大白猪MUC13基因多态性与生长、肉质性状的相关性

选择对仔猪腹泻有显著影响的产肠毒索大肠杆菌（ETEC）F4ac的受体基因MUC13为研究对象,采用PCR-SNaPshot判型与常规育种技术相结合的方法,对544头大白猪核心育种群进行基因判定及基因型与生长、肉质性状相关性的研究．结果表明,大白猪MUC13基因型分布大小为：腹泻易感杂合基因型GA〉腹泻抗性纯合基因型GG〉腹泻易感纯合基因型从,腹泻抗性有利基因G的等位基因频率为0．669,腹泻易感不利基因A的等位基因频率为O．331．3种基因型个体达100kg日龄及其估计育种值（EBV）、达100kg背膘厚及其EBV的大小为：从〉GA〉GG;眼肌面积、肌内脂肪含量和估计瘦肉率的大小为：GG〉GA〉AA,差异不显著（P〉0．05）．可见,在种猪选育上,逐代选择带有G等位基因的个体,建立抗性纯合GG基因型个体的种猪核心群,即可降低仔猪腹泻率,又不影响生长和肉质的性状．     

绵羊IGF-Ⅰ和IGF-Ⅰ R基因特征分析及其在肌肉组织中的表达差异

为了比较IGF-Ⅰ和IGF-ⅠR基因在绵羊肌肉中的表达差异,根据GenBank公布的绵羊IGF-Ⅰ和IGF-ⅠR基因mRNA序列设计特异性引物,采用实时定量PCR方法检测其在甘肃‘高山细毛羊’及其与南非肉用‘美利奴’杂交F1代(南甘F1代)羔羊肌肉组织中的表达量.利用生物信息学软件分析了绵羊IGF-Ⅰ和IGF-ⅠR基因结构,并构建系统进化树,探讨了其生物学功能.结果表明:南甘F1代羔羊肌肉组织中IGF-Ⅰ基因的表达量显著高于‘甘肃高山细毛羊’(P0.05),而IGF-ⅠR基因的表达量在南甘F1代羔羊和‘甘肃高山细毛羊’肌肉组织中没有显著变化(P0.05).绵羊IGF-Ⅰ和IGF-ⅠR基因分别含有465bp和4 518bp的完整开放阅读框,编码154个和1 505个氨基酸;其蛋白质分子量分别为17 011.71U和169 267.26U,等电点分别为9.36和6.70;IGF-Ⅰ基因信号肽切割点分别位于49~50位氨基酸之间,而IGF-ⅠR基因不含信号肽;IGF-Ⅰ基因编码产物的二级结构主要以无规则卷曲和α-螺旋为主,位于细胞核的可能性最高(62.5%);IGF-ⅠR基因编码产物的二级结构主要以无规则卷曲为主,位于细胞质的可能性最高(34.8%);IGF-Ⅰ和IGF-ⅠR基因分别作为激素和信号传感器参与机体生物学过程.     

大白猪pGH基因的多态性与生长性状的关联研究

本研究利用HRM分型的方法检测了大白猪生长激素(pGH)的多态性,并对其与生长性状进行关联性分析。以246头大白猪作为研究对象,利用DNA提取试剂盒提取耳组织DNA,对20个样本进行PCR扩增后,通过测序方法寻找该基因在该群体中的多态性位点,针对已发现的多态性位点设计HRM专用引物,利用HRM方法对剩余226头大白猪进行多态性检测,将所得结果与生产数据进行关联性分析。结果表明,在pGH基因中检测到一个突变位点1856CT,两个等位基因C和T,三种基因型CC、CT和TT。通过χ~2适合性检验显示,该基因的基因型频率和等位基因频率在小种群中分布差异不显著,符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05),但在大种群中该基因的基因型频率和等位基因频率分布差异显著,不符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05)。根据多态信息含量(PIC)分析显示,pGH基因在小群体中该群体处于低度多态(PIC0.25),但在大种群中属于中度多态(0.25PIC0.5)。在与生长性状的关联分析中发现,pGH基因对于20天重以及二月龄重具有较为显著的影响(P0.05)。综上所述,pGH基因对大白猪的生长发育具有一定的影响,为后续大白猪肉质性状与生长性状的现代分子选育提供一定的参考。     

