捕食线虫性真菌-少孢节丛孢菌理化特性研究

研究了捕食线虫性真菌一少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)的染色特性、分生孢子对外界理化因素的抵抗力以及菌丝对线虫第三期幼虫的吸引作用等。结果表明少孢节丛孢菌用革兰氏、瑞氏、姬姆萨氏液染色都能很好的着色；分生孢子对高温敏感，对抗生素不敏感，高浓度的氢离子或氢氧根离子能杀死分生孢子：但分生孢子耐低温，因此可用低温冷冻法保存捕食线虫性真菌分生孢子，其方法简便易行。首次解决了国内外在捕食线虫性真菌菌种保存中的难题。研究显示菌丝对线虫第三期幼虫无明显吸引力。     

新疆乌鲁木齐地区捕食性真菌圆锥节丛孢菌的分离鉴定

为了给动物线虫病的防治工作提供适应本地生存的候选捕食性真菌菌株,对新疆乌鲁木齐地区采集的土壤进行筛选,采用土壤撒布法,以秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)作为诱饵线虫对土壤中的捕食性真菌进行分离鉴定,成功分离出具有捕食线虫功能的真菌1株。通过形态学观察,该菌捕食器官为黏性菌网,分生孢子无色,呈圆锥形,中央有一分隔,形态结构与节丛孢属相符。分子生物学分析显示,该分离株的ITS2基因序列与圆锥节丛孢菌(Arthrobotrys conoides)的同源性为99%～100%,判定该菌为圆锥节丛孢菌的新疆分离株。在实验室条件下,利用该菌株进行捕食线虫活力测定,结果发现该菌株在CMA培养基中对马圆形线虫三期幼虫的捕食率为97.47%,具有较强的捕食效率,可作为新疆地区动物线虫病生物防治工作的候选菌株。     

捕食线虫性真菌-少孢节丛孢菌冻干生物制剂的制备

通过在含有0.05%琼脂粉的沙氏葡萄糖肉汤培养基中培养少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)再转接到玉米粒培养基的方法,对少孢节丛孢菌分生孢子进行培养。在不同时间点,将培养好的分生孢子从培养基上洗脱并进行计数,然后制成冻干制剂,并观察其复苏情况,从而为少孢节丛孢菌冻干制剂的临床应用提供基础数据。结果显示:通过对少孢节丛孢菌冻干制剂在萌发率、生长率和捕食率三方面的复苏情况观察,少孢节丛孢菌冻干后的分生孢子在接种后4d,萌发率达到最大值79.5%,平均生长率为3.4mm/d,加入虫体后7d捕食率最高,为95.8%,平均每天捕食率为74.0%;少孢节丛孢菌冻干制剂在平均生长率和捕食率方面与对照组相比,差异均不显著(P>0.1)。结果表明,冻干制剂材料易得,方法简单易行,复苏效果良好,进一步优化后将具有产业化应用的前景。     

低能氮离子束诱变选育捕食线虫性真菌——少孢节丛孢菌

为获取理想的生物防治捕食线虫性真菌菌株,达到利用自然天敌有效控制家畜寄生性线虫病的目的,作者利用低能氮离子注入诱变捕食线虫性真菌——少孢节丛胞菌(Arthrobotrys oligospora)的分生孢子,测定分生孢子萌发后菌丝的生长速度、产孢能力及菌株对线虫幼虫的捕食率,筛选正突变株。结果表明,低能氮离子束具有诱变少孢节丛孢菌的潜能,诱变后的1株少孢节丛孢菌的生长速度、产孢量和对线虫幼虫的捕食率呈现出了正突变效果。     

捕食线虫性真菌——少孢节丛孢菌CIMH1株捕食特性研究

本研究首次对国内土壤中分离出的捕食线虫性真菌—少孢节丛孢菌ＣＩＭＨ１株（Ａｒｔｈｒｏｂｏｔｒｙｓｏｌｉｇｏｓｐｏｒａｓｔｒａｉｎ：ＣＩＭＨ１）捕食马线虫第３期幼虫的活性、效力及杀虫机理进行了试验。结果表明菌株生长环境对其捕食活性有很大影响。在２０℃、有氧条件、玉米粉浓度相对较低（０．４ｇ／Ｌ）、菌丝生长较稀疏的ＣＭＡ培养基中,捕食活性最佳。捕食线虫时,在虫体运动刺激及虫体内部某些物质诱导下,菌株会产生一些特殊捕食性结构,如粘性菌丝（Ｓｔｉｃｋｙｂｒａｎｃｈｅｓ）、粘性菌环（Ｓｔｉｃｋｙｒｉｎｇｓ）和粘性菌网（Ｓｔｉｃｋｙｎｅｔｗｏｒｋｓ）等。通过这些功能性构造,菌株将线虫捕获并杀死消化。少孢节丛孢菌ＣＩＭＨ１株在最佳条件下,对马线虫第３期幼虫的平均捕食效力为７８．１５±３．８％。     

