OPS法玻璃化冷冻山羊卵母细胞的研究

采用两种不同的冷冻保护液VSⅠ（EG＋DMSO）和VSⅡ（PROH＋DMSO），用OPS法对不同期的卵母细胞进行冷冻。结果表明：两种冷冻液VSⅠ和VSⅡ的冷冻效果差异不显著（P〉0．05），但从数据看。VSⅠ要优于VSⅡ；而不同期的卵母细胞对冷冻后的发育能力有明显的影响，无论是VSⅠ还是VSⅡ，GV期和培养10小时卵母细胞的形态正常率、成熟率、受精率差异不显著（P〉0．05），但GV期和培养10小时卵母细胞受精率均低于IVM期卵母细胞，它们之间差异显著（P〈0．05）。     

OPS法玻璃化冷冻山羊卵母细胞的研究

采用两种不同的冷冻保护液VS Ⅰ(EG DMSO)和VSⅡ(PROH DMSO),用OPS法对不同期的卵母细胞进行冷冻.结果表明,两种冷冻液的冷冻效果差异不显著(P＞0.05),但从数据看,VS Ⅰ要优于VSⅡ;而不同期的卵母细胞对于冷冻后的发育能力有明显的影响,无论是VS Ⅰ还是VSⅡ,GV期和培养10h卵母细胞的形态正常率、成熟率、受精率差异不显著(P＞0.05),但GV期和培养10 h卵母细胞受精率均低于ⅣM期卵母细胞,它们之间差异显著(P＜0.05).     

OPS法玻璃化冷冻山羊卵母细胞的研究

本实验采用两种不同的冷冻保护液VSⅠ(EG DMSO)和VSⅡ(PROH DMSO),用OPS法对不同期的卵母细胞进行冷冻。结果表明两种冷冻液VSⅠ和VSⅡ的冷冻效果差异不显著(P>0.05),但从数据看VSⅠ要优于VSⅡ;而不同期的卵母细胞对于冷冻后的发育能力有明显的影响,无论是VSⅠ还是VSⅡ,GV期和培养10h卵母细胞的形态正常率、成熟率、受精率差异不显著(P>0.05),但GV期和培养10h卵母细胞受精率均低于IVM期卵母细胞,它们之间差异显著(P<0.05)。     

家兔卵母细胞玻璃化冷冻试验

本试验采用玻璃化冷冻保存方法,对162个成熟的家兔卵母细胞进行冷冻,解冻后体外受精。卵裂率为37%、桑椹胚率为26%、囊胚率为17%,试验结果与对照组比较差异较大。说明家兔卵母细胞的玻璃化冷冻效果一般,仍需进一步研究。     

牛卵母细胞的玻璃化冷冻研究

本试验通过牛卵母细胞玻璃化冷冻过程中采用载体、冷冻时卵母细胞所带颗粒细胞层数和其成熟培养时间这3个方面对牛卵母细胞的玻璃化冷冻进行了探讨。(1)不同载体的对比:玻璃OPS管和塑料OPS管冷冻效果较好。玻璃OPS管冷冻卵母细胞,解冻后形态正常率、体外受精后卵裂率和囊胚率分别为91.2%、41.3%和14.52%。塑料OPS管冷冻卵母细胞,解冻后形态正常率、体外受精后卵裂率和囊胚率分别为89.09%、40.90%和14.54%。(2)保留2￣3层颗粒细胞的卵母细胞玻璃化冷冻的冷冻效果较好,其冷冻解冻后形态正常率、体外受精后卵裂率和囊胚率分别为90.79%、40.13%和15.13%。(3)体外成熟培养22h的卵母细胞冷冻效果较好,其冷冻解冻后形态正常率、体外受精后卵裂率和囊胚率分别为94.14%、41.80%和15.23%。     

