荧光假单胞菌CZ对TMV的抑制作用及其活性蛋白的分离纯化

从烟草根际中分离到一株拮抗烟草花叶病毒(TMV)的生防菌荧光假单胞菌CZ,将其发酵液接种或喷施TMV寄主三生NN烟后进行生物学检测.结果表明:荧光假单胞菌CZ发酵液与TMV混合后接种,其枯斑抑制率为91.5％;接种TMV的前、后24h喷施CZ发酵液,对TMV的抑制率分别为78.9％和30.5％.荧光假单胞菌CZ发酵液经硫酸铵盐析获得活性粗蛋白,经阴离子层析、superdex-G-75凝胶层析和SDS- PAGE检测,分子量为39.4 kD.     

几种植物提取液对感染TMV烟草叶片核酸及类黄酮含量的影响

[目的]研究几种提取液对烟草花叶病毒（TMV）的抑制作用及其防治效果,为植物源抗病毒类生物农药的研制提供依据。[方法]以K326为试验材料,采用常规摩擦接种,感染病毒后,喷施白花蛇舌草、莲提取液及由20种植物加工而成的植物源抗病毒制剂（配伍制剂）,于接种后第5、10、15、20天测定核酸及类黄酮含量,分析几种提取液对TMV的抑制作用。[结果]喷施植物提取液后,烟株体内的DNA含量升高,均高于阳性对照,说明烟株细胞恢复了正常的合成能力;而RNA含量比阳性对照低,说明烟株体内的TMV含量降低,喷施植物提取液能够恢复植物细胞的正常功能;类黄酮含量增加。植物提取液抑制了TMV在烟株体内的复制能力,其中以配伍制剂的效果最好。[结论]喷施植物提取液能够恢复植物细胞的正常功能,以喷施配伍制剂的效果最好。     

漂盘培养液中TMV含量对烟草花叶病发病情况的影响

[目的]为提高烟叶产量和品质提供参考。[方法]以普通烟K326和心叶烟为材料,用12．7、1．27、0．127、0．0127μg/ml烟草花叶病毒（TMV）液对K326进行漂盘培养,培养5、10、15、20、25d后随机取各处理K326叶片得叶片提取液,用各处理提取液接种8叶期心叶烟叶片,调查K326的发病情况及心叶烟的枯斑数。[结果]12．7ug／mlTMV处理K326表现出发病症状,其他处理未表现明显发病症状;随着培养液中TMV浓度的升高,各处理烟叶提取液接种心叶烟产生的枯斑数逐渐增多,且枯斑数随病毒接种时间的延长迅速增加;12．7、1．27μg/mlTMV处理K326叶片提取液接种20d后心叶烟枯斑数最多,0．127、0．0127μg／mlTMV处理K326叶片提取液接种25d后心叶烟枯斑数最多。[结论]烟草花叶病的发病率和病情指数与培养液中TMV的浓度有关。     

放线菌ZX01菌株发酵产物抗TMV活性的初步研究

【目的】探明新发现的一种放线菌ZX01菌株发酵产物对烟草花叶病毒（TMV）的抑制活性,为该菌株在植物病毒病害防治中的开发应用提供依据。【方法】以心叶烟和普通烟K326为材料,采用半叶枯斑法、叶圆片法和室内盆栽试验,测定放线菌ZX01菌株发酵产物抗TMV活性。【结果】放线菌ZX01菌株发酵产物对TMV具有明显钝化作用,其中发酵液在对TMV钝化10,30和60 min后,抑制率分别为62.29%,75.46%和84.78%;接种TMV 6 h后,在普通烟K326上,ZX01菌株发酵液对TMV复制增殖的抑制率可达53.27%;并且ZX01菌株发酵液对烟草花叶病毒病寄主保护和治疗作用显著,其保护和治疗作用的防治效果分别为54.48%和44.85%,明显高于对照药剂病毒A。【结论】放线菌ZX01菌株代谢产物对TMV有较高的抑制活性,值得在菌种鉴定、发酵条件优化、活性物质的分离与鉴定等方面进行深入研究。     

