荷花遗传多样性的ISSR标记分析

【目的】探讨荷花(Nelumbo nucifera Gaertn.)资源的遗传多样性和亲缘关系,为荷花资源的保护利用、品种鉴定及育种效率提高提供参考。【方法】利用ISSR分子标记技术,对6份野生半野生荷花品系和27份荷花栽培品种进行遗传多态性分析,从40条引物中筛选扩增效果较好的5条引物用于试验。采用POPGEN32软件计算供试材料的等位基因数(Na)、有效等位基因数(Ne)、Nei’s基因多样度(He)和Shannon多态性信息指数(I),利用UPGMA方法进行聚类分析。【结果】用筛选出的5条引物(UBC807、UBC811、UBC836、UBC840、UBC880)分别对33份荷花材料基因组DNA进行扩增,共扩增出54条清晰条带,其中多态性条带25条,多态性条带比例为46.3%。应用引物UBC811、UBC840和UBC880的15个特异性位点绘制了33份荷花的DNA指纹图谱,这些位点组合后可以将33份荷花材料逐一区分开。33份荷花资源的Ne为1.276 6,He为0.192 0,I为0.323 7,且野生半野生品系的各项参数值均低于栽培品种。利用UPGMA法将供试荷花资源分为4个类群,6个野生半野生荷花品系均在第Ⅰ类群,3个中、美杂种莲种系和13个中国莲种系的品种聚在第Ⅱ类群,藕莲和花莲分属于第Ⅰ类群和第Ⅱ类群,第Ⅲ和第Ⅳ类群分别仅包括1个和2个品种。【结论】供试33份荷花资源的遗传多样性水平较低。聚类结果显示,荷花资源间的亲缘关系与地理分布距离相关,中、美杂种莲种系品种与中国莲种系品种的亲缘关系较近。加强对全国各地荷花资源的调查与保护,是荷花遗传多样性保护的重要工作。     

利用ISSR标记分析烟草种质的遗传多样性

 【目的】分析烟草种质的遗传多样性水平，揭示不同烟草类型间的遗传关系，为充分发掘、利用种质提供依据。【方法】对包括不同烟草类型的119份种质进行了ISSR分析，估算其遗传相似系数，利用UPGMA法作聚类图。【结果】利用21个ISSR引物共扩增出672条带，全部为多态性带，其中116条为普通烟草特有带。普通烟草种质间的遗传相似系数变化范围为0.779～0.945，其中烤烟种质间遗传相似系数变化范围在0.812～0.933之间；不同烟草类型基本可聚为相应的亚类或小类，引进烤烟品种与国内品种并未聚为各自类别。普通烟草与其它烟草种间遗传相似系数较小；普通烟草与其假定祖先种N.sylvestris聚为一类，同为碧冬烟草亚属花烟草组的N.longiflora和N.plumbaginifolia聚为一类，聚类结果与种间遗传分化吻合。【结论】中国现有烤烟种质遗传多样性水平较低；为拓宽烤烟育成品种的遗传基础，应充分发掘野生烟草的遗传潜力。     

木荷种群遗传多样性的ISSR分析

利用ISSR分子标记技术,对木荷种群的遗传多样性和遗传分化进行分析.用12个引物对9个木荷种群共180个个体的样品进行扩增,共测到245个位点,其中多态位点221个,多态位点百分率(P)为90.20%.9个种群的P平均为53.02%.木荷种水平的Shannon信息指数(Ⅰ)为0.4548,Nei指数(h)为0.3016.各种群Ⅰ平均为0.2914,h平均为0.1974.表明木荷物种以及种群水平均具有较高的遗传多样性.AMOVA分子差异分析表明木荷种群的遗传变异34.37%存在于种群间,65.63%存在于种群内,种群间的基因分化系数(Gst)为0.3454.木荷种群间的基因流(Nm)为0.9476.木荷9个种群间的遗传距离平均为0.1547.利用算术加权平均数法(UPGMA)对木荷9个种群进行聚类,结果可分为3大类群.     

