家畜卵母细胞冷冻保存研究进展

自Whittingham(1977)首次成功的报道冷冻-解冻的小鼠卵母细胞活仔以来，国内外诸多学者对家畜及人的卵母细胞冷冻保存进行了研究。目前，已有小鼠、家兔、牛等动物以及人的卵母细胞冷冻成功，并得到了后代。在国内，山羊、绵羊、猪等家畜的卵母细胞冷冻保存也已有报道。随着胚胎工程技术的不断发展，卵母细胞的冷冻保存越来越受到重视，这将推动卵母细胞的冷冻保存取得更大进展。     

羊卵母细胞冷冻保存研究进展

近年来,绵羊、山羊胚胎工程技术的快速发展致使对卵母细胞的需求量越来越大。此外,作为家畜种质资源保护体系的组成部分,卵母细胞也是保存优秀雌性家畜遗传资源的重要方式之一。然而,作为胚胎生物技术的重要环节,由于其自身特殊的结构功能特点,卵母细胞对低温和冷冻极其敏感,其冷冻保存研究水平远低于胚胎。因此,如何提高冷冻保存卵母细胞质量是低温生物学和胚胎生物技术研究领域的热点和难点。针对目前绵羊、山羊卵母细胞冷冻保存的最新研究进展和存在问题进行综述,同时针对如何进一步提高绵羊、山羊卵母细胞冷冻保存质量提出建议,以期为之后的研究工作提供理论指导。     

家畜卵母细胞冷冻保存研究进展

自Whittingham(1977)首次成功的报道冷冻-解冻的小鼠卵母细胞活仔以来,国内外诸多学者对家畜及人的卵母细胞冷冻保存进行了研究。目前,已有小鼠、家兔、牛等动物以及人的卵母细胞冷冻成功,并得到了后代。在国内,山羊、绵羊、猪等家畜的卵母细胞冷冻保存也已有报道。随着胚胎工程技术的不断发展,卵母细胞的冷冻保存越来越受到重视,这将推动卵母细胞的冷冻保存取得更大进展。1抗冻保护剂在卵母细胞和胚胎的冷冻保存时,需使用抗冻保护剂,它可以改变细胞在冷冻过程中的物理化学环境,减轻或避免冷冻、解冻过程中的冷冻损伤。抗冻保护剂主要为一…     

卵母细胞冷冻保存研究进展

1977年Whittingham首次成功报道冷冻一解冻小鼠MⅡ期卵母细胞产仔,自此许多学者对多种动物及人卵母细胞冷冻保存进行了研究。目前小鼠、家兔、牛、马、山羊、绵羊及猪等动物卵母细胞的冷冻保存均有报道,而世界上已经有100多个冷冻卵母细胞的婴儿出生。卵母细胞的冷冻保存可为体外受精、核移植、转基因动物的研制提供更方便的材料来源;[第一段]     

影响猪卵母细胞玻璃化冷冻保存效果的因素

对卵母细胞进行冷冻保存,可以使卵源不再受到时间和空间限制,并能为体外受精、核移植和转基因等胚胎工程技术的研究提供充足的原材料.猪卵母细胞中富含脂滴,且对低温十分敏感,因此,猪卵母细胞冷冻保存的研究进展相对较慢.玻璃化冷冻是有效的卵母细胞冷冻方法之一.综述了卵母细胞发育阶段、冷冻栽体和冷冻保护剂等因素对猪卵母细胞玻璃化冷冻保存效果的影响.     

冷冻方法和冷冻保护液对山羊卵母细胞发育的影响

比较了不同冷冻方法和冷冻保护液对山羊卵母细胞冷冻-解冻后体外受精和激活后的发育效果.结果表明,开放式拉长塑料细管(OPS)法的效果好于玻璃化细管法和常规冷冻法;在OPS法中,20%EG 20%DMSO对卵母细胞的冷冻保护效果好于EDFS40,而在玻璃化细管法冷冻中,则是EDFS40好于20%EG 20%DMSO.对于常规冷冻法而言,则是1.5mol/L EG的冷冻效果好于1.5mol/L PROH.     