叶面抗菌剂对烟草病毒病的防效研究

以心叶烟为枯斑寄主,测定了叶面抗菌剂J-1室内盆栽试验,结果表明,叶面抗菌剂J-1先接种后施药、先施药后接种以及病毒与叶面抗菌剂混合处理的抑制效果中,原液的抑制效果分别为74.17%、35.73%和89.08%,表明叶面抗菌剂具有体外钝化作用。田间防效测定结果表明:叶面抗菌剂J-1对PVY、CMV和TMV的防效优于常规药剂3.95%病毒必克500倍液和2%菌克毒克250倍液。     

牛心朴子草对烟草病毒病的防效试验

采用室内枯斑寄主法和田间生测试验,测定了植物源Antofine抗病毒水剂——牛心朴子草W制剂对烟草病毒病的防治效果。室内测定结果显示:将牛心朴子草W制剂与病毒汁液混合后接种,对病毒的抑制效果为70%~80%;先喷制剂,24 h后再接种病毒,对病毒抑制效果为40%~50%;先接种病毒,2 h后再喷制剂,基本无抑制效果。田间对烟草病毒病的防治效果显示:牛心朴子草W制剂对PVY、CMV和TMV的综合防治效果为40%~50%,与目前生产上用的常规药剂病毒必克和菌克毒克防效相近。     

长梗喉毛花中3种化合物抗烟草花叶病毒活性分析及其对4种防御酶活性的影响

【目的】评价从长梗喉毛花[Comastoma pedunlulatum (Royle ex D. Don) Holub]中分离得到的3种化合物的抗烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）活性及其对烟草4种防御酶活性的影响,为研发有效防治TMV的植物源农药提供先导化合物和理论依据。【方法】以心叶烟为试验材料,设化合物处理（当药黄素、高杯喉毛花内酯A和异荭草素）、空白对照（CK）和药剂对照（8%宁南霉素）处理,采用半叶枯斑法测定化合物对TMV侵染的预防保护和钝化作用;以普通烟草栽培品种K326为试验材料,设对照[空白对照（CK）和接种对照（CK+TMV）]、宁南霉素[药剂对照（PC）]、当药黄素、高杯喉毛花内酯A和异荭草素处理,利用防御酶检测试剂盒测定各处理烟草叶片中多酚氧化酶（PPO）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化物酶（POD）活性。【结果】先施用被试物后接种TMV,当药黄素、高杯喉毛花内酯A和异荭草素在100μg/mL时均减少TMV在心叶烟上的枯斑数目,对TMV的抑制率分别为50.05%、57.55%和61.73%,对TMV侵染均具...     

氨基寡糖素与镁锌混配对烟草TMV的防控效果及生理分析

通过三生烟草(Sam Sun N.N)枯斑试验和接种TMV病毒的K326品种烟株体内生理指标分析,研究了氨基寡糖素与中微肥混配对烟草花叶病毒(TMV)的体外钝化、侵染抑制效果和综合防病效果,以及由其引起的烟叶叶绿素、防御酶活性及病程相关蛋白等生理指标变化。结果表明:三生烟草枯斑试验中,氨镁锌混配剂对TMV病毒有明显的体外钝化和侵染治疗效果,病毒抑制率分别比单独施用氨基寡糖素提高20.6和10.1个百分点;K326品种烟株接种TMV病毒施用相应药剂,接种后7、11和30 d时的病情指数均以氨镁锌混配剂处理氨基寡糖素单剂CK;而上述烟株体内叶绿素的含量和SOD、POD和PAL酶活性则以氨镁锌混配剂处理总体最高;氨镁锌混配剂处理诱导病程相关蛋白PR3和PR5相对表达量显著性升高,达到对照的0.79倍和1.51倍。这说明,氨基寡糖素与镁锌混配对抑制TMV侵染和提高烟株抗性的效果比单独施用氨基寡糖素好。     

植物单宁对烟草花叶病毒的抑制活性

测试了从11种植物提取的单宁对烟草花叶病毒(TMV)的抑制活性.结果表明:(1)任一植物的单宁质量浓度为5.000或2.500mg·mL-1时,与TMV混合10min后接种,其抑制率均达80%以上.(2)单宁质量浓度为5.000mg·mL-1时,与TMV混合后立即接种,其抑制率也均达80%以上,表明单宁与病毒粒体作用时间很短.(3)TMV与单宁混合,透析3d后,可恢复大部分侵染力;混合3d但未作透析处理,与混合10min的处理相比,抑制率下降,表明部分植物的单宁体外稳定性可能较差,与TMV粒体作用能力下降.(4)这11种植物的单宁对TMV体内抑制复制效果不明显.(5)大飞扬、杠板归、虎杖3种植物的单宁,在接种前先喷施心叶烟再接种TMV,可抑制病毒的初侵染;在接种前先喷施普通烟草K326再接种TMV,烟株发病期推迟3-8d.     