湖北白猪IGF-1基因的克隆及序列分析

[目的]以湖北白猪肝脏作为试验材料,克隆出湖北白猪胰岛素生长因子（IGF-1）基因,并对其序列进行分析。[方法]采用Trizol法从湖北白猪的肝脏中提取总RNA,将其作为RT反应的模板,用P2（5＇-CAGGTAACTCGTGCAGAGCAAAGGA-3＇）引物合成IGF-1基因cDNA第一链,以其产物为模板,再以P1（5＇-CCCATCTCCCTGGATTTCTTTTTG-3＇）和P2为上下游引物扩增到大小约为607bp的产物,并将其克隆至pCRII载体上,经蓝白斑筛选、酶切、测序。[结果]经筛选、酶切、序列分析,表明该片段为IGF-1基因的cDNA克隆,它由607个核苷酸组成,其中1～145位是5＇端非翻译区,从第146位ATG起始密码子开始至第538位TAG终止密码子,539～607位是3＇端非翻译区,包含一完整的ORF,该ORF共有393核苷酸,编码一个推断由130个氨基酸组成的多肽。与GenBank中的序列比较,该序列与Muller等报道的猪IGF-1基因编码序列完全同源。[结论]成功克隆了湖北白猪IGF-1基因,并对其进行序列分析,证实了IGF-1基因的高度保守性,为采用转基因技术对湖北白猪进行育种奠定了基础和提供了技术依据。     

生长抑素基因免疫对湖羊羔羊生长及GH和IGF-Ⅰ的影响

为探讨生长抑素DNA疫苗免疫湖羊的效果,将生长抑素(SS)与乙肝表面抗原(S)基因融合构建真核表达质粒pES/2SS,分别与pE-CpG质粒、细菌DNA、脂质体粗品配合及重新构建的pES/2SS-GMCSF免疫断奶母羔羊,4周后以相同剂量加强免疫1次。结果显示,免疫组的抗体水平高于对照组(P<0.05),首次免疫4周和加强免疫2周后,细菌DNA佐剂组的抗体水平高于生长抑素单独免疫组(P<0.05),其抗体阳性率也为各免疫组最高。全期免疫组抗生长抑素抗体阳性率达36.0%;免疫羊的增重比对照组高18.82%(P<0.01)。加强免疫后2周,免疫组的GH和IGF-Ⅰ水平显著高于对照组(P<0.05),抗体阳性羊的GH和IGF-Ⅰ水平显著高于抗体阴性羊(P<0.01)。分析第2、4、6和10周所检测的各免疫组湖羊生长抑素抗体P/N值、GH、IGF-Ⅰ及周增重之间的相关性,发现生长抑素抗体与GH、IGF-Ⅰ、周增重显著相关(P<0.01),周增重与生长抑素抗体(P<0.01)、GH(P<0.01)、IGF-Ⅰ(P<0.05)显著相关。结果表明:SS基因免疫产生SS抗体,有效中和了内源性SS,影响了相关激素的分泌,促进羔羊生长。     

陆川猪肌肉生长抑制素基因的克隆与序列分析

[目的]对陆川猪肌肉生长抑制素（MSTN）基因进行克隆及序列分析,为后期开展MSTN因表达与陆川猪肌肉生长发育及脂肪沉积的相关性研究奠定基础.[方法]根据GenBank中已发表的猪MSTN因序列（NM 214435）设计引物,以陆川猪背最长肌组织总RNA为模板,RT-PCR扩增MSTN因cDNA序列,扩增片段经纯化、克隆、鉴定和测序分析,并应用生物软件进行蛋白质二级结构预测.[结果]克隆得到陆川猪MSTN因编码区1128 bp,与GenBank已公布的约克夏、汉普夏、杜洛克、梅山猪、藏猪、广西巴马小型猪的基因同源性均在99.8％以上.陆川猪MSTN因第294位点存在特有的碱基G,但未引起氨基酸改变.蛋白质二级结构预测结果表明,陆川猪的MSTN成熟肽包含有α螺旋、β转角、延长线和无规卷曲4种二级结构元件.[结论]猪MSTN因高度保守,可作为研究陆川猪肌肉生长发育和脂肪沉积的候选基因之一.     

