高效盖草能初始浓度对分离出的3株降解菌生长的影响,结果表明,HM1和HM3的最适含糖量是0,HM2的最适含糖量为0.5%;HM1和HM3的最适温度范围相同,为20～37℃,HM2的最适温度为25～41℃;HM1、HM2和HM3的最适生长温度分别是35、30和30℃;HM3的生长对酸碱度要求不严格,最适生长pH范围为6.0～9.0,HM1适宜在中性偏酸的条件下生长,而HM2则适宜在中性偏碱的条件下生长,其最适生长pH均为6.0～8.0;HM1和HM2生长的最适高效盖草能浓度是100 mg/L,HM3生长的最适高效盖草能浓度为200mg/L。     

根瘤菌中纤维素酶的研究进展

基于国内外关于纤维素酶的研究成果,概述了根瘤菌中已报道的纤维素酶基因、蛋白性质、在共生中的作用及研究现状,并对进一步的研究进行展望。