米槁天然种群遗传多样性的ISSR标记分析

【目的】评价米槁(Cinnamomum migao H.W.Li)天然种群的遗传多样性,为其遗传资源的保护和利用提供理论依据。【方法】采用ISSR分子标记,对采自贵州的8个米槁天然种群及其62株个体的遗传多样性和遗传结构进行分析,基于遗传相似系数和遗传距离对8个种群进行UPGMA聚类分析,并对62株米槁建立PCoA散点聚类图。【结果】米槁8个天然种群通过19条引物扩增出167个多态性条带,多态性条带比例为89.78%。米槁种群间平均观测等位基因数为1.572 6,有效等位基因数为1.390 9,Nei’s基因多样性指数为0.223 3,Shannon’s多样数指数为0.328 2,多态性条带比例为57.26%,基因分化系数为0.263 6,米槁不同天然种群上述遗传多样性指标均显示为物种水平种群水平;8个米槁种群的遗传距离均不高(0.046 4~0.241 3),种群间的遗传变异程度较低;米槁种群间的基因流为1.396 81,说明种群间存在基因流动,但种群间的遗传分化较小。UPGMA聚类结果显示,8个种群中镇宁(ZN)单独为一类,罗甸1(LD1)、罗甸2(LD2)、望谟1(WM1)、望谟2(WM2)聚为一类,册亨(CH)、荔波(LB)、贞丰(ZF)聚为一类,聚类结果反映出地理距离近的种群聚在一起;PCoA散点聚类图显示,62株米槁明显分为2个谱系,谱系1为罗甸2个种群,谱系2包含镇宁(ZN)、贞丰(ZF)、册亨(CH)、荔波(LB),望谟2个种群兼具2个谱系的遗传信息。【结论】米槁种群间和种内遗传多样性丰富,具有进一步改良的潜力。     

基于ISSR分子标记分析新疆野杏遗传多样性

[目的]通过ISSR分析标记技术,分析新疆野杏种质资源的遗传多样性,为该资源的利用和保护提供理论依据和技术支持.[方法]利用ISSR分子标记对新疆伊犁霍城县大西沟的61份野杏单株进行遗传多样性分析.[结果]用21条引物对样品进行PCR扩增,共扩增出437条条带,其中多态性条带408条,多态性条带比率为92.46;.通过软件计算出有效等位基因数(Ne)、Nei's基因多样性指数(H)和Shannon信息多样性指数(Ⅰ)分别为1.577 5、0.334 1、0.499 0.引物平均多样性信息指数(PIC)为0.91.说明野杏的遗传多样性较为丰富.利用NTSYS-PC2.1软件进行UPGMA聚类,各个样品间的遗传相似系数在0.62～0.95.[结论]新疆霍城大西沟的野杏具有丰富的遗传多样性,遗传多态性比率达到90;以上,引物平均多样性信息指数(PIC)较高,接近1.61份野杏单株间的遗传相似度较高,亲缘关系较近.     

利用ISSR分子标记分析香蕉品种的遗传多样性

利用ISSR分子标记技术对威廉斯B6及其选育亲本等国内外32个香蕉品种(系)的遗传多态性进行分析。从98对通用ISSR引物中筛选出7对多态性引物,共扩增出64条DNA带,其中51条为多态性带,多态性比例为79.69%,平均每个引物扩增的DNA带数为9.12条。供试香蕉品种间的遗传相异系数范围为0.0345～0.7500,平均相对遗传相异系数为0.03051。聚类分析结果表明,所有供试的32个香蕉品种(系)可分为四个类群,其中巴引103、野酸蕉和花蕉(观赏)分别为一类,其余29个品种(系)聚为一类。     

利用ISSR标记分析青麻种质资源遗传多样性

【目的】利用分子标记分析来自中国11个省（市）的48份青麻种质资源的遗传多样性,为青麻资源利用和育种提供分子生物学依据。【方法】利用内部简单重复序列多态性（ISSR）分子标记检测青麻种质资源的遗传多样性。【结果】在48份青麻种质资源中,9条ISSR引物扩增出82条带,多态条带比率（PPB）为88.89%,扩增产物片段大小在0.1～3.0 kb。基于UPGMA聚类,将青麻分为3大类。【结论】中国青麻的遗传多样性水平较高,实验结果支持青麻起源于中国。     

利用ISSR分子标记分析44份红麻种质资源的遗传多样性

[目的]揭示不同地区来源红麻材料的遗传多样性及亲缘关系,为红麻遗传改良和分子标记辅助育种提供依据。[方法]用ISSR分子标记方法分析44份不同地区来源红麻种质资源的遗传多样性和亲缘关系,从91个ISSR引物中筛选出多态性较好、条带最清晰的21个引物对其进行PCR扩增,采用NTSYSpc-2．10e分析软件计算样品间的遗传相似系数,同时用UPGMA进行聚类分析,构建聚类图。[结果]21条引物共扩增出169条带,平均每个引物扩增出8．05条,其中多态性条带共141条,多态性条带比率为83．4％;当在遗传相似系数为o．887处作切割线L1时,可将44份红麻材料中的32份栽培品种与12份野生半野生材料分开;当在遗传相似系数为o．897处作切割线L2时,可将32份栽培种进一步细分为4个亚群;栽培种与野生半野生种间的遗传相似系数在o．47～0．91之间,表现出较大的遗传差异性,而32份栽培种材料中,遗传相似系数在o．85～0．97之间,表明栽培种材料间的亲缘关系较近,遗传多样性较为狭窄。[结论]ISSR可以较好地确定红麻种质资源的遗传多样性的亲缘关系,能够为杂交育种亲本选择组配提供有价值的分子水平上的信息,可为开展红麻核心种质DNA图谱研究奠定基础。     

