RAPD标记在油菜核不育两系及其杂种纯度检验上的研究：I.DNA快速制备及纯度检测

DNA分子标记技术是检测遗传差异的一项新技术，特别是RAPD标记技术应用更加广泛，DNA质量是保证RAPD分析成功的关键。本文采用改良SDS法对油菜叶片总DNA进行了提取，经琼脂糖凝胶电泳和紫外光光度计分析，结果表明：1、所提取的DNA浓度和纯度都高，可以作为分子生物学研究所用，并为本实验后续的PCR扩增奠定了良好的材料基础；2、不同时期叶片DNA的含量不一样，苗期幼叶DNA含量比青荚期无柄叶DNA含量高。     

DNA指纹用于杂交水稻种子纯度和真伪鉴定的研究进展

本文简要阐述了RAPD、RFLP、AFLP、SSR等几种主要的建立DNA指纹图谱的分子标记技术及其在杂交水稻种子纯度和真伪鉴定中的研究和应用情况,同时评述了这几种分子标记技术各自的优缺点,并就水稻DNA提取方法的改进、PCR扩增反应程序和反应体系的优化、扩增产物的检测以及DNA指纹在杂交稻种子纯度和真伪鉴定中的准确性等问题进行了讨论。DNA指纹在杂交水稻种子纯度和真伪鉴定中具有广阔的应用前景,关键是要建立一套完善的、标准化的技术体系,进一步简化实验操作程序,降低成本,真正做到简单快速、准确可靠,使DNA指纹能用于规模化、商业化的种子质量鉴定之中。     

基于分子标记稳定性的甜叶菊组培苗DNA提取方法优化

本试验采用甜叶菊组培苗叶片为材料,以RAPD分子标记检验水浴温度与时间、取样重量以及优化步骤等三个DNA提取影响因素,进而以SRAP和MSAP分子标记技术对RAPD结果进行验证,以提高甜叶菊组培苗DNA提取效率。结果表明,水浴温度、时间为70℃30 min(A2),取样量为0.1 g(B2)时,提取到常规步骤9的上清液V(C4)即可满足常规分子标记要求,且提取时间可减少1~1.5 h。     

RAPD及SRAP 2种标记对苦瓜‘如玉5号’杂交种纯度的鉴定

为获得理想的方法鉴定‘如玉5号’苦瓜杂交种子的纯度,以苦瓜杂交一代品种‘如玉5号’及其父母本为材料,利用RAPD(随机扩增多态性DNA)及SRAP(相关序列扩增多态性)2种技术进行其基因组总DNA指纹分析,以获得F1代杂交种与其亲本差异目的基因条带。经过对3种苦瓜新鲜幼嫩叶片总DNA提取,RAPD-PCR和SRAP-PCR扩增以及扩增产物的琼脂糖凝胶电泳分析,在供试的52条RAPD引物及144对SRAP引物中,共筛选出2对SRAP引物(Me2-Em9、Me3-Em8)能区分杂交种与其母本种子,1条RAPD引物(R10)能区分杂交种与其父本种子,通过SRAP(引物Me3-Em8)及RAPD(引物R10)2种分子标记技术对来自于河西走廊3地‘如玉5号’苦瓜种子进行检测,结合田间观察,结果表明,该方法成本低,操作简单,能很好地对‘如玉5号’苦瓜杂交种子的纯度鉴定。     

种子纯度和品种真实性鉴定中提取玉米DND方法的比较分析

本文通过比较和分析了SSR分子标记技术的三大类DNA提取方法CTAB法、SDS籽粒快速提取法、快速碱煮法，在种子纯度和品种真实性检验中的效果，发现鉴定玉米品种真实性和种子纯度最理想的DNA提取方法是CTAB小量提取DNA法，对于快速检测的理想DNA提取方法是快速碱煮法。     

DNA分子标记在作物杂交种纯度鉴定中的应用

作物杂交种的纯度鉴定是实现植物新品种保护及种子商品化生产的关键技术环节,对农业生产的经济效益和社会效益具有重要影响。本文全面的归纳了近年来DNA分子标记技术在作物杂交种纯度鉴定中应用,并具体分析了RAPD、SSR、AFLP、SARP、In Del和SNP等分子标记技术在杂交种纯度鉴定中的特点,显示其在作物杂交种的纯度检测上的广阔应用前景。     