湖羊GHR和IGF-Ⅰ基因表达的发育性变化 及其与肉质性状的关联

 【目的】探讨生长激素受体（growth hormone receptor,GHR）和胰岛素样生长因子-Ⅰ（insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ）基因在湖羊不同生长阶段背最长肌中表达丰度与肉质性能的相关性以及这两个基因表达水平的关联性,为湖羊肌肉生长性状的选育提供遗传学资料。【方法】利用荧光定量RT-PCR分析GHR和IGF-Ⅰ基因在湖羊早期生长背最长肌肉组织中的mRNA的发育性变化。【结果】①出生后随着月龄的增加,母羊GHR基因在背最长肌的表达趋势为：先升高后降低再升高再降低最后再升高,最后6月龄到达最高点;公羊GHR在背最长肌的表达趋势为：先升高到2月龄到达一个峰值,2月龄到4月龄为一个降低的过程,4月龄到6月龄又升高,并到达最高点;母羊IGF-Ⅰ基因在背最长肌的表达趋势为：由2日龄开始依次升高最后于6月龄到达最高点;公羊IGF-Ⅰ基因在背最长肌的表达趋势为：先升高到1月龄到达一个峰值,1月龄到3月龄为一个降低的过程,并于3月龄降至与初生接近相等的水平,此后随月龄增加逐渐升高,并于6月龄到达最高点;②GHR和IGF-Ⅰ基因在湖羊各月龄间大多存在显著或极显著差异,湖羊的公羊和母羊的GHR和IGF-Ⅰ基因的相同生长阶段的表达也大多存在显著或极显著差异;③GHR和IGF-Ⅰ基因的表达存在显著正相关（0.01＜P＜0.05）,GHRI和GF-I基因与肌纤维直径均存在极显著正相关（P＜0.01）,GHR与肌纤剪切力存在极显著正相关（P＜0.01）,IGF-Ⅰ与肌纤剪切力存在显著正相关（0.01＜P＜0.05）,GHR和IGF-Ⅰ基因与肌纤维密度均存在极显著负相关（P＜0.01）。【结论】性别和年龄对于GHR和IGF-Ⅰ基因在湖羊不同生长阶段的肌肉中的表达具有重要影响;出生后,各基因表达水平并非随之上升或者下降,各基因表达水平出现拐点的时间并不相同;GHR和IGF-Ⅰ基因在湖羊早期肌肉性状的表达为显著正相关,可以作为湖羊早期肉质性状的候选基因。     

陆川猪Leptin基因的SNP检测及其与部分生产性状的关联分析

以82头陆川猪为材料,根据猪Leptin基因序列设计一对引物,采用PCR-SSCP技术进行单核苷酸多态性(SNP)检测,发现一个SNP位点,并对该位点的3种基因型与陆川猪部分生产性状进行相关性分析。结果表明:CC型个体的断奶重和平均日增重显著高于TT型和CT型(P<0 05)。由此初步推断Leptin基因可能是影响陆川猪生产性状的候选基因之一或与主基因相连锁,可以用该位点对陆川猪生产性状进行标记辅助选择。     

水貂IGF-1R基因SNPs筛查及其与生长性状的关联分析

为分析IGF-1R基因部分SNPs与银蓝水貂与美国短毛黑水貂2个群体生长性状的关联性。以同龄同场的银蓝水貂和美国短毛黑水貂为研究对象,采用PCR产物直接测序法筛查IGF-1R基因CDS序列的多态位点,利用SPSS(19.0)软件GLM统计模型分析基因SNPs不同基因型与水貂生长性状的相关性。在线软件对IGF-1R基因进行生物信息学分析。结果表明:在IGF-1R基因外显子2和外显子8分别检测到G207A同义突变和G1782A同义突变,根据测序峰图对2位点进行基因分型。群体遗传学分析显示,G207A位点在银蓝水貂群体中属于低度多态,G1782A位点在银蓝水貂群体中属于中度多态,G207A和G1782A 2个位点在美国短毛黑水貂中均为中度多态;χ~2检验表明,银蓝水貂和美国短毛黑水貂群体在2个突变位点处于HardyWeinberg平衡状态(P0.05);关联分析表明,G1782A位点与美国短毛黑水貂的体重显著相关(P0.05),突变纯合子AA基因型个体的体重值显著高于GG基因型个体和GA基因型个体。因此G1782A位点适合于短毛黑水貂体重的分子标记选择。     

新扬州鸡IGF-Ⅰ基因多态性的PCR-SSCP检测及其与生长发育性状的相关性

以新扬州鸡胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因作为控制其生长、发育性状的候选基因,通过对IGF-Ⅰ基因主要部分序列进行PCR-SSCP检测,发现了2个多态位点.测序结果表明,IGF-Ⅰ基因存在2个突变位点:插入(G)和(G→C).分析多态位点与0-12周龄鸡生长发育性状的关联性,结果表明:插入(G)突变基因型中,2周龄鸡体重BB型与AB型差异显著(P<0.05),但AA型与AB型和BB型差异均不显著,而(G→C)突变各基因型间没有显著差异;插入(G)突变位点对0-12周龄鸡的龙骨长、胫骨长均没有显著影响,而(G→C)突变位点仅在鸡6周龄时表现出与龙骨长、胫骨长间的差异显著性.     