VFB抗烟草花叶病毒活性及对烟草叶片超微结构的影响

【目的】评价植物源病毒抑制剂VFB的抗烟草花叶病毒(TMV)活性,并初步探讨其作用机理。【方法】以心叶烟(Nicotiana glutinosaL.)和普通烟(Nicotiana TabacumL.)为寄主材料,采用半叶枯斑法测定了VFB对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的体外钝化作用及对TMV初侵染和增殖的抑制作用,并用透射电镜技术研究了VFB对感染TMV烟草叶片超微结构的影响。【结果】VFB对TMV具有明显的体外钝化作用,在对TMV钝化0.5,1和2 h后,其抑制率分别为44.41%,55.62%和64.43%;VFB对TMV侵染心叶烟具有较好的预防作用,其50倍稀释液在24和48 h的抑制率分别达到54.33%和55.60%,均优于对照药剂病毒A;VFB对TMV有一定的治疗作用,其50倍稀释液的抑制率为36.15%,略低于对照药剂病毒A。烟草叶片病理结构的超微观察表明,普通烟感染TMV后,叶片中大部分细胞结构会受到不同程度的破坏,经VFB处理的烟草,花叶症状减轻,叶片中的TMV粒子显著减少,叶绿体和线粒体的解体症状减轻,并产生大量嗜锇颗粒和膜体。【结论】VFB对TMV具有较好的抑制作用。     

植物诱导抗病剂组合应用对烟草花叶病的防控效果

[目的]探讨植物诱导抗病剂组合对烟草花叶病的防控效果。[方法]在模拟病圃环境下,研究了6种植物诱导抗病剂的不同组合对烤烟栽培品种红花大金元的烟草花叶病的防控效果。[结果]多肽保与AHO 2种诱导剂的组合应用对控制TMV有良好效果,能明显推迟带毒隐症烟株TMV的发病时间,移栽后70 d对以清水和东旺毒消为对照的大田期烟株TMV的平均防效分别达到69.64%和43.25%,且在株高、叶数方面表现出明显优势,叶片生长发育状况良好。烟苗携带TMV病毒与症状能否表现无直接相关性,带毒隐症烟苗只有在发病条件适宜时才会表现症状。带毒隐症烟苗栽后19 d内是TMV发病的高峰期,在育苗阶段与大田期施用有效药剂,以及移栽后促进烟苗早生快发是控制其发病的关键措施。[结论]为制定烟草花叶病的防控措施提供了理论依据。     

转截短hpalXoo基因烟草抗病防御酶活性分析

[目的]探讨转截短hpalXoo基因烟草中与抗病性有关的5种防御酶系的活性变化.[方法]以转截短hpalXoo基因烟草A6-1和对应的非转基因烟草Xanthi叶片为材料,接种烟草花叶病毒（TMV）,测定苯丙氨酸解氨酶（PAL）、多酚氧化酶（PPO）、过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活性.[结果]未接TMV时,转截短hpalXoo基因烟草中POD、PPO和CAT酶活性均高于未转基因对照品种,而SOD和PAL活性与未转基因烟草无显著差异.接种TMV后,转截短hpalXoo基因烟草中5种防御酶活性均显著增加,且高于未转基因烟草,并维持在一个较高的水平.[结论]截短的hpalXoo基因在烟草中表达能显著提高其抗病防御酶活性水平.     

β-氨基丁酸诱导烟草抗烟草花叶病毒系统侵染的研究

[目的]研究阻氨基丁酸（BABA）对烟草抗烟草花叶病毒（TMV）系统侵染的影响。[方法]以烟草普通栽培种为研究对象,用BABA进行处理．处理后所有的烟苗均放入保湿袋中保湿24h。然后用组织化学法鉴定BABA诱导烟草产生的过敏反应,并进行产生H2O2,原位检测以及活性氧和丙二醛测定。（结果]BABA处理后叶片中的,β-1,3-葡聚糖酶活性升高,1MV接种后叶片中该酶活性也进一步升高。10mmol／LBABA喷洒处理能显著诱导氧进发,引起过敏性反应,叶面局部细胞坏死。处理叶片中的过氧阴离子自由基、丙二醛含量增加。10mmol／LBABA有效激发植株的系统抗性,限制TMV的侵染,增强了烟草对TMV的抗性。[结论]BABA可增强普通烟草栽培品种抗TMV系统侵染的能力。但其诱抗能力要受其浓度的影响。     

