FSH和胰岛素对牛卵泡颗粒细胞长期培养的影响

McCoy’s5a为基础培养液添加硒、转铁蛋白、雄烯二酮、谷氨酰胺 ,对牛卵巢上大 (直径 >8mm)、中 (4mm <直径 <8mm)、小 (直径 <4mm)非闭锁卵泡的颗粒细胞进行无血清培养 ,研究添加不同浓度的促卵泡激素和胰岛素对颗粒细胞增生、分化和激素分泌的影响。结果 :FSH可以诱导颗粒细胞增生及雌二醇合成能力 ,颗粒细胞的雌二醇合成能力与生理浓度的FSH呈剂量依赖方式。胰岛素对大、中、小卵泡颗粒细胞增生和雌二醇分泌有促进作用。     

牛卵泡颗粒细胞无血清培养的形态学观察

以McCoy＇s 5a为基础培养液添加硒、转铁蛋白、雄烯二酮、谷氨酰胺，对牛卵巢上大（直径＞8mm）、中（4mm＜直径＜8mm）、小（直径＜4mm）非闭销卵泡的颗粒细胞进行无血清培养。结果表明，McCoy＇s 5a无血清培养中的颗粒细胞形态与分化特点类似于体内情况，说明颗粒细胞在该培养条件下，其功能可能更接近体内的生理状况。     

大鼠卵泡颗粒细胞无血清培养及猪促卵泡素（pFSH）对其雌激素分泌的影响

大鼠卵泡颗粒细胞无血清培养及猪促卵泡素（ｐＦＳＨ）对其雌激素分泌的影响／周虚（长春农牧大学畜牧水产系１３００６２）在雌性动物体内，促卵泡素（ＦＳＨ）能够刺激卵泡颗粒细胞的增生及类固醇合成［１］。在体外培养时，颗粒细胞也能合成和分泌类固醇激素和溶纤蛋白...     

能量水平和来源对后备母猪血液代谢产物、激素分泌及卵泡液成分的影响

选取54头体质量（59&#177;4.2）kg的长白&#215;大白杂交母猪，采用3&#215;2因子设计，研究日粮能量水平和来源对血液代谢产物、激素分泌及卵泡液成分的影响。3个能量水平分别为NRC推荐能量需要的87.5%、100%和112.5%；各能量水平下分别添加淀粉和油脂。第2个发情期开始后的第18和19天分别收集血样和卵泡液。结果表明，能量水平对血液中葡萄糖、甘油三酯等代谢产物的影响差异不显著（P〉0.05），能量来源对血液中葡萄糖浓度无显著影响（P〉0.05），但日粮中添加脂肪极显著提高了血液中甘油三酯、总胆固醇浓度（P〈0.01）。高能组血液中食后胰岛素浓度曲线下面积（Ins AUC）、胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）、瘦素（Leptin）浓度显著高于低能组（P〈0.05），淀粉和脂肪组间差异不显著（P〉0.05）。提高能量水平显著增加促黄体素（LH）的脉冲分泌（P〈0.05），日粮中添加脂肪显著提高血液中雌二醇（E2）浓度（P〈0.05）。随能量水平提高，显著增加大卵泡数和卵泡液中IGF-Ⅰ、E2浓度（P〈0.05），能量来源对大卵泡数和卵泡液成分影响不显著（P〉0.05）。由结果分析可知，日粮提高能量水平促进血液中代谢激素IGF-Ⅰ、LH的分泌并增加大卵泡数及卵泡液中IGF-Ⅰ和E2浓度，日粮中添加脂肪提高血液中甘油三酯、总胆固醇浓度并促进雌激素的分泌。     