中华鳖两个地理种群遗传多样性的ISSR分析

利用ISSR分子标记技术对中华鳖2个不同地理种群(淮河群体、台湾群体)的群体遗传多样性进行分析研究。从32个ISSR引物中筛选出8个引物对2个中华鳖群体37个个体进行扩增,获得77个重复性好且谱带清晰的扩增位点,其中多态性位点47个,多态位点百分率为61.04%;2个群体的多态位点比例分别为59.57%和51.06%。Nei基因多样性分别为0.165 7和0.152 4,Shannon信息指数分别为0.216 4和0.197 7。淮河群体的遗传多样性略高于台湾群体,群体间遗传距离为0.083 7。UPGMA聚类分析显示37个个体聚成两个类群。分析结果表明2个中华鳖群体的遗传多样性相对贫乏,2个养殖群体经过较多世代的人工选育与繁殖可能形成了趋于稳定的独立遗传结构。     

利用ISSR和AFLP标记分析石斛种质资源的遗传多样性

本研究利用ISSR和AFLP两种分子标记对51个药用石斛材料（包括35个铁皮石斛种质资源）进行遗传多样性研究。利用ISSR标记筛选出6条引物,共扩增出79条带,平均每条引物扩增条带数约为13.17条,多态条带比率都达到100%。利用AFLP标记筛选出5对引物,共扩增207条带,其中206条具多态性,多态性比率高达99.52%。两标记分析获得的群体种系间关系与变异基本一致,且群体内的分化较小,群体间的分化较大,群体间的基因流动较小。所得到的聚类图表明：ISSR和AFLP标记技术能有效地将研究材料分开,且基本反映了它们之间的亲缘关系,说明两种标记均适合用于石斛植物的遗传多样性研究。     

不同天麻品种中天麻素含量的比较分析

为分析不同天麻(Gastrodia elata Bl.)品种中的天麻素含量,采用高效液相色谱法,以HypersilODS-2色谱柱为固定相,乙腈-0.05％(V/V)磷酸溶液(3∶97)为流动相,比较了乌天麻(产地云南)、红天麻、乌红杂交天麻(产地湖北麻城)中天麻素含量.结果表明,乌天麻中的天麻素含量为0.423％,马红天麻为0.321％,红天麻为0.225％.大别山低海拔地区种植的乌红杂交天麻中天麻素含量高于红天麻.     

天麻复合压块栽培方法研究

[目的]考察天麻复合压块栽培下的优势,为天麻的栽培提供一种新的有效的方法。[方法]通过与仿野生木棒伴栽法比较分析,考察复合压块栽培法的优势。[结果]复合压块栽培法天麻增殖率较木棒伴栽法高,且成本比伴栽法低;2006～2008年复合压块栽培法分别比木棒伴栽法增产5%、6%和9%。[结论]复合压块栽培法优于仿野生木棒伴栽法。     

天麻的研究进展

天麻是一种重要的中药材,受到人们的广泛关注。综述了天麻的分类、生活史、分子水平研究、化学成分、药理作用以及栽培技术等,并对其开发利用的发展方向进行了分析和讨论。     

不同栽培措施对天麻产量和产量结构的影响研究

[目的]研究遮阳网的遮阴度和高度以及覆盖物的种类和覆盖厚度对天麻产量和产量结构的影响。[方法]在70％与90％遮光率的遮阳网和2．5、2．0m高度下,测定平地栽培天麻的产量及产量构成以及树叶和沙土分别在3、5、10cFn的覆盖厚度下平地栽培天麻的产量及产量构成。[结果]结果表明：在7～9月份高温季节,采用90％遮光率的遮阳网能有效降低天麻生长层温度,对天麻产量的提高效果明显;青冈树叶覆盖5cm的厚度是最佳的覆盖处理。[结论]在平地栽培情况下,遮阳对天麻的产量及产量结构影响很大.     

天麻多糖的超声波提取工艺研究

为了进一步开发利用天麻多糖,采用超声波提取法从天麻中提取天麻多糖,在单因素试验的基础上,用响应曲面法建立超声提取的二次响应曲面方程,考察了提取温度、提取时间和料水比对天麻多糖超声提取的影响。结果表明,超声波提取法可使天麻多糖提取率得到较大提高,其最佳提取工艺条件为:提取温度66℃,提取时间34 min,料水比1:45,在此工艺条件下,天麻多糖提取率为32．78％。     