惠阳胡须鸡IGF-Ⅰ和GHRL基因多态性研究

以IGF-Ⅰ和GHRL基因为惠阳胡须鸡生长性状的候选基因,通过测序、酶切等方法对93日龄惠阳胡须鸡IGF-Ⅰ和GHRL基因多态性进行分析,并用GLM模型分析基因型与体质量的关联性。结果表明:IGF-Ⅰ基因在第181位发生碱基突变,A突变为G,属于同义突变,BsmⅠ酶切分析发现,IGF-Ⅰ基因只有1种基因型,表明该位点在胡须鸡保种群中已经纯合;GHRL基因在第124位发生碱基突变,T突变为G,改变了酶切位点,通过pfl MⅠ酶切分析发现,GHRL基因有3种基因型,即AA型、AB型和BB型。统计结果表明,93日龄惠阳胡须鸡3种基因型个体间体质量无显著差异。     

胰岛素、IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ及其对卵巢的作用

介绍了近年来胰岛素、胰岛素样生长因子Ⅰ和Ⅱ(IGF—Ⅰ和IGF—Ⅱ)的分子特征、受体性质以及它们促进动物卵巢的细胞代谢、甾体激素合成和受体表达的研究进展。     

大通牦牛IGF-Ⅰ基因多态性及其与生长性能相关性的研究

通过PCR-SSCP技术检测了大通牦牛IGF-Ⅰ基因的遗传多态性,对具有SSCP多态性的片段进行克隆和测序,找出等位基因的多态位点,将该位点多态性与大通牦牛生长性状进行相关性分析．结果显示：PCR-SSCP检测到大通牦牛具有AA、AB、BB3种基因型,A（B）等位基因频率分别为0．9028（0．0972）;对IGF-Ⅰ基因第1内含子进行序列比对,发现一处单碱基C的缺失／插入,造成了该位点多态性的出现;6月龄和12月龄基因型为AA的大通牦牛的体质量和体斜长最小二乘均值显著高于AB和BB基因型（P＜0.05）;18月龄基因型为AB的大通牦牛的体高最小二乘均值显著高于BB型（P＜0.05）,说明大通牦牛品种中基因型为AA的个体生长性状有高于AB和BB基因型的趋势,可以作为大通牦牛品种选育的目标基因型．     

大白母猪繁殖性状的相关及通径分析

通过对大白猪繁殖性状的测定,进行了繁殖性状间的相关及通径分析,结果表明本场的大白母猪的繁殖性状较优,但尚不够整齐,有待进一步选育提纯。     

IGF-1基因多态性对德化黑鸡产蛋性状遗传效应的研究

利用PCR—PstⅠ—RFLP技术对德化黑鸡的胰岛素样生长因子-1（IGF-1）基因的5′端调控区进行多态性分析,并探讨了多态性与产蛋性状的相关性。结果表明,该调控区的扩增产物用PstⅠ酶切检测出3种基因型AA、AB、BB。利用最小二乘分析研究了该多态位点对产蛋性状的影响,结果表明该多态位点对开产日龄没有显著影响,对240日龄产蛋数和300日龄产蛋数有显著影响（P〈0．05）。其中AA基因型的240日龄产蛋数和300日龄产蛋数显著高于AB基因型和BB基因型,表现为差异显著（P〈0．05）,AB基因型的240日龄产蛋数和300日龄产蛋数高于BB基因型,但表现为差异不显著（P〉0．05）。     

陆川猪3个产仔数相关基因的多态性及其效应分析

利用PCR-RFLP和PCR-SSCP技术对82头陆川猪个体的雌激素受体基因(ESR)、促卵泡激素β亚基基因(FSHB)和催乳素受体基因(PRLR)3个与产仔数相关基因的遗传多态性进行了检测.结果表明,ESR基因的BB基因型占绝对优势,不过由于AA型、AB型的样本量很少,因此难以计算出各基因型的产仔数差异;FSHβ基因只检测到了AA型;PRLR基因的AA型频率最高,AA型比BB型头胎和头4胎平均总产仔数分别多产1.42头和1.02头(P<0.05),AA型比BB型头4胎平均活产仔数多产1.43头(P<0.05).     

