猪圆环病毒2型PCR检测方法的建立

根据猪圆环病毒2型(PCV2)的基因序列,设计一对能特异性扩增PCV2ORF2基因的引物,通过对PCR方法的优化,建立了快速的PCR检测方法用于病料中PCV2感染的检测。用本方法对猪瘟病毒(HCV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)进行了扩增,均未有条带出现,表明该方法具有良好的特异性;敏感性试验表明,该方法能够检测到的最低DNA模板浓度为1.0×10-5ng/μL;重复性试验表明,该方法具有良好的稳定性。     

猪圆环病毒(PCV)之断奶仔猪多系统衰竭综合征研究近论

圆环病毒(Porcinecircoiru,PCV)并不算是新发现的病毒,早在1974年,TischerI等在PK-15细胞系ATCC-CCL31的传代过程中,出现类似细小病毒和乳多空病毒的颗粒,这种颗粒状物质不引起细胞病变(Cytopathiceffect,CPE),因此,当时被认为是一种细胞污染物。1982年,TischerI等用电镜观察核     

猪圆环病毒2型疫苗的应用现状及展望

<正>猪圆环病毒病(PCVD)是由猪圆环病毒2型(PCV2)引起的猪传染性疾病,自1997年Clark等首次分离到PCV2以来,该病已给全世界养猪业造成了巨大的经济损失,是继猪繁殖与呼吸综合征之后新发现的又一重要疫病。PCV2分离自发生断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的猪群,属     

猪圆环病毒病研究进展

<正>猪圆环病毒(PCV)病是近几年新发现的一种猪的传染病,由猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)引起猪的一种多系统功能障碍性疾病。猪圆环病毒病临床上以新生仔猪先天性脑震颤和断奶仔猪多系统衰竭综合征(postw-eaning multisystemic wastingsyn-drome,PMWS)等为主要特征。该病原体已被确认为圆环病毒(PCV-2),研究表明,Ⅱ型猪圆环病毒(PCV-2)不仅是断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的病原,而且能够引起多种猪病,主要有PMWS、猪皮炎及肾病综合征、猪增生性坏死性肺炎、猪呼吸与繁殖障碍综合征、猪细小病毒、传染性先天性震颤等均与PCV-2感染有重要关联。     

猪Ⅱ型圆环病毒病的系统诊断与防治技术研究进展

猪Ⅱ型圆环病毒病(PCV2)是近年来新发现的一种主要感染仔猪或青年猪的传染病,是世界各国公认的制约养猪业发展的重要疫病之一,给养猪业造成了严重经济损。猪圆环病毒病在临床上以断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)为主要特征,并能引发多种猪病,给养猪业造成经济损失。针对该病的流行病学、临床症状、病理变化、实验室诊断等研究进展进行总结,并结合我国实际提出了对该病的防制对策。     

猪圆环病毒的研究进展

<正>猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)是迄今为止发现的最小的一种脊椎动物病毒。可根据PCV致病性、抗原性及核苷酸序列的差异,将PCV划分成了无致病性(或PK-15源性)的猪圆环病毒1型(PCV1)和有致病性     

猪圆环病毒研究进展

猪圆环病毒感染（Poreineeireovirus nfection）是最近发现的一种新的传染病。该病主要侵害哺乳仔猪和育肥猪。其特征性临床症状为患猪体质不良．皮肤苍白。目前，因对本病认识不足。许多国家的命名也不一致。英国称之为猪圆环病毒感染，法国称之为猪衰弱综合征。而西班牙则命名为猪断奶后多系统衰弱综合征（PMWS）。由于本病新近发现。因此，该病的许多方面尚未明了。     

猪圆环病毒2型疫苗的研究进展

猪圆环病毒2型(PCV-2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,给全球养猪业造成了巨大经济损失。PCV-2感染可破坏动物机体的免疫系统,造成严重的免疫抑制,容易诱发多种细菌及病毒的混合感染与继发感染,给疾病的诊断和治疗带来巨大的困难。疫苗免疫接种是防控PCV-2感染的有效手段,近年来,全球市场上已先后推出PCV-2灭活疫苗、亚单位疫苗和嵌合疫苗,实验室也致力于研究新型活载体疫苗、核酸疫苗、标记疫苗和小RNA分子疫苗等,文章就PCV-2疫苗的研究进展进行综述,为有效防控猪圆环病毒病提供参考。     

