动物性食品源弓形菌23S rRNA基因PCR检测方法的建立

建立了一种快速、准确检测弓形菌(Arcobacter)的PCR方法。根据弓形菌23S rRNA基因序列设计引物,对弓形菌标准菌株、弓形菌食品分离株及非弓形菌属菌株进行PCR扩增。结果表明,弓形菌标准菌株和35株弓形菌食品分离株扩增后均可得到688 bp的目的条带,11株非弓形菌属菌株均未见任何扩增条带,对弓形菌的最低检测限为1.12×103CFU/mL。该方法操作简单、检测周期短、灵敏度高、特异性好,可用于食品中弓形菌的快速检测。     

秋季罗非鱼及其养殖环境中食源性致病菌菌相分析

[目的]为罗非鱼食源致病微生物的预警和防治提供理论基础。[方法]对秋季广东省不同区域3个养殖场的正常罗非鱼体及其养殖环境中食源性致病菌种类进行调查分析。[结果]罗非鱼及其养殖环境受致病微生物不同程度的污染,分离到的致病菌经初步鉴定为10个菌属,其中以埃希菌属最多,鱼体检出率为67％,养殖环境检出率为100％;沙门氏菌属在罗非鱼体中的检出率（52％）比养殖环境中检出率（39％）高;其次为克雷伯氏菌属、假单胞菌属、链球菌属、变形杆菌、肠杆菌属、金色单胞菌属、伯克霍尔德氏菌属等。[结论]秋季罗非鱼体及养殖环境正受各种致病菌不同程度的污染。     

食品中食源性致病菌安全问题分析

收集了近年来食源性致病菌监测数据,分析了水产品、生肉、蔬菜、熟肉、豆制品和速冻米面食品6类食品受沙门氏菌(Salmonellaspp)、单增李斯特菌(Listeria monocytogens)、副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、O157:H7(Escherichia coli O157:H7)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的污染水平差异,确定出高危食品种类。结合国内外食品中食源性致病菌限量、检测方法,分析了目前食源性致病菌监管工作的难点,提出了我国食源性疾病监测中存在的不足并给出相应的建议。     

2013年青海省市售食品中食源性致病菌监测分析

目的 了解青海省市售食品中食源性致病菌的污染状况,为食品安全监管及食源性疾病防控提供科学依据。方法 按照《全国食品安全风险监测工作手册》要求,结合我省各地经济发展水平、人口分布状况、食品主要生产、加工、销售等的分布情况进行采样,按照《食源性致病菌监测工作手册》对样品进行检测。结果 2013年共采集10类食品2698份样品, 检出蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等70株食源性致病菌,致病菌总检出率为2.6%,检出率较高的食品类别为婴幼儿食品、乳粉、桶装水。结论 青海省市售食品中食源性致病菌检出率较低;但应进一步加强市售婴幼儿食品、乳粉、桶装水等主要受污染食品的监督管理。     

食源性致病菌快速检测方法研究进展

食品中的病原微生物是影响食品安全的主要因素之一,传统检测食源性致病菌的方法繁琐复杂、周期较长,因而快速、简便、特异的检测方法成为研究的热点。介绍并分析了几种快速检测食源性致病菌的方法及其特点,就其发展和应用进行了综述。     

不同增菌基对食品沙门氏菌增菌检出效果比较

本试验以三种对A—E群沙门氏菌纯菌增菌和选择性增菌效果好的增菌基,对540份猪肉、250份白条鸡和200枚鸡蛋检样进行沙门氏菌培养,比较它们的增菌检出效果。结果表明:ISC对三种食品中沙门氏菌的平均检出率41.6％、菌株检出符合率94.1％、明显高于SC、SGB,说明ISC比SC和SBG适用性广、增菌性能好,在应用中可以取代SC和SBG。     

食源性致病菌耐药性研究现状

耐药菌株的广泛传播,使得细菌耐药现象越来越严重,严重影响临床上食源性致病菌引起的疾病的治疗,增加了治疗成本和新药的研发成本,也缩短了新药的应用周期,尤其在人畜同药的情况下,耐药性通过畜产品以及环境等多种途径造成交叉传播,直接对人类的健康构成威胁。从食源性致病菌耐药性的危害、食源性致病菌耐药现状、耐药机制及耐药性传递机制以及耐药性防控措施等几方面做出综述。     