农业生物技术在水稻种子纯度鉴定中的应用

【研究目的】为了选择直观、准确、可靠、经济可行和易于操作的水稻种子纯度鉴定技术;【方法】分析和总结了电泳鉴定法、DNA分子标记鉴定法和叶色标记技术鉴定水稻种子纯度的研究进展及应用概况;【结论】作者认为电泳鉴定法及DNA分子标记鉴定法只能获得杂交水稻杂种纯度的基本数据,不具备有效排除假杂种的功能,也不可能采取后补救措施解决因纯度低而造成的产量损失。白化转绿型叶色标记技术运用在杂交水稻上,将结束传统种子纯度的检测方法,引发种子纯度检测的革命,具有极其广阔的市场前景。     

RAPD在玉米品种鉴定和纯度分析中的应用

以7个优良玉米自交系和它们的7个单交种为材料,从种子中提取DNA,进行RAPD扩增,探索利用RAPD标记鉴定玉米品种和纯度分析的可能性。研究结果表明,自交系间、杂交种间、自交系和杂交种间均有明显差异,利用3个引物可将14个材料完全分开。RAPD技术用于玉米品种鉴定和纯度分析是可行的。     

利用SSR技术快速准确鉴定杂交玉米种子纯度

利用一种快速、廉价的DNA提取方法,提取了两个玉米杂交种及其亲本的DNA用于SSR分子标记分析。分析结果显示,10对被分析的引物中有4对在两个杂交种双亲之间显示出多态性,可以用于相应的杂交种纯度分析。另外,分别利用同工酶技术和SSR分子标记技术同时分析了来自这两个杂交种的种子样品的纯度,分析发现,对于一个杂交种,两种方法都能可以鉴定,并且两者检测的结果是一致的,但是对于另外一个杂交种,由于其父母本非常接近,同工酶不能将其区分。因此,这些结果显示SSR分子标记技术可以很好地用于杂交玉米种子的纯度鉴定,即使是这个杂交种是来自两个非常接近的自交系的。     

鼠尾草属植物基因组DNA提取及RAPD反应条件优化

以鼠尾草属植物叶片为材料,提取基因组DNA,并对RAPD反应条件进行了系统优化.结果表明,采用核DNA法提取的DNA质量较高,适宜于RAPD分析;RAPD扩增最佳反应体系为20μl反应体系中,10×buffer 2.0μl,模板DNA 20 ng,Mg 浓度2.0 mmol/L,引物浓度0.6μmol/L,dNTPs浓度0.2mmol/L,Taq酶1.0U.扩增反应程序为94℃预变性5min,94℃变性1min,36℃退火1main,72℃延伸2main;40个循环;72℃后延伸10main,4℃保存.     

DNA分子标记技术在石蒜属植物中的应用

DNA分子标记技术在石蒜属植物的进化和系统发育分析、种质资源遗传多样性与亲缘关系鉴定、品种指纹图谱和遗传图谱的构建、目标性状基因定位与克隆等研究领域已广泛应用.本文综述了主要几种用于石蒜属植物的DNA分子标记技术( RAPD、AFLP、SSR、ISSR、EAT、SRAP、SNP)的基本特点、原理及其应用现状.     

橡胶草基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化

为探索适合橡胶草基因组DNA的提取方法和RAPD反应体系。采用改良CTAB法提取橡胶草叶片总DNA,得到的DNA能满足RAPD分析需要。通过单因子实验法分析DNA浓度、引物浓度、dNTPs浓度、Taq聚合酶以及Mg2+浓度对RAPD扩增结果的影响,建立了适合于橡胶草RAPD分子标记的最佳反应体系,即20 μL体系中包括：模板DNA30 ng、Taq DNA聚合酶1.75 U、dNTPs浓度0.25 mmol/L、Mg2+浓度2.0 mmol/L、引物浓度0.5 μmol/L、10×PCR Buffer 2.0 μL。RAPD扩增反应程序为：94℃预变性5 min,94℃ 30 s,37℃ 30 s,72℃ 70 s,45个循环,最后72℃延伸10 min。该反应体系具有较好的稳定性及可重复性。     

