草鱼呼肠孤病毒RT-LAMP检测方法的建立

根据草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的VP6基因序列设计一套RT-LAMP引物,以样品的cDNA为模板,在63℃恒温条件下进行扩增,扩增后加入SYBRGreenI染料染料,可通过肉眼直接观察到颜色变化来判定扩增结果。该方法操作简便,不需要特殊仪器,适用于水产养殖临床上对草鱼呼肠孤病毒的快速诊断。     

草鱼呼肠孤病毒RT—LAMP检测方法的建立

根据草鱼呼肠孤病毒（GCRV）的VP6基因序列设计一套RT—LAMP引物,以样品的cDNA为模板,在63℃恒温条件下进行扩增,扩增后加入SYBRGreenI染料染料,可通过肉眼直接观察到颜色变化来判定扩增结果。该方法操作简便,不需要特殊仪器,适用于水产养殖临床上对草鱼呼肠孤病毒的快速诊断。     

草鱼呼肠孤病毒抗原捕获ELISA检测方法的建立

研究以纯化的羊抗草鱼呼肠孤病毒多克隆抗体作为捕获抗体,抗草鱼呼肠孤病毒的单克隆抗体为检测抗体,建立草鱼呼肠孤病毒抗原捕获ELISA检测方法,其最佳反应条件是：羊多克隆抗体包埋浓度为2.5μg/mL,抗草鱼呼肠孤病毒单克隆抗体工作浓度为1:400稀释,以3％牛血清白蛋白作为封闭液。该方法的检测限为5×105 pfu/mL,且能够特异性检出发病草鱼内脏组织中的草鱼呼肠孤病毒。特异性试验结果表明该方法具有较高的特异性,与病毒性出血性败血症病毒、传染性造血器官坏死病毒和鲤春血症病毒等水产动物病毒株均不反应。该方法还具有较好的稳定性。     

一步法RT-PCR检测禽呼肠孤病毒的研究

根据已发表的禽呼肠孤病毒（ARV）S1133株S1基因序列，设计合成了一对扩增跨幅为532bp的引物。这对引物对ARV标准株，分离株以及人工感染SPF鸡跗关节组织抽提的核酸进行一步法RT-PCR扩增，即将反转录和PCR反应在一个PCR反应管中一次性完成。结果该方法对ARV4个标准株和5个分离株的扩增均获得了与预期大小一致的RT-PCR产物，而对照样品的扩增全为阴性；该方法最低可检测到0.16ng的ARV RNA，还可以直接从感染鸡关节组织抽提的核酸中检测到ARV RNA，表明该一步法RT-PCR对于ARV的检测是可行的。     

禽类呼肠孤病毒的分子生物学

禽类呼肠孤病毒(Avianreovirus,ARV)能感染多种禽类,并能分离出病毒,感染的禽类包括:鸡(Olsonetal.,1957)、鹅(Krauss,1965)、火鸡(Simmonsetal.,1972)、番鸭(Gaudryetal.,1972)、鸽(McFerranetal.,1976)、北京鸭(Jones&Guneratne,1984)一些鹦鹉类(Meulemansetal.,1983)和其它野鸟(Heffals-Kedmannetal.,unpublished)。国内王锡坤(1985)首次证实我国存在鸡病毒性关节炎以来,相继分离到多株鸡源性的病毒株。近几年流行于江浙、广东和福建一带的番鸭“花肝病”经吴宝成(2001)等证实是由番鸭的呼肠孤病毒(Muscovryduckreovirus,DRV)感…     

引起鸡跛行的呼肠孤病毒

在大多数鸡的肠道中通常生活着无害的呼肠孤病毒,但有时某些病毒株会引起病理变化,导致腱鞘炎。家禽的跛行有传染性和非传染性引起的,前者包括遗传、日粮环境或意外损伤。后者包括某些细菌如病致性葡萄球菌、大肠杆菌和支原体,特别是滑膜支原体,以及呼肠孤病毒。大多...     

一起鹅源番鸭呼肠孤病毒的分离鉴定

2019年1月以来,山东菏泽、聊城、济宁、潍坊等地雏鹅发生了肝脏有密集性白色坏死灶的传染病。为寻找发病原因,笔者对发病鹅进行了症状观察、病理剖检、病原分离和PCR检测。剖检结果表明,病死鹅肝、脾密集性坏死灶出现几率近100%。PCR检测和序列比对结果表明,病原初步确定为番鸭呼肠孤病毒。根据检测结果采取了免疫接种、消毒等综合措施,病情得到了控制。     