食源性致病菌基因组DNA的高效提取方法

研究高效提取食源性致病菌DNA的方法,以适用于变性高效液相色谱基因分型法的高通量快速检测.试验采用沸水浴法、酚/氯仿-CTAB法、chelex100法和酶解吸附膜法分别提取沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、空肠弯曲菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、溶藻弧菌、肠出血性大肠杆菌O157∶ H7、创伤弧菌中主要的食源性致病菌基因组DNA.并对基因组DNA的纯度和产量进行测定,通过定性、定量分析,确定了适用于食源性致病菌快速检测的DNA提取方法--酶解吸附膜法.     

贵阳市猪肉中三种食源性致病菌的耐药性研究

采用琼脂稀释法,考察贵阳市猪肉中3种食源性致病菌（沙门氏菌Salmonella、志贺氏菌Shigella Castella-ni、空肠弯曲菌C.jejuni）对氧氟沙星、环丙沙星、头孢噻呋钠、卡那霉素、氨苄西林、链霉素、阿莫西林、庆大霉素、四环素、磺胺嘧啶钠10种抗菌药物的耐药现状。结果表明,3种食源性致病菌对10种抗菌药物的耐药率普遍较高,其中沙门氏菌和空肠弯曲菌对四环素的耐药率均达到100.0%。志贺氏菌的多重耐药主要集中在五重到七重之间,而沙门氏菌和空肠弯曲菌主要集中在七重至十重。说明贵阳市猪肉中沙门氏菌、志贺氏菌和空肠弯曲菌对多种抗菌药物呈现不同程度的耐药性,且多重耐药的比例较大。     

三种常见食源性致病菌的多重PCR快速检测

为建立对3种食源性致病菌—大肠杆菌(Escherichia coli)、沙门氏菌(Salmonella typhimurium)和单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)的快速、敏感、特异的多重PCR诊断检验方法,本研究设计了上述3种菌的特异性PCR引物,通过单一、双重及三重PCR反应检测,并对人工感染的饮料和面包2种食品进行验证.结果表明,3种食源性致病菌的单一、双重和三重PCR均成功扩增出目的片断,没有非特异性扩增.人工感染食品的PCR检测也获得了目的菌的特异性片段,并且结果稳定.本研究所建立的多重PCR反应系统具有较好的特异性和灵敏性,为食品中常见致病菌的检测提供了一种快速、简便、可靠的方法,具有重要的理论意义及实践意义.     

4种食源性致病菌的PCR-SSCP检测技术研究

采用细菌的16S rDNA保守区引物作为通用引物,对常见食源性致泻大肠埃希氏菌(Diarrheogenic Escherichiacoli)、沙门氏菌(Salmonellae)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)进行PCR扩增,产物及其XmnI酶切后产物进行单链构象多态性分析。试验结果显示,4种食源性致病菌的PCR产物经XmnI酶切后进行单链构象多态性分析可以相互区别。因此,PCR-SSCP技术可以方便地用于检测食源性大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌。     

4种食源性致病菌多重PCR检测技术的研究及应用

为建立一种利用多重PCR技术检测和鉴定沙门氏菌(Salmonellla spp)、单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)的方法,根据沙门氏菌侵袭力蛋白A基因(invA gene)、单核细胞增生李斯特菌蛋白转录调控基因(prfA gene)、金黄色葡萄球菌自溶素基因(alt gene)、蜡样芽孢杆菌的促旋酶B亚单位基因(gyrB gene)设计引物,进行多重PCR扩增,并对多重PCR反应体系进行优化。在此基础上建立了4种致病菌的多重PCR检测体系,同时以国标法进行对比验证。结果表明,本研究建立的多重PCR检测方法简单、快速、灵敏度高,具有很好的应用前景。     

拮抗细菌的研究进展

植物病害拮抗细菌的筛选和应用是植物病害防治的研究热点。拮抗细菌及其代谢产物的开发利用，以及通过基因工程改造产生新型、高效、稳定、适生性强的拮抗细菌是今后生防菌发展的趋势。分析了拮抗细菌作为生物防治措施的成功例子与存在的问题，同时讨论了拮抗细菌的作用机制和拮抗物质的性质，进而对拮抗细菌的发展趋势有了进一步的了解。     

