生鲜乳中黄曲霉毒素M1在不同储存条件下的稳定性研究

本文通过检测不同储存条件下生鲜乳中黄曲霉毒素M1(AFM1)的残留水平来分析AFM1的储存稳定性,储存条件包括储存温度、储存时间、复温温度、解冻次数和添加防腐剂等。研究结果表明,在不同的储发存条件下,包括4℃冷藏保存,-20℃冷冻保存,-20℃冷冻保存24h经不同温度复温、反复冻融次数以及添加不同的防腐剂对生鲜乳中AFM1的残留量均无显著影响。当生鲜乳解冻次数不断增加时,检测出AFM1的回收率略呈上升趋势,但结果变化不明显。不同储存条件下的回收率检测值均在80%~110%范围内。     

不同储存条件下生鲜乳中铅测定值的变化比较

本文通过在生鲜乳中加标铅并检测其在不同的储存条件下检测值,分析了不同储存条件对生鲜乳中铅含量测定值的影响,储存条件包括储存温度、储存时间、解冻温度、解冻次数和添加防腐剂等。试验结果表明,在不同的储存条件下,铅的回收率均在60%~120%,其中4℃冷藏保存4、8、24、48 h,-20℃冷冻存储、解冻温度、解冻次数以及添加5种实验室常用的防腐剂对生鲜乳中铅的检测结果均无显著影响。当添加硫氰酸钠、叠氮钠、重铬酸钾和甲醛作为保障检测需用的防腐剂时,会出现铅含量测定结果偏低,但结果差异不显著(P0.05)。     

牛细管冻精解冻后常温保存对受胎率的影响试验

[目的]为测试牛细管冷冻精液解冻后在常温水中的保存时间对精子活力的影响,为非定点配种寻求有效简便的冻精携带方法,观察精子在不同解冻温度下的存活时间及受胎率。[方法]选择5个解冻温区及不同时间解冻肉牛细管冻精,解冻后置于常温水(17℃~19℃)中保存,观测解冻温度和精子存活时间对受胎率的影响。[结果]50℃、60℃、70℃、解冻后精子的保存时间差异不显著,保存至72h时精子活力均低于0.35;受胎率差异不显著;随保存时间延长,受胎率呈下降趋势,在48h以内情期受胎率和总受胎率分别维持在61.8%~67.1%和91.9~95.8。[结论]70℃各时间段解冻后保存效果最佳,60℃解冻组次之,二者在精子活力≥0.35时情期受胎率和总受胎率达到63.0%、92.5%,略高于当地黄牛两项受胎率的平均值61.1%、91.7%,解冻后细管精液置于常温水中携带到较远的区域输精对精子活力、母牛受胎率无影响。     

犬精液冷冻及解冻技术研究

犬冷冻精液质量的好坏直接影响受胎率 ,影响养犬户的经济效益。而冻精解冻后精子活动和生存时间 (解冻后 37℃保存 4ｈ精子活力 )又是冷冻精液质量中最重要的两个指标。我们进行了同一样品 ,采用不同温度解冻 ,对冻后精子活力及生存时间影响的对比试验。目的是寻找最佳的解冻温     

奶牛冻精解冻后不同保存温度对精液活力的影响

本试验旨在验证奶牛冷冻精液解冻后在不同保存温度下对精液活力的影响,通过对解冻后冻精在34℃、4℃保存,分0．5小时、2小时、4小时三个时间进行检测,结果表明不同保存时间和温度时菌落数没有明显影响．而保存在34℃的冻精随着时间增长活力明显下降。     

犬精液冷冻解冻技术研究

试验以Tris-果糖稀释液为基础稀释液,研究了甘油浓度(4%、6%和8%)、冷冻起始温度(-80℃和-113℃)、冷冻时精液在液氮面上的高度(2 cm4、cm和6 cm)和解冻方法(30℃、12s和65℃、5 s)对犬精液冷冻保存效果的影响。结果表明,犬的精子冷冻保存以6%的甘油浓度、-80℃的始冻温度、在液氮面上2 cm的高度进行冷冻和65℃5 s的解冻方法为好,冷冻-解冻后精子的活率可达0.450 0±0.044 7。     

牛细管冻精冷配人工授精的关键技术

1保证精子活力达到0.3以上要保证冻精活力,主要是做好保存、取用、解冻三方面的工作。冻精要存放在装有足够液氮的贮存罐中,罐内冻精不得暴露在液氮外,在向另一容器转移时冻精在空气中暴露的时间不得超过5s;冻精的取放,离开液面的时间不能超过10s,冻精解冻水温应控制在38℃±2℃,冻精在热水中浸泡时间20～30s。2准确鉴定输精时间由于精子在母牛生殖道内可以存活12～24h,卵子维持受精能力8～12h,母牛在发情结束后4～16h排卵,因此,排卵前6～12h是输精最佳时间。我们可以根据发情时间来确定,即在母牛发情开始12～18h或者结束后8h内输精。3保证…     