草鱼呼肠病毒研究进展

由草鱼呼肠病毒引起的草鱼出血病是一种高度传染性与致死性的病毒性疾病,该病的频繁暴发给我国草鱼养殖业及淡水养殖业造成了巨大的经济损失。论文就近年来对草鱼呼肠病毒在基因组序列及基因分型、流行病学、先天性免疫、检测方法、免疫防控等方面的研究进行综述,以期为草鱼呼肠病毒的研究提供借鉴和参考,为草鱼出血病预防和控制提供帮助。     

Inhibition of Grass Carp Reovirus Infection by DNA Aptamers against S10 Protein

Abstract

Grass Carp reovirus (GCRV) is one of the most pathogenic agents among aquareovirus isolates and has the ability to cause a severe epidemic outbreak of hemorrhagic disease, thus resulting in both a high mortality rate during the culture of Grass Carp Ctenopharyngodon idella and an enormous economic loss. Aptamers have been demonstrated to have strong promising applications in antiviral drug development. In the present study, a complementary DNA fragment encoding the S10 gene of GCRV was cloned. The S10 protein was expressed and purified. Aptamers for S10 protein were selected by the method of selective evolution of ligands by exponential enrichment (SELEX), and their characteristics and antiviral actions were examined. All targeting-selected aptamers formed a similar structure, forming a 5–7 base loop at the terminus. The results show that the aptamers could inhibit the GCRV infection. The most significant inhibitory effect was obsereved when the aptamers were added to the cell culture for 1 h before the cells were infected by GCRV. Our data showed that these novel molecular agents could be considered suitable candidates for anti-GCRV therapy.

Received August 23, 2016; accepted February 5, 2017Published online April 5, 2017     

小肽对幼龄草鱼生长性能的影响

用300尾3.74±0.23g的草鱼作日粮中不同添加量虾蛋白肽(平均肽链长为3.61)对幼龄草鱼生长性能影响研究。实验分为4组,每组75尾鱼,每25尾鱼饲于0.25m3的水族箱中,每组设3个平行水族箱。试验1、2、3组日粮中分别添加0.25%虾蛋白肽 0.75%鱼粉、0.5%虾蛋白肽 0.5%鱼粉、1%虾蛋白肽,对照组添加1%鱼粉。试验期56天。结果表明:(1)试验各组草鱼其特定生长率、蛋白保留效率、饲料系数均高于对照组,特别是试验2、3组与对照组有显著性差异(p<0.05);(2)草鱼日粮中适宜的虾蛋白肽添加量为0.5%。草鱼日粮中添加一定比例的虾蛋白肽均可提高饲料表观消化率和蛋白消化率,提高机体对日粮中氨基酸的利用率,从而增加体内氮沉积,减少肝胰脏和肠系膜脂肪储积。     

牛磺酸对草鱼生长效应研究

在饲料中添加0、200、400、600、800、1000、1400、1800mg/kg的牛磺酸,饲养草鱼种30d,研究牛磺酸对草鱼的生长效应。结果表明:①牛磺酸促进草鱼生长(除1800mg/kg添加量外)。添加量为600mg/kg时,特定生长率(SGR)、饲料转化率(FCR)和蛋白质效率表现为最好;②饲料中添加牛磺酸后,草鱼体水分含量下降,体脂增加,体蛋白含量增加,灰分含量、内脏/体重比、肥满度各试验组之间差异不显著。根据生产性能指标综合评定,我们建议草鱼饲料中牛磺酸最适添加量为600mg/kg。     

镁对草鱼生长和脂肪代谢的影响

本试验在以酪蛋白和明胶为蛋白源的纯化口粮(镁含量76.9 mg/kg)中添加不同水平的镁(0、150、300、600、1 200和2 400 mg/kg),研究了镁对草鱼生长和脂肪代谢的影响.选取540尾体重为(10.68±0.14)g的草鱼,随机分入6个处理,每个处理3个重复,每个重复30尾鱼.进行为期10周的生长试验.结果表明:1)日粮中添加适量镁显著提高草鱼的特定生长率、增重率和饲料效率(P<0.05),当饲料镁含量为692.0 mg/kg时,以上3项指标均达到最大值;2)日粮中添加适量镁能增加草鱼体脂沉积率、血脂水平、肝胰脏脂肪酶和节果酸脱氧酶活性(P<0.05),降低肝胰脏脂蛋白酯酶活性(P<0.05),但对肠道脂肪酶活性没有显著影响(P>0.05).由此可知,日粮中适当添加镁能显著促进草鱼生长,添加量为600 mg/kg(日粮镁含量692.0 mg/kg)时效果最好;镁能够增慢草鱼肝胰脏的脂肪合成能力,降低其脂肪转运能力;镁使肝脂蛋白酯酶活性降低,导致高血脂.     