野生与人工栽培天麻多糖清除自由基作用研究

[目的]研究野生与人工栽培天麻多糖清除自由基作用。[方法]用邻苯三酚自氧化法、Fenton反应法和DPPH体系法对野生、人工栽培天麻多糖清除O2-.、.OH及DPPH.3种自由基的效果进行比较。[结果]野生、人工栽培天麻多糖对O2-.、.OH和DPPH.3种自由基清除效果相近,均具有较好清除作用,存在良好的量效关系,即随着其质量浓度的增大,清除效果逐渐增强。野生天麻多糖清除O2-.、.OH、DPPH.3种自由基的IC50值分别为1.01、2.61和2.44 mg/ml;人工栽培天麻多糖清除O2-.、.OH及DPPH.3种自由基的IC50值分别为1.08、2.75和2.54 mg/ml。[结论]野生、人工栽培天麻多糖均具有很好的体外抗氧化活性。     

UPLC－MS／MS法检测不同产地野生天麻中天麻素及对羟基苯甲醇含量

[目的]采用超高效液相色谱质谱联用法同时测定6个产地天麻中天麻素和对羟基苯甲醇含量。[方法]采用Phenomenex C18柱(50 mm×2.1 mm,3μm),乙腈-5 mmol/L乙酸铵(0.1%甲酸)水溶液作流动相,流速0.2 m L/min;多反应监测正离子模式(MRMPos)。[结果]天麻素在0.122 0~1 220.000 0 ng/m L、对羟基苯甲醇在0.502 0~5 020.000 0 ng/m L浓度范围内呈良好的线性关系。所有样品中天麻素和对羟基苯甲醇的含量均超过《中国药典》2015年版中"天麻"含量测定要求,按照2种成分总含量排序从大到小依次为云南昭通、贵州毕节、四川雅安、重庆城口、陕西汉中、甘肃陇南。[结论]该方法精密度、重现性和分离效果好,分析快速、准确,适用于对天麻中天麻素和对羟基苯甲醇的定性、定量研究。     

西藏仿野生种植天麻与野生天麻中天麻素含量的对比分析

[目的]分析西藏仿野生种植天麻Gastrodiaelata中天麻素含量,并将其与野生天麻中天麻素的含量进行对比。[方法]采用HPLC测定天麻素含量。[结果]西藏波密县仿野生种植天麻的天麻素介于0.41～2.28 g/kg,其平均含量为0.88 g/kg,比当地野生天麻高4倍。[结论]在生长的生态环境、生长年限、采挖季节相同或较接近情况下,仿野生种植天麻品质高于当地野生天麻。在波密县推广仿野生种植天麻技术切实可行,该项目有较强的经济价值。     

红天麻箭麻发育进程中天麻素和多糖含量的变化规律研究

[目的]研究红天麻箭麻在不同发育阶段的天麻素和天麻多糖含量的相关性规律,确定其品质特征,为红天麻GAP质量控制提供科学依据。[方法]在川天麻主产区采集传统主流红天麻品系箭麻块茎样品,在原产地室内采用原位动态沙藏法贮藏箭麻;在采样后沙藏10、80、95、175和220 d分别采集天麻块茎样品,采用高效液相色谱法和苯酚-硫酸比色法分别测定天麻素含量和天麻多糖含量,并运用SPSS17.0版统计软件分析在红天麻箭麻不同发育阶段进程中天麻素和天麻多糖含量的相关性规律。[结果]川产红天麻箭麻块茎的天麻素和天麻多糖的平均含量分别为0.36%和8.17%;随着天麻沙藏休眠期-萌动期-抽茎开花-果实成熟至腐烂发育阶段进程增加,红天麻箭麻块茎的天麻素和天麻多糖含量下降,且呈极显著的负相关(P<0.001),其回归方程分别为:天麻素y1=-2E-08x3-1E-06x2-0.0001x+0.365(R2=0.996),天麻多糖y2=-5E-07x3-1E-06x2-0.008x+8.267(R2=0.996)。[结论]红天麻箭麻品质较优良,其块茎沙藏发育进程和品质下降密切相关,开花后空心和腐烂的红天麻块茎不宜作药用和制药原料。     

天麻药材中天麻素含量测定的样品制备方法比较

目的:天麻药材中天麻素含量测定时样品的最佳制备方法。方法:采用高效液相色谱法,比较了稀乙醇回流提取法(2010年版药典天麻项下方法)、80%甲醇超声法(2010年版药典天麻祛风补片项下方法)、甲醇超声-静置-超声法(2010年版药典天麻头痛片项下方法)、稀乙醇浸渍-回流法(2010年版药典天麻钩藤颗粒项下方法)及稀乙醇索氏提取5种样品制备方法对天麻素含量测定结果的影响,并对超声法的提取溶剂和提取时间进行了考察。结果:50%甲醇超声提取1h优于其它方法。结论:本方法操作简便可行、重现性好、准确度高,可作为天麻药材中天麻素含量测定的供试品溶液制备方法。