不同冻存保护剂对绵羊前体脂肪细胞冻存效果的影响

<正>【目的】探讨绵羊前体脂肪细胞冷冻保存的最佳冻存保护剂种类和浓度。【方法】在含20%胎牛血清的DMEM/F12培养液中分别添加不同浓度的DMSO、EG、PG、G和PVP作为冻存液,对原代培养的绵羊前体脂肪细胞进行冷冻保存后,检测复苏细胞存活率、细胞增殖能力、细胞中脂肪沉积量,测量GPDH活性,并用实时荧光定量PCR检测PPARγ和LPL mRNA的表达水平,最后对复苏细胞进行染色体核型分析。【结果】各种冻存保护液中,10%DMSO和5%DMSO+5%PVP     

简易冷冻装置制备鸡甘油细管冻精的优化

为优化简易装置制备鸡精液甘油细管冻精的条件,采用11%的甘油浓度、不同的熏蒸方式和熏蒸时长等条件制作细管冻精,通过测定精子活力及人工输精后的孵化效果筛选冷冻、解冻条件。结果表明:先以-15^-6℃/min的速率熏蒸1~5min后,再以-60^-25℃/min的速率熏蒸1~5min(两步均1min除外)冷冻效果最好,解冻后活力达0.8以上;以5℃的温度解冻30~60s和10℃的温度解冻15~60s的解冻效果最佳;用优化的冷冻程序、6%浓度甘油制作细管冻精,最高平均获得了77.63%的受精率和73.38%的出苗率。研究结果为鸡精液简易装置冷冻保存技术的系统化和标准化研究提供了技术支撑。     

不同精液解冻液和解冻速率对猪颗粒冻精品质的影响

为提高猪冻精解冻后的质量,本试验选择5种解冻液配方,对猪颗粒冻精进行解冻,结果表明,Ⅴ号解冻液为最佳解冻液,解冻后精子活率为(34±2.4)%,极显著高于Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ组(P0.01);存活时间为(506.6±40.4)h,极显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(P0.01),显著高于Ⅳ组(P0.05)。选择9种不同的水温,采用V号解冻液对冻精颗粒进行解冻,记录解冻时间,并计算解冻速率,研究结果表明,以27.5℃/s的速率进行解冻,解冻后精子的活率、弯尾率及顶体完整率均达最优水平。     

波尔山羊冻精解冻方法效果的分析

本文针对影响冻精配种受胎率的各种因素 ,总结分析了几年来在波尔山羊冻精配种中 ,采用不同解冻方法解冻冻精对精子活力、存活时间、顶体完整率、死活染色率以及受胎率几方面的影响 ,结果表明 ,80℃高温干解冻最理想 ,活力 0 3～ 0 4 ,存活时间 1 2～ 1 8h ;80℃高温干解冻优于 4 0℃低温湿解冻(P <0 0 5) ;干解冻效果与温度呈正相关关系 ,以 80℃为最好 ,湿解冻与温度呈负相关关系 ,以 4 0℃为最好 ;精子存活时间与受胎率呈正相关关系 ;一次性解冻一粒冻精活力最好 ,两项指标均超过一次解冻多粒冻精 (P <0 0 5) ,一次干、湿解冻 2、3、4粒冻精 ,各项指标间差异不显著 (P >0 0 5) ,且活力、存活时间、顶体完整率、活精子染色率等指标均达到冻精配种要求 (活力 0 3) ,实际配种情期受胎率达 50 %以上。因此 ,在实际生产中 ,可采用高温 ( 80℃ )干解冻和低温 ( 40℃ )湿解冻两种方法 ,一次性解冻 1～ 4粒冻精 ,既能保证受胎率 ,又可节省精液和时间 ,提高工作效率     

版纳微型猪近交系精子冷冻保存研究

在版纳微型猪近交系（BMI）公猪精液冷冻保存稀释液中添加不同浓度甘油,并对不同解冻液配方和解冻方法进行研究,对比解冻后的精子活力、质膜完整率和顶体完整率,优化BMI公猪精液冷冻保存方法。结果表明,解冻后,甘油浓度为2%和3%组的精子活力、质膜完整率、顶体完整率显著高于1%、4%和5%组（P<0.05）;Ⅰ号解冻液解冻后精子活力、质膜完整率、顶体完整率均显著高于Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ号解冻液（P<0.05）;在活力、质膜完整率和顶体完整率方面,40℃ 6 s和50℃ 6 s这两种程序的解冻效果都显著优于38℃ 30 s（P<0.05）。由此可见,2%或3%的甘油作为抗冻保护剂、Ⅰ号解冻液解冻、40℃ 6 s或50℃ 6 s水浴解冻是较为理想的BMI公猪精液冷冻保存方法。     

-80℃超低温冰箱冷冻保存猪精液的初步研究

本试验从细管规格、基础稀释液成分(柠檬酸和甘氨酸)、甘油浓度和解冻方法对猪精液在-80℃超低温冰箱中冷冻保存冻后精子存活率的影响进行了研究。结果表明:(1)0.25 m L和0.5 m L细管之间没有明显差异(P0.05),其冻后存活率均达到0.57左右。(2)冷冻液中甘油浓度为3%时,冻后猪精子存活率最高,达0.50±0.035;基础液中柠檬酸的含量为1.3%时,精子的冻后存活率极显著高于1.7%时(P0.01);基础液中甘氨酸的含量为7.5 mg/m L时,则不能影响精子的冻后存活率(P0.05)。(3)解冻方法为61℃5 s时,精子冻后存活率最高,达0.61±0.055。     