淮南麻鸭IGF-Ⅰ基因单核苷酸多态性及其与生长性能关系研究

本研究采用PCR-SSCP技术,对100只淮南麻鸭的IGF-Ⅰ基因的单核苷酸多态性进行研究,发现存在1个多态性位点,表现出3种基因型(AA、AB和BB)。经适合性χ2检测,该位点处于Hardy-Weinberg平衡状态。方差分析结果显示,淮南麻鸭初生至4周龄体重,3种基因型差异不显著,而之后的5周龄至9周龄体重为AA和AB型差异显著,AA型和AB型均明显优于BB型,9周龄时AA基因型比AB和BB基因型分别重88.71g和142.18g。证实该位点A等位基因可能与淮南麻鸭的体重呈正相关。     

鹅肌肉IGF-Ⅰ基因mRNA的表达

以吉林白鹅肉用品系、蛋用品系和霍尔多巴吉白鹅为供试材料,采用实时定量PCR法对胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因在鹅1、30、60、90日龄时胸肌、腿肌中mRNA的表达水平进行测定分析。结果表明:鹅胸肌、腿肌IGF-ⅠmRNA的表达量随着日龄的增加呈先升后降的趋势,胸肌中IGF-ⅠmRNA的表达峰值在吉林白鹅肉用品系60日龄、蛋用品系30日龄、霍尔多巴吉白鹅60日龄出现,其中霍尔多巴吉白鹅30日龄与1日龄差异不显著(P>0.05);腿肌IGF-ⅠmRNA的表达量均在30日龄达到最大,随后下降。在胸肌组织中,吉林白鹅肉用品系IGF-ⅠmRNA的表达量在1、60和90日龄时均高于蛋用品系,霍尔多巴吉白鹅IGF-ⅠmRNA表达量在1日龄和90日龄时高于吉林白鹅蛋用品系(P<0.05),30日龄品种间差异不显著(P>0.05)。在腿肌组织中,吉林白鹅肉用品系IGF-ⅠmRNA在30和60日龄的表达量均高于霍尔多巴吉白鹅,在60和90日龄高于吉林白鹅蛋用品系(P<0.05);霍尔多巴吉白鹅在30日龄时IGF-ⅠmRNA表达量低于蛋用品系(P<0.05),90日龄时高于吉林白鹅两个品系(P<0.05),1日龄时表达水平无差异(P>0.05)。     

利用4个繁殖性状主效基因研究陆川猪群体的遗传结构

为了解陆川猪繁殖性能的遗传潜力和基因多样性,利用PCR-RFLP和PCR-SSCP 技术对ESR、FSH β、PRLR和PRL 4个繁殖性状主效基因多态性进行检测.结果显示,在陆川猪群体中,ESR、PRLR和PRL的优势基因型分别为BB、AA和CC型,其频率分别为0.9146、0.4146和0.2692;FSH β基因只有AA 型.对4个基因进行Hardy-Weinberg平衡检测,发现仅有ESR位点基因型符合Hardy-Weinberg平衡分布(P>0.05).而不同基因的遗传结构分析表明,ESR、PRLR和PRL多态信息含量分别为0.0906、0.4280 和0.5862,分属低度、中等和高度多态位点.     

松辽黑猪IGF-Ⅰ基因5′调控区序列特征分析

对松辽黑猪类胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）基因5′调控区进行了T-A克隆和序列测定,在分析序列结构特征的基础上与GenBank中野猪、大白猪、牛、山羊、绵羊进行了比较基因组学和系统进化研究。结果表明：松辽黑猪IGF-Ⅰ基因5′调控区存在C/EBPb、MATal、Oct-1、CF-1等多个潜在的转录因子结合位点,可能与IGF-Ⅰ的转录调控和起始以及特异表达有关。在该非编码序列中,重复序列所占比率为2.22%,不存在SINEs、LINEs、LTR类反转录元件和DNA转座子元件,而发现存在1个（CA）18微卫星位点。在松辽黑猪IGF-Ⅰ基因5′调控区,松辽黑猪与野猪、大白猪、牛、山羊、绵羊各物种间同源性大小分别为99.0%、98.8%、90.7%、91.6%、90.6%。MUPD法构建的分子系统进化树聚类结果表明,野猪与大白猪先聚为一类,再与松辽黑猪聚类形成一个大分支,而山羊和绵羊先聚成一类,再与牛聚类形成一个大分支,然后再与猪的一支汇合在一起。