毛叶子花提取液对感染TMV烟株的生理效应及品质的影响

以毛叶子花提取液对感染烟草花叶病毒(TMV)的烟株发病前后进行处理,测定了烟草叶片中与抗病毒性相关的部分生理生化指标的变化及对烟草品质的影响。结果表明:毛叶子花提取液能使烟叶总酚含量升高、苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性增强、膜透性及烟叶品质有所改善,预防处理优于治疗处理。可见,毛叶子花提取液可诱导植物产生抗病性,增强烟草对TMV侵染的抵抗力。     

15种中草药抗烟草花叶病毒活性的研究

[目的]测定15种中草药提取物抗TMV的活性。[方法]利用半叶枯斑法,初筛测定15种中草药对TMV钝化作用,复筛测定其对TMV初侵染和复制增殖作用。[结果]商陆、大黄、板蓝根、金银花4种中草药表现出明显的TMV体外钝化作用,其钝化抑制率均在50%以上;复筛测定4种中草药抗TMV初侵染和复制增殖活性,大黄表现出较好的活性,且与其他3种中草药相比差异显著。盆栽试验表明,植物提取液(大黄)在100倍液下,喷雾加灌根的施药方式对烟草病毒病的防效最好,达49.00%,优于对照药剂20%吗啉胍·乙铜可湿性粉剂。[结论]15种中草药中大黄具有较优的抗TMV活性,值得进一步研究。     

TMV接种烟株后不同部位与不同时期病毒相对含量的研究

 选择不同时期烟株接种烟草花叶（TMV）,并在不同时期取样,应用TAS-ELISA法对370个样品进行了检测分析。结果表明,烟株不同接种时期各部位病毒相对含量高低的排列顺序是:团棵期接种叶,苗期接种叶,团棵期接种根,苗期接种根,苗期接种茎,团棵期接种茎,旺长期接种茎,旺长期接种叶,旺长期接种根。样品与阴性对照OD值之比由高到低分别是13.33,7.366,5.737,4.4,4.29,4.216,3.559,3.14,2.754,差异显著,这一结果排列中团棵期接种后叶病毒相对含量最高的规律,与田间发病率消长规律中团棵期通过叶片调查烟株发病率最高的趋势基本吻合。苗期、团棵期、旺长期这3个不同时期接种TMV后病毒相对含量由高到低排列顺序是:团棵期,苗期,旺长期。接种TMV后烟株花器病毒相对含量由高到低的排列顺序是:花冠,子房,花萼,雄蕊,雌蕊。     

6％抗坏血酸水剂在烟草上的施用

采用6%抗坏血酸水剂对影响烟叶面积、烟叶干重、上等烟比例及烟草花叶病病情指数等各项指标的变化进行试验。结果表明:6%抗坏血酸水剂被烟草叶、茎吸收后,可调节生理机能,促进其生长发育,增强机体抗逆性和提高免疫能力,能使烟叶面积较对照平均提高14.0%、烟叶干重提高4.2%、上等烟叶比例提高2.7%,对烟草花叶病的平均防效高达90.7%,有利于优质烟叶生产,可在生产上大面积推广应用。     

“绿之侠”抗病毒营养液对烟草花叶病及产质量的影响

[目的]探讨“绿之侠”抗病毒营养液对烟草普通花叶病及产质量的影响。[方法]在大田栽培条件下，研究了“绿之侠”抗病毒营养液不同浓度及3种抗病毒药剂对云烟97的烟草花叶病及产质量的影响。[结果]‘‘绿之侠”对烟草花叶病有较好的防控效果，其中打顶期“绿之侠”450倍液与清水和以8％混脂·硫酸铜水乳剂500倍液相比，对烟株烟草花叶病的平均防效分别达到65．53％和37．06％，且农艺性状表现出一定优势。[结论]‘‘绿之侠”对烟草花叶病有较好的防治效果，且对烟株生长有一定的促进作用，有助于提高烟叶产质量，其中“绿之侠”450倍液表现较好。