辽宁绒山羊冻精稀释液冷冻保存法

目前，人们习惯把辽宁绒山羊冻精稀释液在配制后放于0℃～4℃条件下保存，以备后用。然而这种保存的方法只能保存冻精稀释液1～2d，且配制需大量时间，受温度影响又大，严重影响配种的工作效率。为了延长稀释液的保存时间、方便冻精生产，笔者进行了将冻精稀释液在-5℃～-20℃、-196℃下进行冷冻保存试验及反复冷冻-解冻试验，现将试验结果简述如下。     

解冻温度和保存时间对牛细管冻精精子活率的影响

本试验采用4组解冻温度,每组解冻温度设计了2个不同的解冻时间,观察不同解冻温度、解冻时间及解冻后常温保存时间对牛细管冷冻精液精子活率的影响。结果显示,4组解冻温度以80℃（3s）精子活率最高,为48．77％,20组（2（80s）精子活率最低,为30．02％,两者差异极显著（P〈0．01）。各组精液解冻后保存1h检查精子活率明显高于解冻时镜检活率（P〈0．05）,80℃解冻后间隔5h精子活率仍达到30％。     

辽宁绒山羊冻精稀释液冷冻保存法

目前,人们习惯把辽宁绒山羊冻精稀释液在配制后放于0℃～4℃条件下保存,以备后用。然而这种保存的方法只能保存冻精稀释液1～2d,且配制需大量时间,受温度影响又大,严重影响配种的工作效率。为了延长稀释液的保存时间、方便冻精生产,笔者进行了将冻精稀释液在-5℃～-20℃、-196℃下进行冷冻保存试验及反复冷冻—解冻试验,现将试验结果简述如下。1 稀释液在-5℃～-20℃下保存 将配制好的稀释液盛于100～300ml的锥形瓶里,置于冰箱中,用MCT—200超低温温度仪测得冰箱内温度为-5℃～-20℃。待稀释液完全形成冰块后取出解冻,在显微镜下观察稀释液:溶质均匀呈透明状     

酶联免疫吸附试验操作要点

正1样品运输与保存1.1样品运输ELISA(酶联免疫吸附试验)的样品一般为全血或血清。运输温度偏高、运输时间过长的血样会导致ELISA灵敏度偏低,因此夏季血样应低温运输。1.2样品保存如48h内能完成检测,血样只需2～8℃冷藏即可,如48 h内无法完成检测,血样应于-20℃保存,长期保存血清可在-80℃,全血样品不适合冻存。血液样品含水量较大,冷冻固定时会对血样结构造成破坏,故超低温快速冷冻固定多适用于组织而非血样。     

奶牛细管冻精解冻后低温保存可提高受胎率

奶牛细管冻精输精具有污染少、使用简便、受胎率高的优点，正取代奶牛颗粒冻精及低温精液成为奶牛人工授精用精液的主要剂型。但由于细管冻精的甘油含量高，解冻后在常温下不易保存。据我们实验观察，甘油在低温下对精子有一定的保护作用，但随着温度的升高，甘油对精子产生明显的危害作用。细管冻精和颗粒冻精解冻后不同温度保存的保存效果就能说明不同甘油浓度与温度对精子的危害程度，见表1。注：冷冻精液为我站生产，细管冻精为03ml剂型，颗粒冻精解冻液为葡萄糖50g、柠檬酸钠03g、乙二胺四乙酸二钠01g、双蒸馏水100ml。从表1可…     

马皮肤成纤维细胞的体外培养与冷冻保存

本研究利用小组织块直接培养法得到了成年马皮肤成纤维细胞的原代培养物,再用酶消化法处理,能够纯化马皮肤成纤维细胞。成纤维细胞的冷冻保存,首先采用手工冷冻法,选用含有不同浓度保护剂如：二甲基亚砜（DMSO）、乙二醇（EG）、甘油（GC））和新生牛血清（NCS）的12种冷冻液对马皮肤成纤维细胞进行冷冻保存;其次用2种冷冻方法对马皮肤成纤维细胞进行冷冻保存,以24 h贴壁率评价冻存效果。结果表明,10% DMSO和20% NCS的DMEM冻存液,对马皮肤成纤维细胞的冻存效果好(24 h贴壁率84.98%)。从冷冻方法来看,程序冷冻法(86.32%）优于手工冷冻法（79.98%)(P<0.05)。     

波尔山羊耳成纤维细胞的分离培养与保存

本文研究了波尔山羊耳成纤维细胞的体外培养,包括分离纯化和生长特征,同时还研究了成纤维细胞的冷藏和冷冻保存.结果表明,波尔山羊耳成纤维细胞贴壁生长,一般经历潜伏期、指数增生期和平台期;4℃体外冷藏时间为5 d;冷冻保存时4℃平衡1 h、-80℃过夜,然后直接投入液氮中,解冻后培养得到61.6%的贴壁率.