不同冷冻载体对牛未成熟卵母细胞玻璃化冷冻效果的影响

为了研究不同冷冻载体制备方法及其对牛未成熟卵母细胞发育能力的影响,以牛未成熟卵母细胞为实验材料,分别探究开放式拉长细管(OPS,open pulled straw)和玻璃微管(GMP,glass micropipette)的制备方法,并以OPS、GMP和冷冻叶片为冷冻载体玻璃化冷冻牛未成熟卵母细胞,解冻后经体外成熟培养和体外受精,统计形态正常率、成熟率、卵裂率及囊胚率。结果显示:以简易小酒精灯为热源,以细管为原材料可以制备出适用的OPS冷冻载体;以酒精喷灯为热源,以细玻璃管为原材料可以制备出适用的GMP冷冻载体。OPS和GMP组形态正常率分别为(74.3%±1.8)%和(72.5%±2.6)%;无显著差异(P0.05),上述二组均显著低于冷冻叶片组(82.1%±1.3)%,P0.05,但三组间成熟率、卵裂率和囊胚率均无显著差异(P0.05)。研究表明,分别以简易小酒精灯和酒精喷灯为热源,以细管和细玻璃管为原材料可以成功制备出OPS和GMP载体;以OPS、GMP和冷冻叶片为冷冻载体均可成功地玻璃化冷冻牛未成熟卵母细胞。     

云岭山羊卵母细胞玻璃化冷冻的研究

试验以屠宰场云岭黑山羊卵巢卵母细胞为材料,研究其玻璃化冷冻的效果。试验中选用20% EG+20% DMSO为冷冻液、冷冻环为载体,以20 s、40 s玻璃化时间冷冻GV和MⅡ期的卵母细胞。结果表明,GV期卵母细胞的形态正常率、成熟率和卵裂率都很低,且解冻成熟培养后冷冻组的成熟率和卵裂率极显著低于对照组(P<0.01)。而MⅡ期卵母细胞冷冻效果较好,毒性试验组和冷冻组形态正常率分别为91.1%和83.3%,明显高于GV期;孤雌激活后毒性组卵裂率与对照组无显著性差异(P>0.05),冷冻组的卵裂率显著低于对照组(P<0.05)。用20 s、40 s玻璃化时间冷冻的卵母细胞解冻后GV和MⅡ期各组均无显著差异。根据试验结果得出在冷冻保存中最好冷冻MⅡ期的卵母细胞,以便提高后期的卵裂率和囊胚率;卵母细胞玻璃化时间在40 s内均不影响卵母细胞的活力和发育潜力。     

绵羊卵母细胞的玻璃化冷冻保存

玻璃化法是近几年才建立起来的一种细胞、胚胎及卵母细胞的冷冻保存技术。Nekagata和Shaw分别于1989年和1991年用此化法冷冻保存小鼠成熟卵母细胞,取得理想结果。本实验对玻璃化法冷冻保存绵羊卵巢内卵母细胞作了尝试。1 材料与方法从屠宰后东北细毛羊取出卵巢,用注射器从直径2～6mm的卵泡中抽取卵丘—卵母细胞复合体,选择正常的用成熟培养液(M199+10%FCS)洗2次后,转入VS_1(20.5%(w/v)二甲基亚砜,     

玻璃化冷冻对小鼠卵母细胞超微结构的影响

以小鼠卵母细胞作为试验材料,通过透射电镜方法观察玻璃化冷冻对卵母细胞超微结构的影响,初步探讨玻璃化冷冻损伤机理。结果发现:暴露组卵母细胞除有少量线粒体受到损伤,变得粗糙模糊外,其它无明显变化;冷冻组卵母细胞冻融后有不同程度的结构损伤,主要表现为胞质中的中间纤维解体,微绒毛变短甚至缺失,线粒体粗糙模糊,胞质外围皮质颗粒数量减少,透明带变得模糊不清、有的地方甚至已经破裂,细胞基质出现大量空泡,并形成有线粒体-空泡复合体。结果提示,玻璃化冷冻会对卵母细胞超微结构产生一定的损伤,这主要是由于玻璃化冷冻过程中机械损伤造成的。     

玻璃化冷冻对猪卵母细胞超微结构的影响

本研究以GV期和MII期卵母细胞作为试验材料,通过透射电镜方法观察卵母细胞冷冻前后的超微结构变化,结果发现,透射电镜下观察卵母细胞发现,GV期卵母细胞与透明带连接紧密,微绒毛伸入透明带中,皮质区分布大量的线粒体。脂滴分为两种,一种为灰色脂滴,一种为深色脂滴。MII期卵母细胞排出第一极体,质膜下分布大量的皮质颗粒。微绒毛缩短成矮柱状,线粒体常聚集存在,卵周隙出现。冻后GV期卵母细胞微绒毛消失,线粒体肿胀,线粒体内有囊泡样结构,包围脂滴的内质网不完整,胞质内溶解为絮状,未见高尔基体。冻后MII期卵母细胞透明带损伤、微绒毛、细胞膜损伤甚至消失、极少量皮质颗粒分布于皮质区。脂滴部分溶解,相互连接,脂滴周围伴随大量肿胀呈圆形的线粒体,嵴不明显,内呈囊泡样,未见到高尔基复合体结构。     