生长中期草鱼蛋氨酸需要量的研究

本试验通过研究饲料蛋氨酸水平对生长中期草鱼生长性能和消化吸收能力的影响,旨在确定生长中期草鱼的蛋氨酸需要量。选用平均体重为(259.00±0.48)g的草鱼900尾,随机分为6个处理(每个处理5个重复,每个重复30尾),分别饲喂蛋氨酸水平为2.19、4.72、7.18、9.67、12.21和14.69 g/kg的试验饲料,试验期49 d。结果表明:与蛋氨酸水平为2.19 g/kg时相比,提高饲料中蛋氨酸水平显著地提高了生长中期草鱼的增重、摄食量、饲料效率、特定生长率和蛋白质效率(P<0.05)。当蛋氨酸水平达到7.18 g/kg时,增重和特定生长率达到最大值。蛋氨酸水平显著影响生长中期草鱼的肝胰脏和肠道重量、肝胰脏和肠道蛋白质含量以及肠道长度(P<0.05),对肝体指数没有显著影响(P>0.05)。当蛋氨酸水平≥4.72 g/kg时,肝胰脏和肠道重量以及肠道长度在各处理间差异不显著(P>0.05)。肝胰脏和肠道蛋白质含量分别在蛋氨酸水平为9.67和12.21 g/kg时达到最大值。当蛋氨酸水平为7.18 g/kg时,肝胰脏和肠道胰蛋白酶、糜蛋白酶和脂肪酶活性均达到最大值。当蛋氨酸水平为4.72 g/kg时,肠道淀粉酶活性达到最大值,且与其他处理间差异达到显著水平(P<0.05)。蛋氨酸水平显著影响各肠段Na+,K+-ATP酶、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转肽酶和肌酸激酶活性(P<0.05)。由此得出,饲料中适宜水平的蛋氨酸可以提高生长中期草鱼的生长性能和消化吸收能力。以特定生长率为标识,当饲料胱氨酸含量为1.61 g/kg时,生长中期草鱼(259～498 g)的蛋氨酸需要量为10.41 g/kg饲料或34.71 g/kg蛋白质。     

草鱼幼鱼对缬氨酸需要量的研究

试验选用体重(9.5±0.3)g的草鱼幼鱼,随机分成6个组,每组3个重复,每个重复20尾;以花生仁粕、酪蛋白及明胶为蛋白质源,分别饲喂缬氨酸水平为7.3～22.3 g/kg的6组等氮半精制饲料(粗蛋白质含量为32%),经70 d的生长试验研究其日粮缬氨酸的最适需求量.试验结果表明:日粮缬氨酸水平对草幼鱼的增重率、特定生长率、蛋白质效率、肌肉RNA/DNA比率、鱼体常规成分组成、消化酶活性、肝胰脏谷草-谷丙转氨酶和谷氨酸脱氢酶活性以及血液学指标都有显著的影响(P<0.05).随日粮缬氨酸水平的增加,增重率,特定生长率、蛋白质效率及肌肉RNA/DNA比率均呈先升后降趋势,均在16.3 g/kg组达到最大值(P<0.05).以增重率、特定生长率、肌肉RNA/DNA比率为基础对饲料缬氨酸水平进行二次回归分析,确定草鱼幼鱼日粮(32%粗蛋白质)缬氨酸适宜需要量分别为15.6、15.1及16.0 g/kg(日粮基础)或48.8、47.2及50.0 g/kg(日粮蛋白质基础).     

鱼虾4号和肉碱对草鱼生长的影响

关于鱼虾４号和肉碱对水产动物生长的影响，已有很多学者进行了对比试验研究，（蔡学峰等，２００１；叶元土等，２００１）。为了进一步了解二者对水产动物生长、品质等方面的影响，我们近期又在草鱼养殖中进行了重复验证。１材料与方法１．１试验地点 西南农业大学水产系室内循环养殖系统。１．２试验时间 ２００１年３月至２００１年４月１．３试验鱼 试验鱼来自本系试验渔场，每箱放养试验草鱼１５尾。在水族箱中用普通饲料驯养２周待草鱼适应环境后再开始试验。每个处理设２个平行试验组。１．４试验饲料 试验饲料为市售商品饲料。其组…     

荆州地区草鱼生长状况及血清生化指标参考值的初步探讨

选取湖北省荆州地区池塘养殖草鱼,针对其生长、生物学特性及12项血清生化指标进行了检测,这将对草鱼血清生化指标参考值的建立以及健康养殖和调控,具有一定的参考意义。由于影响动物血清生化指标的因素较多,该试验中草鱼样本数相对较少,在今后的研究中尚需加大样本量进行更深入的探讨。