金银花对5种畜禽致病菌的体外抑菌作用

试验探讨了金银花对畜禽致病菌的体外抑菌作用。应用牛津杯法和试管2倍稀释法对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、猪链球菌抑菌作用进行了研究,2种试验结果一致表明,金银花对上述细菌均有抑菌作用。其中,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌和链球菌有较好的抑菌作用,最小抑菌浓度为1/32 g/mL,对绿脓杆菌有较低的抑制作用,最小抑菌浓度为1/8 g/mL。     

5种中草药和9种抗生素对养殖鳗鲡主要致病菌的抑制作用

[目的]探讨5种中草药和9种抗生素对养殖鳗鲡主要致病菌的抑制作用及最低抑菌浓度。[方法]采用琼脂稀释法测定了5种中草药(五倍子、石榴皮、大黄、虎杖、黄芩)和9种抗生素类药物(盐酸林可霉素、硫酸庆大霉素、硫酸阿米卡星、硫酸链霉素、青霉素钠、阿莫西林、诺氟沙星、土霉素、磺胺甲噁唑)对12株养殖鳗鲡致病菌的体外抑菌效果。[结果]5种中草药对12株主要致病菌均有较好的抑菌作用,平均最低抑菌浓度(MIC)范围为0.063～6.000 mg/ml。9种抗生素类药物中有3种抗生素对12株致病菌有较好的抑制效果,分别是硫酸庆大霉素、硫酸阿米卡星和诺氟沙星,其MIC≤10 mg/L。12株致病菌对硫酸庆大霉素敏感(MIC≤8 mg/L)的有10株,占83.3%;对硫酸阿米卡星敏感(MIC≤8 mg/L)的有4株,占33.3%;对诺氟沙星敏感(MIC≤8 mg/L)的有7株,占58.3%。[结论]五倍子、石榴皮、大黄、虎杖、黄芩5种中草药以及硫酸庆大霉素、硫酸阿米卡星、诺氟沙星3种抗生素类药物对12株养殖鳗鲡致病菌有较好的抑制效果。     

污水灌溉后土壤中病原菌的传输特性研究

通过全面研究污水灌溉后病原菌的传输过程,提出了定量划分吸附后的病原菌的方法,分析了污水灌溉后土壤吸附作用的去除效果,旨在为污水病原菌的健康风险评价提供理论基础,同时也为采取人工措施防控污水中病原菌的数量提供依据。     

五株食源性致病菌特异性卵黄抗体的研制

目的:确定制备用作食品添加剂的引起食品中毒常见的5种致病菌的高免卵黄抗体的技术参数。方法:以食品中常见的由该实验室分离和鉴定的沙门氏菌,金黄色葡萄球菌,溶血性链球菌,副溶血弧菌．变形杆菌五株地方性致病菌株的等量混合茵液用油佐剂乳化后免疫新开产的蛋鸡,收集高免蛋．利用水稀释法制备多克隆卵黄抗体,并用超滤法对其进行浓缩。结果:免疫后高免蛋收集的最佳时间为三免后第2-8周,水稀释法最佳稀释比例为1:6,pH值为5．2,通过超滤IgY浓度提高了6．48倍,IgY的纯度由原来的24．6％提高到42．3％。结论:通过上述工艺参数可以大量制备针对5株病原菌特异性的高滴度卵黄抗体,最终浓度为1426μg/ml。     

抗植物病原真菌海洋细菌的抗菌作用研究

利用植物病原真菌雪腐镰刀病菌(Fusarium nivale)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)、玉米小斑病菌(Biploaria maydis)、玉米圆斑病菌(Helminthosporium carbonum)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、细链格孢菌(Alternaria tenuis)、小麦根腐霉病菌(Biploaris sorokiniana)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)和斑点落叶病菌(Alternaria alternata)作为指示菌,采用平板对峙法测定海洋细菌的抑菌作用,用打孔法测定海洋细菌的无菌发酵液对指示菌菌丝生长的抑制作用.结果表明:海洋细菌及其发酵液对供试的植物病原真菌具有较强的抗菌作用;显微观察结果表明海洋细菌导致病原真菌菌丝扭曲、分生孢子芽管畸形.其中菌株L1-9对植物病原真菌生长的抑制作用最强,对9种植物病原真菌都有较强的抑制作用.