促性腺激素对小鼠胚胎卵巢卵泡体外发育的类固醇激素分泌的作用

利用小鼠胚胎卵巢无血清培养体系研究了FSH,hCG对小鼠胚胎卵巢卵泡发育的作用。结果发现，（1）FSH处理组胚胎卵巢卵泡体外生长发育要优于ITS对照组；体外培养15d后，FSH处理组胚胎卵巢睾酮分泌量显著增加;在整个培养过程中，FSH诱导胚胎卵巢分泌少量雌二醇。（2）hCG对胚胎卵巢卵泡发育的作用是双相的。在培养早期，hCG处理组进入生长相的小卵泡显著多于ITS对照组，相应地此时雌二醇水平较高；随着卵巢培养的继续，雌二醇水平显著降低，hCG处理组总卵泡数开始急剧下降，大量小卵泡团缩退化；到培养结束时，处理组卵巢内小卵泡已所剩无几，但残存的生长卵泡卵母细胞平均直径仍显著大于ITS对照组。此时伴随睾酮分泌量的增加，雌二醇的分泌量重新增加。（3）FSH＋hCG处理组卵泡发育类似hCG处理组，体外培养15d后，FSH＋hCG促进鼻酮分泌，而雌二醇的分泌的分泌有促进作用，雌二醇可能是促性腺激素发挥促卵泡体外发育和存活作用所必需的；hCG可促进卵泡提前生长发育，担后期加速胚胎卵囊小卵泡库的耗竭。     

牛卵巢卵泡Smad9表达模式的研究

本研究旨在探究Smad9在牛卵巢卵泡中的表达模式,为研究Smad9的功能奠定基础。从屠宰场获取牛卵巢,分离得到小卵泡(2 mm≤直径≤4 mm)、中卵泡(4 mm直径8 mm)、大卵泡(直径≥8 mm),用免疫组织化学技术对不同直径卵泡的Smad9蛋白进行定位分析;通过机械分离法分离卵泡颗粒细胞,用qPCR和Westernblotting技术检测Smad9在小卵泡、中卵泡、大卵泡颗粒细胞中的相对表达量。结果显示:在牛的卵泡中,Smad9在颗粒细胞和膜细胞层中表达;小卵泡和中卵泡颗粒细胞中Smad9mRNA转录本相对丰度低于大卵泡颗粒细胞(P0.01),而中卵泡颗粒细胞内Smad9 mRNA转录本相对丰度低于小卵泡(P0.05);中卵泡和小卵泡颗粒细胞中Smad9蛋白的表达量低于大卵泡(P0.01),中卵泡颗粒细胞中Smad9蛋白表达量是小卵泡的0.9倍(P0.05)。综上,Smad9主要在牛卵泡颗粒细胞层中表达,且大卵泡表达量极显著高于小卵泡和中卵泡。     

牛卵泡颗粒细胞无血清培养的形态学观察

McCoy’s5a为基础培养液添加硒、转铁蛋白、雄烯二酮、谷氨酰胺 ,对牛卵巢上大 (直径 >8mm)、中 ( 4mm <直径 <8mm)、小 (直径 <4mm)非闭锁卵泡的颗粒细胞进行无血清培养。McCoy’s5a无血清培养中的颗粒细胞形态与分化特点类似于体内情况 ,说明颗粒细胞在该培养条件下 ,其功能可能更接近体内的生理状况     

FSH、LH对体外培养的牦牛卵泡颗粒细胞凋亡及E_2、P分泌功能的影响

为了探明促卵泡素(Follicle stimulating hormone,FSH)和促黄体素(Luteinizing hormone,LH)对体外培养的牦牛卵泡颗粒细胞凋亡及甾体激素分泌的影响,揭示促性腺激素调控卵泡发育的机理,采用细胞培养和显微观察技术,建立了牦牛卵泡颗粒细胞体外培养体系,观察分析牦牛卵泡颗粒细胞体外培养的生长特征和凋亡的形态特征;采用流式细胞技术(Flow cytometry,FCM)和放射免疫测定技术(Radioimmunoassay,RIA),分析了添加不同浓度的FSH和LH对牦牛卵泡颗粒细胞凋亡和雌二醇(Estradiol,E2)、孕酮(Progesterone,P)分泌的影响。结果显示,体外培养的牦牛卵泡颗粒细胞呈现出典型的上皮样细胞生长特性,具有典型的"S"形生长曲线,体外培养的牦牛颗粒细胞偶尔可见细胞核浓缩、边集化、染色质固缩、内质网疏松等凋亡的形态特征。在添加0.050~5.000IU·mL-1FSH,随着浓度的增加,凋亡细胞比例逐渐降低,E2和P水平呈上升趋势;在添加浓度达到5.000IU·mL-1时,凋亡细胞比例最低降到7.3%,与对照组差异极显著(P0.01)。低浓度的LH(0.050~0.500IU·mL-1),可以抑制颗粒细胞凋亡,促使E2和P分泌增加;高浓度的LH(5.000IU·mL-1)则促使颗粒细胞凋亡,对颗粒细胞分泌E2和P的影响不明显。这一结果表明,FSH和LH可通过调节牦牛颗粒细胞的凋亡及分泌功能,在调控卵泡发育及排卵的过程中发挥重要作用。     