山羊卵母细胞冷冻保存及其对发育效果的影响

在程序冷冻条件下,冷冻保护剂种类对山羊卵母细胞发育效果有显著影响。对于山羊GV期卵母细胞,解冻后的形态正常率,PROH(83 1%)和DMSO(81 7%)均高于甘油(70 7%)(P<0 05);而体外成熟率则是PROH(20 3%)高于DMSO(14 2%)和甘油(9 8%),DMSO又高于甘油(P<0 05)。对于山羊IVM卵母细胞,解冻后的形态正常率,PROH(84 5%)和DMSO(86 4%)均高于甘油(74 2%)(P<0 05);而受精率则是PROH(23 2%)高于DMSO(17 5%)和甘油(13 1%),DMSO又高于甘油(P<0 05)。冷冻方法和卵母细胞发育阶段对冷冻效果有显著影响。从冷冻方法看,程序冷冻和OPS玻璃化冷冻,GV期卵母细胞的成熟率分别为19 7%、27 6%,受精率为3 3%、8 6%;培养9h卵母细胞的成熟率分别为20 6%、30 9%,受精率为4 4%、10 3%;IVM卵母细胞的受精率分别为20 9%、29 4%,2 细胞率为4 4%、8 8%,均是OPS玻璃化高于程序冷冻,差异显著(P<0 05);从卵母细胞发育阶段看,不论是程序冷冻还是OPS玻璃化冷冻,GV期和培养9h卵母细胞的成熟率、受精率差异均不显著(P>0 05),但受精率均显著低于IVM卵母细胞(P<0 05)。     

卵母细胞冷冻损伤研究现状

卵母细胞在冷冻过程中结构很容易受到损伤,这些损伤包括颗粒细胞、透明带、细胞膜、纺锤体及超微结构等的损伤。文章阐述了目前在这些方面的研究概况,以期为进一步优化卵母细胞冷冻保存技术提供理论依据。     

未成熟牛卵母细胞与成熟牛卵母细胞冷冻保存的比较

试验以OPS玻璃化冷冻为方法,以成熟和未成熟牛卵母细胞为材料,研究冷冻保存效果与卵母细胞成熟度的关系.一组将牛卵母细胞从牛卵巢内取出后直接进行冷冻,另一组将牛卵母细胞从牛卵巢内取出后先置于TCM199 FSH的培养液中培养20～22 h,即进行体外成熟后再进行两步法冷冻,两步法解冻后检测卵母细胞的存活率.结果表明,牛体外成熟卵母细胞冷冻效果较未成熟卵母细胞冷冻效果好,卵母细胞的存活率为48.1%,未成熟牛卵母细胞冷冻效果较成熟卵母细胞冷冻效果差,卵母细胞的存活率为35.1%.     

山羊卵母细胞体外培养体系及冻存后体外培养的研究

随着哺乳动物胚胎工程技术的深入研究和商业化胚胎移植技术的快速发展,对卵母细胞的需求量急剧增加。而冷冻的卵母细胞可为胚胎工程技术研究提供方便、丰富的材料来源。试验以屠宰场云岭黑山羊卵巢卵母细胞为实验材料,研究冷冻后的山羊卵母细胞体外培养体系。结果表明,采用传统成熟培养液（OM＋10%FBS）与在其中添加1%ITS（OM＋10%FBS＋1%ITS）对卵母细胞培养成熟率无显著差异（71.6%vs 76.2%）,而孤雌激活的卵裂率差异显著（60.5%vs 71.5%）。用优化的卵母细胞成熟体系培养解冻后的GV期COCs,成熟率31.5%;用添加有ITS和EGF的胚胎培养液培养解冻后GV和MII期孤雌激活的卵母细胞,其卵裂率分别为35.6%、58.4%,差异极显著（P〈0.01）。     

毛细玻管玻璃化冷冻法冷冻保存牛卵母细胞的研究

为了探讨毛细玻管玻璃化冷冻法(GMP)对牛卵母细胞冷冻效果的影响,试验采用毛细玻管玻璃化冷冻法冷冻不同发育阶段的牛卵母细胞,并且对不同预处理方式和玻璃化时间对玻璃化冷冻牛卵母细胞解冻后形态及体外受精卵裂率的影响进行了比较.结果表明:采用毛细玻管玻璃化冷冻法冷冻GV期和体外培养6 h、18 h、22 h各发育阶段的卵母细胞,解冻后体外受精后卵裂率分别是36.67%、40.98%、41.27%、52.38%,前三者之间差异不显著(P>0.05),前三者与培养22 h卵母细胞(52.38%)和对照细胞(68.42%)差异极显著(P<0.01);采用不同浓度的稀溶液预处理卵母细胞,3%乙二醇稀溶液预处理玻璃化前牛卵母细胞可分别获得较高的卵裂率(36.96%);卵母细胞在玻璃化溶液中暴露时间越长受到损伤越严重,暴露30 s能获得最好的玻璃化冷冻效果.     

哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究进展

综述了近年来关于哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究进展,并对这项技术的发展前景进行展望.重点讨论了影响哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻保存的几种因素,包括冷冻保护剂的种类和浓度、冷冻方法和卵母细胞所处的发育阶段等,以及冷冻过程中细胞膜、微丝、微管、皮质颗粒、纺锤体和线粒体等出现的损伤.目前,玻璃化冷冻法存在的最主要问题是冷冻过程中造成超微结构不可逆转的损伤影响胚胎发育,亟待解决.     

山羊卵母细胞体外成熟体系研究进展

卵母细胞体外成熟(IVM)是山羊胚胎体外生产的关键步骤,其对山羊体外生产胚胎的数量和质量均具有非常重要的意义。此外,IVM还可以满足胚胎工程技术如体细胞核移植、转基因动物生产对卵母细胞的大量需求。然而,由于山羊卵母细胞体外成熟研究起步较晚,与牛、猪等家畜相比仍然存在不小的差距,存在诸如体外成熟率低、胚胎质量不佳、培养体系可重复性低等问题。因此,分析山羊卵母细胞体外成熟的主要影响因素,提高山羊卵母细胞体外成熟率,建立山羊卵母细胞体外成熟稳定培养体系,就成为了近年来山羊胚胎体外生产的研究重点。论文综合国内外学者近年的相关研究,对可能影响山羊卵母细胞体外成熟效率的各种因素进行了综述分析,同时对山羊卵母细胞体外成熟现存问题进行了分析,以期为建立山羊卵母细胞体外成熟体系提供理论支持。     

家畜卵母细胞冷冻保存的研究进展

本文阐述了卵母细胞冷冻保存对体外受精、转基因动物研究及人类医疗方面的意义,论述了卵母细胞冷冻保存的发展过程、方法与机理及冷冻保护剂种类,通过揭示冷冻、解冻对细胞的作用,进一步探讨了各种冷冻保护剂及冻存方法对保持细胞生命力的功效。在当前卵母细胞冷冻研究中,玻璃化冷冻法发展迅速,并出现超快速玻璃化法。     

陕北绒山羊去精清冷冻精液与全份冷冻精液的精液品质和受胎率的比较试验

冷冻精液人工授精技术在奶牛业中已全面应用,对奶牛种质的改善和生产性能的提高发挥了巨大作用;然而该技术在山羊生产上的应用却受到很大限制,严重制约着养羊业的发展,其主要原因之一是山羊冷冻精液受胎率较低。因此,如何提高山羊冷冻精液受胎率成为近几年研究的热点之一。研究发现:山羊精清中含磷脂酶或类磷脂酶等物质,这些物质对     

牛羊卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究进展

卵母细胞玻璃化冷冻保存对于胚胎生物技术的发展具有重要意义,因其简便、快速、廉价等优点而广泛应用于人类辅助生殖、体外胚胎生产、转基因、克隆等方面.由于受到低温和抗冻保护剂的影响,卵母细胞在冷冻过程中都会造成形态和功能上的损伤,并且存活率和发育能力随之降低.本文以牛、羊卵母细胞玻璃化冷冻保存为例,对卵母细胞玻璃化冷冻保存的...     