牛卵母细胞玻璃化冷冻研究进展

探讨了玻璃化冷冻对牛卵母细胞的损伤以及目前常用的改善方法,以期降低牛卵母细胞玻璃化冷冻带来的损伤。     

小尾寒羊羔羊超数排卵及卵母细胞玻璃化冷冻保存效果研究

以我国地方品种小尾寒羊作为供体,对不同年龄羔羊(6～8周龄和12～14周龄)超数排卵效果以及卵母细胞冷冻保存对体外受精、体外胚胎发育、胚胎移植产羔的影响进行研究。结果表明:6～8周龄组羔羊只均超排处理获卵数和可用卵数(60.8枚和58.2枚)显著高于12～14周龄组(27.3枚和26.0枚)(P<0.05);经玻璃化冷冻—解冻后的卵母细胞体外受精,冷冻组的卵裂率和桑椹胚发育率(67.8%和35.6%)均显著降低于对照组(79.2%和53.8E)(P<0.05);玻璃化冷冻保存体外生产的胚胎,经移植后成功产下4只健康羔羊(4/52)。     

紫杉醇预处理对猪体外成熟卵母细胞玻璃化冷冻的影响

为了提高猪成熟卵母细胞细胞玻璃化冷冻效果.本试验拟添加紫杉醇,比较其对冷冻环冷冻效果的影响.结果显示使用1.0μmolL~(-1)紫杉醇预处理卵母细胞,冷冻后其形态完整率(89.93%)和FDA染色存活率(83.33%)都显著高于未处理组的79.12%和70.97%(P＜0.05),继续提高紫杉醇浓度则表现为对卵母细胞的毒副作用.在不同预处理时间上,预处理30 min组冷冻后卵母细胞形态完整率和FDA染色存活率最高,分别达到90.21%和84.13%.预处理浓度1.0μmol·L~(-1),30 min是比较合适的处理方法;紫杉醇、细胞松弛素B(CB)或两者联合添加能显著提高猪成熟卵母细胞的玻璃化冷冻的效果(P＜0.05),但两者之间没有显著差异(P＞0.05).     

玻璃化冷冻对家畜卵母细胞细胞生物学性状影响的研究进展

卵母细胞玻璃化冷冻技术在保存母畜生育力、加速育种过程中发挥重要作用。相较于新鲜卵母细胞,玻璃化冷冻会造成卵母细胞细胞核混乱无序、成熟率降低、细胞质分布变化、脂质结构变化和高活性氧水平、细胞器线粒体分布异常、氧化系统和抗氧化系统异常以及膜电位降低、微管微丝排列混乱、纺锤体结构损坏以及使重要蛋白变化和一些分子发生改变。本文从细胞生物学角度探讨玻璃化冷冻对卵母细胞造成的细胞核紊乱、线粒体膜电位降低、皮质颗粒缺失等损伤,为高效玻璃化冷冻液和冷冻程序的开发、改善玻璃化冷冻卵母细胞后续发育潜力提供参考。     

哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究进展

综述了近年来关于哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究进展,并对这项技术的发展前景进行展望.重点讨论了影响哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻保存的几种因素,包括冷冻保护剂的种类和浓度、冷冻方法和卵母细胞所处的发育阶段等,以及冷冻过程中细胞膜、微丝、微管、皮质颗粒、纺锤体和线粒体等出现的损伤.目前,玻璃化冷冻法存在的最主要问题是冷冻过程中造成超微结构不可逆转的损伤影响胚胎发育,亟待解决.     

哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究进展

综述了近年来关于哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究进展,并对这项技术的发展前景进行展望。重点讨论了影响哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻保存的几种因素,包括冷冻保护剂的种类和浓度、冷冻方法和卵母细胞所处的发育阶段等,以及冷冻过程中细胞膜、微丝、微管、皮质颗粒、纺锤体和线粒体等出现的损伤。目前,玻璃化冷冻法存在的最主要问题是冷冻过程中造成超微结构不可逆转的损伤影响胚胎发育,亟待解决。     

毛细玻管玻璃化冷冻法冷冻保存牛卵母细胞的研究

为了探讨毛细玻管玻璃化冷冻法(GMP)对牛卵母细胞冷冻效果的影响,试验采用毛细玻管玻璃化冷冻法冷冻不同发育阶段的牛卵母细胞,并且对不同预处理方式和玻璃化时间对玻璃化冷冻牛卵母细胞解冻后形态及体外受精卵裂率的影响进行了比较.结果表明:采用毛细玻管玻璃化冷冻法冷冻GV期和体外培养6 h、18 h、22 h各发育阶段的卵母细胞,解冻后体外受精后卵裂率分别是36.67%、40.98%、41.27%、52.38%,前三者之间差异不显著(P>0.05),前三者与培养22 h卵母细胞(52.38%)和对照细胞(68.42%)差异极显著(P<0.01);采用不同浓度的稀溶液预处理卵母细胞,3%乙二醇稀溶液预处理玻璃化前牛卵母细胞可分别获得较高的卵裂率(36.96%);卵母细胞在玻璃化溶液中暴露时间越长受到损伤越严重,暴露30 s能获得最好的玻璃化冷冻效果.     

猪卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究进展

卵母细胞冷冻保存对于畜牧业生产和人类辅助生殖具有重要意义。随着玻璃化冷冻技术日趋成熟,其现已广泛应用于牛、羊等大家畜的卵母细胞冷冻保存。然而,猪卵母细胞的冷冻保存至今仍处于试验研究阶段,由于猪卵母细胞脂质含量高,对低温敏感,在玻璃化冷冻保存过程中极易受到冷冻保护剂毒性以及渗透胁迫、氧化应激等损伤,造成细胞骨架以及亚细胞器受损,最终导致细胞发育能力降低甚至死亡。近年来,人们在提高猪卵母细胞冷冻保存效率的研究中取得了突破性进展。本文简要介绍了卵母细胞冷冻保存的常见方法及作用机理,总结了猪卵母细胞在玻璃化冷冻过程中造成的细胞损伤类型及影响,概述了人们针对不同类型的冷冻损伤提出的解决方法和取得的成就,并对其应用前景进行展望,为今后提高猪卵母细胞的玻璃化冷冻效率提供新思路。     

抗冷冻蛋白Ⅲ对玻璃化冷冻小鼠卵母细胞线粒体的影响

【目的】探索抗冷冻蛋白Ⅲ(antifreeze proteinⅢ,AFPⅢ)对玻璃化冷冻小鼠卵母细胞线粒体的保护作用。【方法】以5～8周龄昆明雌性小鼠为试验材料,将收集的小鼠MⅡ期卵母细胞随机分为空白对照组、冷冻对照组(经过玻璃化冷冻-解冻过程)和AFPⅢ添加组(在冷冻平衡液及冷冻液中均添加500 ng/mL AFPⅢ),利用线粒体绿色荧光探针(Mito-Tracker green, MTG)检测线粒体分布及含量,JC-1荧光染色检测线粒体膜电位,溶酶体红色荧光探针(Lyso-Tracker red, LTR)检测线粒体与溶酶体共定位,二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA)检测活性氧(ROS)水平,ATP Assay Kit检测线粒体ATP含量。【结果】与空白对照组相比,玻璃化冷冻后小鼠卵母细胞的线粒体含量显著降低,部分线粒体呈现异常的散点状分布,且线粒体-溶酶体共定位情况明显增多,线粒体膜电位显著降低(P<0.05);同冷冻对照组相比,AFPⅢ添加组的小鼠卵母细胞线粒体含量显著升高,异常分布的线粒体和线粒体-溶酶体共定位情况减少,线粒体膜电位显著升高(P<0.05)。与空白对...     

牛羊卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究进展

卵母细胞玻璃化冷冻保存对于胚胎生物技术的发展具有重要意义,因其简便、快速、廉价等优点而广泛应用于人类辅助生殖、体外胚胎生产、转基因、克隆等方面.由于受到低温和抗冻保护剂的影响,卵母细胞在冷冻过程中都会造成形态和功能上的损伤,并且存活率和发育能力随之降低.本文以牛、羊卵母细胞玻璃化冷冻保存为例,对卵母细胞玻璃化冷冻保存的...