甜瓜总RNA快速提取

采用改良的Trizol法对甜瓜叶片的总RNA进行了提取,利用琼脂糖凝胶电泳及Quantity One软件分析、紫外分光光度法、RT-PCR及PCR法进行纯度、浓度、RNA完整性检测.结果表明:所提取的RNA完整性好,纯度高,不含DNA污染,为进行RT-PCR及其他分子生物学实验奠定了良好的基础;新鲜叶片比冷冻叶片的总RNA提取容易,结果更稳定;幼叶比老叶的总RNA含量高.     

雷公藤叶片DNA提取及RAPD反应体系建立

摘要］目的：筛选并建立雷公藤叶片基因组DNA的RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA）技术最优反应体系。方法：采用改良的CTAB法提取叶片总DNA,然后通过对RAPD反应体系中最主要的退火温度、引物浓度、dNTP浓度、DNA模板浓度以及Tag DNA聚合酶浓度等5个因子逐个进行单因子优化。结果：20μl PCR反应体系中,雷公藤叶片基因组DNA RAPD最优反应体系为,最佳温度36℃,引物浓度为1.1μmol/L,dNTP浓度1.25mmol/L,DNA模板浓度3790 ng/L,Tag DNA聚合酶用量为5.625 U/L。     

几种常用分子标记技术在种子纯度和品种真实性鉴定方面的比较与分析

本文通过对RAPD、RFLP、SSR和AFLP等几种常用的分子标记技术在种子纯度和品种真实性鉴定方面的比较与分析,得出SSR是目前能用于种子纯度和品种真实性鉴定的最适宜技术.     

农作物种子纯度鉴定技术研究进展

为切实保护农民利益,防止假冒伪劣种子进入流通市场,加强农作物种子纯度鉴定技术研究非常重要.文章着重概述了种子纯度鉴定技术的研究现状,包括形态学鉴定技术、生化鉴定技术、DNA分子标记技术等,强调了传统的形态鉴定技术和现代生化方法、分子标记技术相结合的重要性.     

DNA分子标记技术在农作物品种鉴定上的应用

文章概述了利用DNA分子标记技术(RFLP、RAPD、SSR、AFLP、ISSR和STS等)进行品种鉴定的原理、特点和研究概况,从DNA分子水平上进行品种鉴定具有准确可靠、成本低、自动化、不受环境影响等优点,DNA分子标记技术在品种鉴定方面具有广阔的应用前景。     

五味子的DNA提取及RAPD鉴定研究

采用CTAB、SDS、改良CTAB法对五味子总DNA提取进行研究,并对总DNA进行电泳分析和含量测定,结果表明以改良CTAB法提取五味子叶片DNA纯度最好,以此DNA为模板可获得条带清晰、重复性好的RAPD扩增结果。从14条重复性好的引物中共扩增出67条带,平均每个引物4.8个片段,多态性位点数为58,比例为86.6%。UPGMA聚类分析的结果与五味子形态学分类结果相似,10份五味子优系在遗传相似系数0.69处可划分为3个类群,该RAPD技术体系可以很好地用于10份五味子种质资源的鉴定。     

一种橡胶树叶片基因组DNA快速PCR扩增方法

为解决现有的橡胶树基因组DNA提取方法步骤繁琐、耗时长等问题,摸索出一种橡胶树叶片基因组DNA快速PCR扩增方法。通过比较分析快速提法与CTAB法,结果显示快速提取方法提取的基因组DNA完整性很高,同时也适用于RAPD分型分析。相比传统的基因组DNA提取、PCR扩增等其它分子生物学流程,快速PCR扩增方法操作简单、简单快速、成本低廉,尤其适用于大批量样品的基因分型分析。     

利用SSR标记快速鉴定玉米杂交种农大108和豫玉27的种子纯度

本文利用SSR标记技术分别筛选出玉米杂交种农大108和豫玉27的特异性引物,结合单籽粒DNA快速提取方法,建立了两个品种的种子纯度鉴定试剂盒.实验表明,应用此试剂盒可快速、有效地鉴定两个杂交种的种子纯度.