捕食线虫性真菌--少孢节丛孢菌体外杀寄生性线虫幼虫的研究

对捕食线虫性真菌——少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)菌株体外粪便捕杀马寄生性线虫幼虫进行了研究。结果表明：菌株可以在体外粪便中发育并发挥其捕食作用。在实验室条件下，其对寄生性线虫第一、二期幼虫的作用与对第三期幼虫的作用相比较．捕获致死速度快。菌株对马粪便中线虫幼虫的杀虫率高达98．7％；与对照组相比有显著差异。而且加入粪便的分生孢子数量在达到一定阈值后，再加入分生孢子，则杀虫率不再增加。此结论对捕食线虫性真菌今后临床的应用具有实际指导意义。     

少孢节丛孢菌超微结构的观察研究

观察了捕食线虫性真菌——少孢节丛孢菌的超微结构，以探讨捕食线虫性真菌的杀虫机理。结果显示，少孢节丛孢菌属于隔膜类真菌，隔膜中央有孔，菌丝细胞一般呈长形竹节状；菌株的捕食器为黏性菌环和菌网，形成捕食器的菌丝细胞结构不同于一般的营养菌丝，胞质中含有许多电子密集体，呈大小不等的黑色类圆形颗粒状，多数排列在捕食器菌丝细胞的边缘区域，这是捕食线虫性真菌捕食器菌丝细胞的一个重要特征。     

氨基酸对少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)捕食器产生的影响

为了解氨基酸对少孢节丛孢菌产生捕食器的影响,在少孢节丛孢菌的基础,菌丝生长的不同时期将浓度为0.5、0.05、0.005 g.L-1的不同氨基酸溶液均匀加入CMA培养基,观察捕食器的产生情况。结果表明：不同种类氨基酸对少孢节丛孢菌产生捕食器的影响不同,其中以浓度为0.05 g.L-1的L-苯丙氨酸、L-蛋氨酸、DL-缬氨酸的诱导效果较好;DL-苯丙氨酸、L-苏氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、DL-亮氨酸、L-色氨酸和L-缬氨酸属于中等;L-赖氨酸、L-谷氨酸和L-组氨酸溶液效果较差。新生菌丝对氨基酸刺激比较敏感,易产生捕食器;与线虫诱导产生的捕食器相比,氨基酸诱导产生的捕食器对虫体的捕食能力无明显变化,可见少孢节丛孢菌在没有线虫诱导的情况下,加入一定浓度某些种类的氨基酸同样可以产生捕食器,并能捕食线虫幼虫。这为深入开展对捕食线虫性真菌生化方面的研究提供了有价值的资料。     

少孢节丛孢菌的分离鉴定及捕食线虫活性研究

为研究新疆地区捕食线虫性真菌的生物活性,本实验采用玉米粉琼脂培养基(CMA)培养分离自新疆不同地区的捕食线虫性真菌,通过对分离株纯培养物的形态学观察和18S rDNA基因序列分析,鉴定4株少孢节丛孢菌,分别命名为XA3、XA6、XD1和XD4。18S rDNA基因遗传进化分析表明,XA3、XA6、XD1和XD4新疆分离株之间同源性较高,与GenBank登录的少孢节丛孢菌CBS289.82株同源性最高,分别为99.6%、99.5%、99.1%和98.9%,与形态学鉴定结果一致。捕食线虫活性测定试验表明,4个分离株在CMA中的捕食率为92.8%～97.6%;体外对绵羊粪便中线虫幼虫的捕食率为90.7%～95.4%,均具有很强的捕食活性。本研究为研究绵羊消化道线虫生物防控制剂奠定基础。     

不同氨基酸对少孢节丛孢菌（Arthrobotrys oligospora）捕食器诱导效果的研究

试验研究了11种氨基酸在玉米粉琼脂培养基上对捕食线虫性真菌——少孢节丛孢（Arthrobotrys oligospora）产生捕食器及对线虫第3期幼虫捕食睛况的影响。结果表明：氨基酸可以诱导少孢节丛孢菌产生捕食器,且不同种类氨基酸对其产生捕食器的影响表现不同,各个浓度之间差异明显,其中以浓度为0．05g/L的L-苯丙氨酸（L—Phe）、L-蛋氨酸（L—Met）、DL-缬氨酸（DL—Val）的诱导效果较好;L-苏氨酸（L—Thr）、L-异亮氨酸（L—Leu）、L-亮氨酸（L—Leu）、L-色氨酸（L—Trp）和L-缬氨酸（L—Val）属于中等;L-赖氨酸（L—Lys）、L-谷氨酸（L—Gin）和L-组氨酸（L—His）表现较差。于菌丝生长初期、中期、后期分别加入氨基酸时,不同时期捕食器的产生差异也较为显著,生长初期和生长中期加入氨基酸的试验组捕食器产生良好;前者又明显好于后者。上述现象提示,少孢节丛孢茵在没有线虫诱导的情况下,加入一定浓度的某些种类氨基酸,同样可以刺激其产生大量捕食器。而且捕食情况表明这些捕食器与线虫诱导刺激产生的捕食器一样,完全可以捕食线虫幼虫。     