玻璃化冻存对驴卵母细胞超微结构的影响

试验旨在探究玻璃化冷冻对驴卵母细胞发育的影响,寻求驴卵母细胞冷冻的最佳条件。通过对不同发育时期的驴卵母细胞进行玻璃化冷冻,冷冻复苏后分别进行成熟培养和孤雌激活,并对GV期未冷冻组(对照组)、GV期冷冻组、IVM-MⅡ冷冻组卵母细胞微丝和线粒体超微结构进行免疫荧光标记,统计冷冻复苏后卵母细胞形态正常率、成熟率、孤雌激活卵裂率、超微结构正常率。结果表明,GV期冷冻组卵母细胞的形态正常率与GV期未冷冻组(对照组)间无显著差异(P0.05),成熟率和卵裂率均显著低于对照组(P0.05);IVM-MⅡ冷冻组的卵裂率显著低于对照组(P0.05),且卵裂后细胞发育受到阻滞。冷冻组微丝在皮质区分布明显减少的卵母细胞数目增多,冷冻组卵母细胞的线粒体数量明显低于对照组,由此可以说明冷冻对卵母细胞超微结构有损伤,从而导致复苏后成熟率下降,影响卵母细胞的受精和体外发育,且GV期冷冻组较IVM-MⅡ冷冻组在微丝与线粒体结构上有较小损伤,发育状态较好。     

猪卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究进展

卵母细胞冷冻保存对于畜牧业生产和人类辅助生殖具有重要意义。随着玻璃化冷冻技术日趋成熟，其现已广泛应用于牛、羊等大家畜的卵母细胞冷冻保存。然而，猪卵母细胞的冷冻保存至今仍处于试验研究阶段，由于猪卵母细胞脂质含量高，对低温敏感，在玻璃化冷冻保存过程中极易受到冷冻保护剂毒性以及渗透胁迫、氧化应激等损伤，造成细胞骨架以及亚细胞器受损，最终导致细胞发育能力降低甚至死亡。近年来，人们在提高猪卵母细胞冷冻保存效率的研究中取得了突破性进展。本文简要介绍了卵母细胞冷冻保存的常见方法及作用机理，总结了猪卵母细胞在玻璃化冷冻过程中造成的细胞损伤类型及影响，概述了人们针对不同类型的冷冻损伤提出的解决方法和取得的成就，并对其应用前景进行展望，为今后提高猪卵母细胞的玻璃化冷冻效率提供新思路。     

玻璃化冻存对驴卵母细胞超微结构的影响

试验旨在探究玻璃化冷冻对驴卵母细胞发育的影响，寻求驴卵母细胞冷冻的最佳条件。通过对不同发育时期的驴卵母细胞进行玻璃化冷冻，冷冻复苏后分别进行成熟培养和孤雌激活，并对GV期未冷冻组（对照组）、GV期冷冻组、IVM-M Ⅱ冷冻组卵母细胞微丝和线粒体超微结构进行免疫荧光标记，统计冷冻复苏后卵母细胞形态正常率、成熟率、孤雌激活卵裂率、超微结构正常率。结果表明，GV期冷冻组卵母细胞的形态正常率与GV期未冷冻组（对照组）间无显著差异（P>0.05），成熟率和卵裂率均显著低于对照组（P<0.05）；IVM-M Ⅱ冷冻组的卵裂率显著低于对照组（P<0.05），且卵裂后细胞发育受到阻滞。冷冻组微丝在皮质区分布明显减少的卵母细胞数目增多，冷冻组卵母细胞的线粒体数量明显低于对照组，由此可以说明冷冻对卵母细胞超微结构有损伤，从而导致复苏后成熟率下降，影响卵母细胞的受精和体外发育，且GV期冷冻组较IVM-M Ⅱ冷冻组在微丝与线粒体结构上有较小损伤，发育状态较好。     

波尔山羊冷冻精液质量现状与分析

山羊冷冻精液在国内 60年代就有研究 ,但初期因受胎率较低 ,生产上一直未能推广。 80年代绵羊冷冻精液的研究和推广取得了较好的效果 ,对山羊的冷冻精液技术研究和推广起到了推动作用 ,有的地区试验表明 ,情期受胎率可达 60 %左右。近年国内一些省区先后引进了波尔山羊 ,山羊杂交改良的势头发展很快 ,也促进了冷冻精液的推广和应用。但目前山羊的冷冻精液质量究竟如何 ,笔者作了一些调查和分析。1　材料与方法从陕西、江苏、安徽、山东等省 8个种羊场 (站 )中 ,随机抽查了 40只波尔山羊种公羊的冻精。其中 ,3 6只为颗粒冻精 ,4只为细管冻精…