猪圆环病毒病的防治

<正>猪圆环病毒病是由猪圆环病毒2型(PCV-2)感染所致的一种新的病毒病。该病发病率高,传播迅速,易引发继发感染,已成为影响养猪业的重要疾病。其临床特征为病猪体质消瘦、皮肤苍白、黄疸、腹泻、呼吸困难、衰弱、皮炎等;病理特征为全身组织器官炎性变化。     

猪圆环病毒病浅谈

近年来,随着市场行情的走俏,价格上扬,紧随而来的大中型养猪场的建立,引种或改良的数量骤增,一些新病也随之而来.目前,我地有不少猪场和农村散养户被猪2型圆环病毒病的袭击,造成较大的经济损失;通过对猪2型圆环病毒病的病原特性、流行病学、临床症状、病理变化、临床诊断及预防与控制的全面介绍,以便养殖人员和基层兽医人员对该病的认识和防范。     

兔支气管败血波氏杆菌的分离与16SrRNA鉴定

雅安市某兔场饲养的部分种兔发生一种以打喷嚏、流鼻涕、精神不振、呼吸困难、鼻孔出现粘液性或脓性分泌物为主要特征的传染病。通过对送检病兔病原的分离培养、形态染色观察、生化鉴定和半套式PCR反应确诊为兔支气管败血波氏杆菌感染,通过药物敏感实验筛选出了敏感药物。同时建立了快速鉴定兔支气管败血波氏杆菌的方法。     

家兔魏氏梭菌的分离与半套式PCR鉴定

魏氏梭菌病是危害养兔业的重要疾病。某养兔场发生一种以急性黑色水样腹泻或排带血的胶冻样粪便、盲肠出血、胃粘膜出血为主要特征的传染病,通过病原菌的分离培养、形态染色观察、生化鉴定和半套式PCR反应,分离出一株魏氏梭菌。通过药物敏感实验筛选出了敏感药物。实验结果为该病的正确防控措施的提出提供了参考。     

杀鲑气单胞菌杀鲑亚种和杀日本鲑亚种PCR检测方法的建立

杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)是一种重要的鱼类致病菌,可以感染多种海淡水鱼类。杀鲑气单胞菌包括5个亚种,目前常用的生理生化特征和16S rDNA序列分析方法很难实现亚种的快速精确区分。为实现杀鲑气单胞菌亚种的快速鉴定和检测,针对我国常见的杀鲑气单胞菌杀鲑亚种(A. salmonicida subsp. salmonicida)和杀日本鲑亚种(A. salmonicida subsp. masoucida),本研究开发了其特异性的PCR检测方法。根据Gene Bank已公布的杀鲑气单胞菌基因组信息,选择杀鲑亚种phoB基因和杀日本鲑亚种LOC111476736基因作为目标基因,根据其序列设计特异性引物,进一步对PCR反应的退火温度、引物浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度和酶浓度5个方面进行了优化,并测试了该方法的特异性、敏感性和应用效果。结果显示,2对引物分别可以扩增出杀鲑气单胞菌杀鲑亚种522 bp的phoB特异性基因片段和杀日本鲑亚种515 bp的LOC111476736特异性基因片段。杀鲑亚种特异性引物最适退火温度为64 ℃,10 µmol/L引物、2 mmol/L dNTPs、25 mmol/L MgSO4和1 U/µL KOD酶的最适添加量分别为1.5、2、1.5和0.5 µL。杀日本鲑亚种特异性引物最适退火温度为64 ℃,10 µmol/L引物、2 mmol/L dNTPs、25 mmol/L MgSO4和1 U/µL KOD酶的最适添加量分别为0.75、1、1.5和0.5 µL。以鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、美人鱼发光杆菌(Photobacterium damselae)、杀鱼爱德华氏菌(Edwardsiella piscicida)、杀鲑气单胞菌其他亚种等14种其他水产病原菌或常见环境菌为模板进行PCR检测,均无特异性条带。该方法对杀鲑气单胞菌杀鲑亚种的检测灵敏度为12.8 CFU/反应(菌体)或17.6 fg/反应(DNA),对杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种的检测灵敏度为23.8 CFU/反应(菌体)或27.2 fg/反应(DNA)。利用杀鲑气单胞菌杀鲑亚种和杀日本鲑亚种分别对大菱鲆(Scophthalmus maximus)进行人工感染实验,感染后取病鱼组织进行PCR检测,结果显示,本方法可以从感染后的大菱鲆中分别检测到相应病原。综上所述,本研究建立了杀鲑气单胞菌杀鲑亚种和杀日本鲑亚种的特异性PCR检     