不同氨基酸对少孢节丛孢菌(Arthrobotys oligospora)捕食器诱导效果的研究

试验研究了11种氨基酸在玉米粉琼脂培养基上对捕食线虫性真菌--少孢节丛孢茵(Arthrobotrysoligospora)产生捕食器及对线虫第3期幼虫捕食情况的影响.结果表明:氨基酸可以诱导少孢节丛孢茵产生捕食器,且不同种类氨基酸对其产生捕食器的影响表现不同,各个浓度之间差异明显,其中以浓度为0.05g/L的L-苯丙氨酸(L-Phe)、L-蛋氨酸(L-Met)、DL-缬氨酸(DL-Val)的诱导效果较好:L-苏氨酸(L-Thr)、L-异亮氨酸(L-Leu)、L-亮氨酸(L-IJeu)、L-色氨酸(L-Trp)和L-缬氨酸(L-Val)属于中等;L-赖氨酸(L-Lys)、L-谷氨酸(L-Glu)和L-组氨酸(L-His)表现较差.于茵丝生长初期、中期、后期分别加入氨基酸时,不同时期捕食器的产生差异也较为显著,生长初期和生长中期加入氨基酸的试验组捕食器产生良好;前者又明显好于后者.上述现象提示,少孢节丛孢茵在没有线虫诱导的情况下,加入一定浓度的某些种类氨基酸,同样可以刺激其产生大量捕食器.而且捕食情况表明这些捕食器与线虫诱导刺激产生的捕食器一样,完全可以捕食线虫幼虫.     

节丛孢属食线虫真菌对体外奥斯特线虫幼虫的捕食效果

本文在国内首次报道了几株节丛孢菌食线虫真菌（５株寡节丛孢菌和２株葡萄串状节丛孢菌）在体外对山羊奥斯特线虫第３期幼虫的捕食效果。结果表明：７株真菌对奥斯特线虫幼虫的捕获率分别在７５．０％￣９６．４％之间,具有较高的捕杀线虫能力,食线虫真菌对线虫的作用方式主要是通过在线虫周围形成菌网。     

口服少孢节丛孢菌孢子对家畜粪便中线虫幼虫的杀灭研究

对捕食线虫性真菌——少孢节丛孢菌（Arthrobotrys oligospora）菌株进行了临床杀家畜寄生性线虫幼虫作用的研究。结果表明：培养的少孢节丛孢菌分生孢子经口饲喂动物后，对粪便中线虫幼虫的杀虫率分别可达96.3％（羊）、96．5％（牛）和97．4％（马）。说明少孢节丛孢菌菌株分生孢子可通过家畜消化道，并保持了其捕食寄生性线虫的能力。研究结果为捕食线虫性真菌的临床应用奠定了重要基础。     

两株少孢节丛孢菌在不同培养基中的形态学差异及生长特性

为了观察捕食线虫性真菌少孢节丛孢菌不同分离株在不同培养基中的形态学特性及生长情况,将少孢节丛孢菌分离株DH 066和F 107接种于10g/L麸皮琼脂(WBA)培养基、10g/L玉米粉琼脂(CMA)培养基、20g/L葡萄糖离子琼脂(DIA)培养基和20g/L葡萄糖琼脂(DA)培养基中,置于25℃恒温箱培养,观察不同分离株在不同培养基中的形态学特性并测定其产孢量。对2个分离株在6种不同培养基中菌丝生长长度每天进行定时测量。结果表明,该菌在4种培养基中的特征为分生孢子梨形至倒卵形,1个分隔,偶见2个分隔,分生孢子梗无色,直立,分隔,偶见分枝,分生孢子在10g/L WBA产量最大。此外,对2个分离株在不同培养基中生长速度研究表明,该菌在10g/L麸皮自来水琼脂(WBWA)培养基和10g/L玉米粉自来水琼脂(CMWA)培养基中生长最快。     