鸭异体卵巢移植后生殖激素水平变化及卵泡颗粒细胞凋亡的研究

选取健康麻鸭进行同种异体卵巢移植，移植后测定45日龄、75日龄、105日龄、开产日龄、开产后30日龄和开产后60日龄时血浆促卵泡素（FSH）、促黄体素（LH）、雌二醇㈤水平；并且在产蛋期内不同的时间获取各个级别卵泡的颗粒细胞，检测其凋亡率。结果显示，移植后FSH、LH、E2的分泌均高于对照组，在开产30日龄时差异显著，表明移植成功并且卵巢发育良好，卵巢功能正常；移植后各级卵巢颗粒细胞凋亡率显著低于对照组，并且随着卵泡直径的增加，颗粒细胞的凋亡率呈现下降的趋势，表明卵巢移植可以降低卵泡颗粒细胞凋亡率。结论：同种异体卵巢移植卵巢发育良好，具用正常的分泌功能，可以降低卵泡颗粒细胞的凋亡率。     

性未成熟小母猪注射PMSG对卵泡闭锁及颗粒凋亡的影响

为探讨孕马血清促性腺激素（PMSG）对2－3月龄性未成熟的小母猪卵巢中卵泡发育，卵泡闭锁以及卵泡颗粒细胞凋亡的影响，就其注射PMSG后24，48，72，96h卵巢中各类卵泡数量，颗粒细胞凋亡比例及外周血浆中类固醇激素水平等进行了研究。结果如下：（1）未注射PMSG前，性未成熟小母猪卵巢表面卵泡总数（10．5个／卵巢）及各类卵泡数（小卵泡9个／卵巢，中等卵泡数1．5个／卵巢）均较少；注射PMSG后24h，小卵泡数（24个／卵巢），中等卵泡数（6．5个／卵巢）和大卵泡数（1．5个／卵巢）与对照组相比均明显增多；至注射PMSG后96h，小卵泡（4．5个／卵巢）和中等卵泡数（1．5个／卵巢）均明显减少，但大卵泡数量仍较多（4．5个／卵巢）。（2）未注射PMSG前，性未成熟小母猪中类卵泡中的颗粒细胞凋亡比例均较高，小卵泡和中等卵泡分别为24．8％和34．4％；注射PMSG事24h，颗粒细胞凋亡比例显著降低（P＜0．05），小卵泡和中等卵泡分别为10．7％和13．7％，至PMSG事72h，小卵泡和中等卵泡的颗粒细胞凋亡比例开始显著升高（P＜0．05），而大卵泡在出现后颗粒细胞凋亡比例较低且无较大波动。（2）在未注射PMSG前，血清中的雌二醇含量仅为15．3ng/L，孕酮则由于含量大低而未能检测到；在注射PMSG后，雌二醇和孕酮水平均升高，雌二醇在注射PMSG后72h时达最高值59.2ng/L，孕酮在注射PMSG后48h出现最高值1.7 μg/L。以上结果表明，在性未成熟的2－3月龄小母猪，卵泡颗粒细胞凋亡比例很高，导致卵巢表面各类卵泡数量均较少，血清类固醇激素水平也很低，而PMSG可在其尚未建立起自身下丘脑－垂体－性腺轴的激素调节机制情况,显著抑制颗粒细胞亡，从而抑制卵泡的闭锁，促进卵泡的发育，并进而提高血清中类固醇激素的水平。