Real-time RT-qPCR assay to detect sequences in the Piscine orthoreovirus-1 genome segment S1 associated with heart and skeletal muscle inflammation in Atlantic salmon

During the last decade, Piscine orthoreovirus was identified as the main causative agent of heart and skeletal muscle inflammation (HSMI) in Atlantic Salmon, Norway. A recent study showed that PRV-1 sequences from salmonid collected in North Atlantic Pacific Coast (NAPC) grouped separately from the Norwegian sequences found in Atlantic Salmon diagnosed with HSMI. Currently, the routine assay used to screen for PRV-1 in NAPC water and worldwide cannot differentiate between the two groups of PRV-1. Therefore, this study aimed at developing a real-time polymerase chain reaction (RT-qPCR) assay to target the PRV-1 genome segments specific for variants associated with HSMI. The assay was optimized and tested against 71 tissue samples collected from different regions including Norway, Chile and both coast of Canada and different hosts farmed Atlantic Salmon, wild Coho Salmon and escaped Atlantic Salmon collected in British Columbia, West Coast of Canada. This assay has the potential to be used for screening salmonids and non-salmonids that may carry PRV-1 potentially causing HSMI.     

凡纳滨对虾工厂化养殖水体中微小辐环藻HY01的分离鉴定及对不同氮源的响应

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)工厂化养殖池中,一株硅藻在养殖中后期长期占优势,因其个体较小且细胞外壳覆盖一层硅质膜,难以用光学显微镜直接准确鉴定其分类地位。通过对该藻株进行分离纯化,利用光学显微镜和电子显微镜,结合分子生物学技术,鉴定该分离藻株为微小辐环藻HY01 (Actinocyclus exiguous HY01)。藻细胞直径约为(11.4±1.0) μm,壳面上有很多小孔,光学显微镜下不可见,且壳中央的孔密度较壳边缘稀疏,壳边缘具有眼斑结构,有3~5个唇形突。以不同浓度氨氮和硝态氮为氮源培养微小辐环藻HY01,结果显示,微小辐环藻HY01均能利用氨氮和硝态氮进行生长,最适宜生长的氨氮和硝态氮浓度分别为600和882 μmol/L,但以氨氮为氮源时微小辐环藻HY01的最大细胞密度、最高比生长速率以及蛋白含量均低于以硝态氮为氮源,表明微小辐环藻HY01可能更喜欢利用硝态氮,但对较高浓度的氨氮有一定的耐受性。     

一株内循环流水养殖池塘光合细菌的分离鉴定及氮磷去除能力的研究

为提高内循环流水养殖池塘净化区域的净化能力,从重庆潼南区内循环流水养殖池塘的底泥中分离纯化得到一株光合细菌(命名为菌株GR01).通过形态学观察、生理生化鉴定、16S rDNA基因序列分析和扫描吸收光谱,对菌株进行分类鉴定.测定菌株GR01在不同温度、不同pH、不同盐度条件下的660 nm处的吸光度(A660),确定其...     