不同碳氮源及其比例和培养基初始pH值对少孢节丛孢菌菌丝生长的影响

为研究不同碳源、氮源、碳氮比值及培养基初始pH值对少孢节丛孢菌菌丝生长的影响,采用10种碳源和8种氮源物质进行了试验,结果表明:在固体培养基上,少孢节丛孢菌菌丝生长的最适碳源和氮源分别是蔗糖和蛋白胨;在液体培养基内,最适碳源和氮源分别是红薯滤液和硫酸铵.当固体培养基中碳氮比为5:1、液体培养基中碳氮比为10:1时,茵丝生长最快.在初始pH值为3.7时,液体和固体培养基中的菌丝均不能生长;固体培养基中最适合的初始pH值范围是7.0～8.0,以pH值为7.5时菌丝的生长率最大;液体培养基中最适合的初始pH值范围是5.0～7.0,以pH值为7.0时菌丝生长最佳.说明不同的碳源、氮源、碳氮比及培养基初始pH值对少孢节丛孢菌菌丝生长率的影响是不同的.而且固体培养基和液体培养基中最适碳氮源、碳氮比、初始pH值也存在差异.     

捕食线虫性真菌弯孢节丛孢的分离与鉴定

目的:通过对捕食线虫性真菌的分离与鉴定为家畜寄生线虫病防治的工作者提供更多候选菌种。方法:采用玻片法、琼脂块法,观察分生孢子和分生孢子梗形状并测其大小,从而进行形态学鉴定。结果:分生孢子无色,长椭圆形,1个分隔。分生孢子梗无色,直立,不分枝,8~11个分隔,顶端形成烛台状分枝,在短而小的齿梗上产生3~12个分生孢子,稀疏,呈头状排列,厚垣孢子黄色,球形或椭圆形,单生或串生,直径14~22μm,一般在培养20 d后形成。捕食器为粘性网。最终鉴定为弯孢节从孢。     

少孢节丛孢菌捕食器表面聚合物的诱导与提取方法研究

为研究捕食线虫性真菌——少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)捕食器表面聚合物的生化性质与作用,建立一种高效的表面聚合物诱导与提取方法尤为关键。试验首先用大豆蛋白胨液体培养基在氨基酸诱导作用下,产生大量含捕食器菌丝,然后分别用了5种不同化学性质溶液提取表面聚合物,经透析和浓缩后,测定了其中蛋白质的含量及其对线虫幼虫的毒性作用,同时还进行了提取液对真菌菌丝生长及其捕食作用的研究。通过综合分析得出,用5 mol/L LiCl溶液提取表面聚合物最为有效,其提取的表面聚合物溶液对线虫没有明显的杀线虫活性,但与捕食性真菌黏附捕获线虫过程密切相关;并通过比较源自含捕食器菌丝和普通营养菌丝的表面聚合物物质之间的差别,找到了参与黏附捕获线虫过程的物质,这为今后深入开展对捕食线虫性真菌表面聚合物的研究,进而阐明其作用机理提供了有价值的资料。     

杀线虫真菌--少孢节丛孢菌胞外丝氨酸蛋白酶的研究进展

在家畜寄生性线虫的生物控制中,利用带线虫真菌——少孢节丛胞菌在侵染线虫过程中分泌的胞外蛋白酶,固定线虫并降解其体壁已显示出巨大的应用潜力。近年来,国外学者主要研究了杀践虫真菌胞外蛋白酶．特别是对少孢节丛孢简胞外丝氨酸蛋白酶基因PⅡ的分离、测序分析、诱导和利用基因工程技术对该蚤白酶基因克隆和异源表达进行了研究。笔者对杀线虫真菌少胞节丛孢菌的研究进展作了阐述。     

少孢节丛孢菌捕食器表面聚合物在捕食线虫过程中的作用研究

为了解捕食性真菌——少孢节丛孢菌捕食器表面聚合物的性质及在捕食线虫过程中的作用,作者首先用氨基酸诱导产生大量捕食器(菌环和菌网)菌丝,然后分别应用5种不同化学性质的溶液、2种酶和7种蛋白酶抑制剂处理捕食器表面聚合物,观察对捕食和致死线虫作用的影响,同时使用上述物质或溶液处理菌丝以确定对菌丝生长的影响。结果表明:5 mol.L-1LiCl溶液和链霉蛋白酶E可明显降低真菌的捕获线虫的能力;0.1 mol.L-1NaOH、SDS-巯基乙醇-尿素PBS溶液、1.5%(w/v)SDS除可抑制捕获虫体外,同时还抑制了真菌菌丝的生长;除菲啰啉外,其余6种酶抑制剂对真菌的黏附捕获作用无明显影响;但其中丝氨酸蛋白酶类抑制剂还可抑制真菌对线虫的致死作用;另外用酶抑制剂处理线虫后,对真菌的黏附捕获作用也无明显影响。上述结果表明少孢节丛孢菌捕食器表面聚合物在黏附捕获线虫过程中起关键作用,其为蛋白质或含蛋白质类物质;并间接证实黏附捕获阶段不需要蛋白酶参与,但其在致死线虫阶段会发挥重要作用。这为阐明捕食性真菌作用机理提供了非常有价值的资料。