草鱼肠道中香港海鸥型菌的选择性分离与鉴定

从广东省某市池塘采集商品规格(体重2．0～2．5k)的草鱼(Ctenoharyngodon idellus)，利用加有头孢哌酮的麦康凯琼脂培养基，对其肠道中细菌进行选择性分离与鉴定。结果显示，12尾草鱼的肠道中，5尾可分离到具有以下特征的细菌：两端生鞭毛，菌体弯曲似海鸥状，革兰氏染色阴性，过氧化氢酶、氧化酶、尿酶和精氨酸双水解酶阳性，还原硝酸盐。不发酵、氧化或同化葡萄糖、甘露醇等15种常见的糖醇类，细菌形态、生化特性与报道的香港海鸥型菌相似，阳性率为41．7％。但在肌肉中未分离到此菌。进行分离细菌的16S rRNA基因序列分析，与GenBank中登录的4株香港海鸥型菌序列的同源性为99．7％～99．9％。由菌的培养特征、形态特点、理化特性、16S rRNA基因序列分析等多元鉴定的结果表明，从草鱼肠道中选择分离的细菌为香港海鸥型菌。药敏实验结果表明，所分离菌株对奥格门丁和亚胺培南的敏感性与报道的香港海鸥型菌有一定区别。     

Development and validation of a quantitative PCR to detect Parvicapsula minibicornis and comparison to histologically ranked infection of juvenile Chinook salmon, Oncorhynchus tshawytscha (Walbaum), from the Klamath River, USA

Parvicapsula minibicornis is a myxosporean parasite that is associated with disease in Pacific salmon during their freshwater life history phase. This study reports the development of a quantitative (real-time) polymerase chain reaction (QPCR) to detect P. minibicornis DNA. The QPCR assay targets the 18S ribosomal subunit gene. A plasmid DNA control was developed to calibrate cycle threshold ( C _T) score to plasmid molecular equivalent (PME) units, a measure of gene copy number. Assay validation revealed that the QPCR was sensitive and able to detect 50 ag of plasmid DNA, which was equivalent to 12.5 PME. The QPCR assay could detect single P. minibicornis actinospores well above assay sensitivity, indicating a single spore contains at least 100 times the 18S DNA copies required for detection. The QPCR assay was repeatable and highly specific; no detectable amplification was observed using DNA from related myxozoan parasites. The method was validated using kidney tissues from 218 juvenile Chinook salmon sampled during the emigration period of March to July 2005 from the Klamath River. The QPCR assay was compared with histological examination. The QPCR assay detected P. minibicornis infection in 88.1% of the fish sampled, while histological examination detected infection in 71.1% of the fish sampled. Good concordance was found between the methods as 80% of the samples were in agreement. The majority of the disconcordant fish were positive by QPCR, with low levels of P. minibicornis DNA, but negative by histology. The majority of the fish rated histologically as having subclinical or clinical infections had high QPCR levels. The results of this study demonstrate that QPCR is a sensitive quantitative tool for evaluating P. minibicornis infection in fish health monitoring studies.     

三疣梭子蟹病原弗氏柠檬酸杆菌的分离鉴定及定居因子抗原基因检测

2009年10月江苏赣榆地区某养殖场养殖的三疣梭子蟹出现大量死亡,症状主要表现为:病蟹行动缓慢、不摄食,蟹体消瘦,打开头胸甲可见肝胰腺、鳃、肌肉等内脏组织水肿,部分肝胰腺和肌肉组织呈腐烂状。从患病梭子蟹肌肉、肝胰脏、体内积液中分离到大量优势生长的细菌。人工感染试验,证明分离菌(JG091120-1)对健康三疣梭子蟹具有很强的致病性。对分离菌进行了形态特征、理化特性等常规表型生物学检验,同时利用分子生物学方法测定了代表菌株的16S rRNA和gyrB基因序列,其中分离菌16S rRNA基因序列长度为1 451 bp(登录号HQ170626),gyrB基因序列长度为1 186 bp(登录号HQ170627),分析了16S rRNA和gyrB两种基因序列的同源性。根据分离菌的表型及分子生物学特性,判定该菌为肠杆菌科枸橼酸属的弗氏柠檬酸杆菌。定居因子抗原cfa是肠杆菌科产肠毒素细菌的一种重要致病因子,利用特异性引物进行cfa基因的PCR扩增,分离菌可以扩增出大小在100 bp的基因片段,表明本次分离的病原弗氏柠檬酸杆菌具有cfa毒力因子。