长牡蛎糖原磷酸化酶基因SNPs与生长性状和糖原含量的相关性分析

为研究糖原磷酸化酶基因多态性与长牡蛎(Crassostrea gigas)生长和糖原含量的相关性,本研究对长牡蛎糖原磷酸化酶基因(Cg-GPH)编码区单核苷酸多态性(SNPs)与来自5个家系322个长牡蛎个体的生长性状(包括壳高、壳长、壳宽、总体质量以及软体部质量)和糖原含量进行了关联分析.结果表明,在1940 bp的长牡蛎糖原磷酸化酶基因中共检测到82个SNPs位点,其中63个SNPs位点位于外显子区域,1个SNPs位点位于5′-UTR区,18个SNPs位点位于3′-UTR区,编码区SNPs平均密度为1/25 bp;5个SNPs位点与生长性状存在显著相关(P<0.05),未检测到与糖原含量相关SNPs.根据以上5个SNPs位点共构建得到6个SNP单倍型,其中,Cg-GPH基因的H6(CTGAT)单倍型在总体质量性状方面均显著高于其他5种单倍型(P<0.05),表明H6单倍型可能是对长牡蛎体质量增加最有利的单倍型.研究结果为今后长牡蛎生长性状的遗传改良提供了基础资料.     

辽宁锦州市成功繁育出长牡蛎金请壳新品系

<正>2014年8月,辽宁省海洋与渔业厅组织相关专家在锦州市海水苗种繁育中心,对辽宁省海洋水产科学研究院、中国海洋大学和锦州市海洋与渔业科学研究所共同开展的"长牡蛎新品系引进与繁育"相关项目进行了现场验收。专家组听取了项目组对项目实施情况的汇报,现场查阅了苗种繁育记录等相关资料。项目组以长牡蛎金壳品系F4代为亲本,繁育F5代D形幼虫3.5亿个、稚贝2 886万个,稚贝金黄壳色比例占98%。长牡蛎俗称太平洋牡蛎,广泛分布于西北太平洋海域,是我国也是世界上养殖范围最广、养殖产量最     

不同育性长牡蛎性腺发育过程中糖原和脂质的组织化学研究

为探讨不同育性长牡蛎(Crassostrea gigas)性腺发育过程中主要供能物质的利用和变化差异,利用过碘酸雪夫氏染色(PAS染色)和油红O染色法对不同育性三倍体长牡蛎及二倍体长牡蛎性腺组织进行观察分析。结果显示,增殖期,二倍体和三倍体长牡蛎性腺结缔组织中均含有大量糖原和脂质。随着性腺发育,二倍体和可育型三倍体(3nα型)长牡蛎性腺结缔组织中糖原含量明显下降,到成熟期几乎检测不到糖原,说明性腺结缔组织中的糖原为配子发生提供能量。脂质主要存在于性腺结缔组织和卵母细胞的细胞质中,说明脂质是卵细胞发育的重要组成物质。雌性二倍体和3nα型长牡蛎性腺结缔组织中的脂类含量随着性腺发育并未发生明显下降,推测糖原可能转化为脂质以满足性腺发育的物质需求。脂质在二倍体雄性长牡蛎的性腺发育过程中出现明显的减少,说明脂类在雄性性腺发育中的主要功能可能是供能而不是结构组成。糖原和脂类作为长牡蛎性腺发育过程中重要的供能和组成物质,在不育型三倍体(3nβ型)长牡蛎性腺发育过程中含量没有发生明显的变化,这与3nβ型配子发生受阻密切相关。推测3nβ型长牡蛎由于配子发育受阻,性腺发育初期积累的糖原和脂质并未分配至生殖细胞,而留在结缔组织中,从而使其在繁殖季节仍然能够保持快速生长。研究结果为牡蛎生殖发育调控机制及育性控制育种提供重要信息。     

近江牡蛎冻干组织糖原含量近红外模型的建立

糖原直接影响牡蛎的风味和营养品质,常作为评价牡蛎品质质量的重要标准。近红外光谱(NIR)模型可以实现糖原含量的快速准确检测。本研究以近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)为研究对象,采用微量蒽酮法、近红外技术分别获取了外套膜、鳃、闭壳肌、肝胰腺、唇瓣、性腺等6个组织及全软体部混样共909份样品的糖原含量及光谱数据,结合最小二乘法建立了近江牡蛎6个组织及全软体部的糖原含量预测模型,并对该模型进行了外部验证和交叉验证。结果显示,所测样品光谱数据经一阶求导、乘法散射校正及平滑预处理后,建立的模型最优;所建立的7个模型的建模相关系数(RC)为0.971 6~0.996 3,其外部验证相关系数(REV)及交叉验证相关系数(RCV)分别为0.949 0~0.990 8和0.969 4~0.996 9,且模型交叉验证和外部验证的RPD值均大于2.5,表明所建立的模型能准确预测近江牡蛎相应组织样品的糖原含量。本研究建立的近江牡蛎糖原含量NIR分析模型,不仅丰富了牡蛎糖原含量检测方法的研究资料,还为实现近江牡蛎糖原成分的快速、准确测定提供了技术支撑,在近江牡蛎品质性状改良等领域具有重要的应用价值。     

牡蛎糖原的研究 (II)——牡蛎糖原的分子结构

该研究以新鲜近江牡蛎 (Crassostrea ariakensis) 软体组织为实验材料,通过比较分析不同蒽酮硫酸比例、不同反应时间的吸光值确定最优反应条件,并对方法的最低检出限、重复性、稳定性和精确性进行评价,最终建立了牡蛎糖原含量的微量检测体系。建立的微量反应体系体积为300 μL,主要包括0.2%蒽酮硫酸溶液200 μL,样品待测液100 μL;沸水浴反应时间为10 min。该方法的葡萄糖最低检出限为0.001 5 mg·mL⁻¹,标准曲线变异系数小于4%,证实该方法具有较高的检测灵敏度;显色反应完成后,室温条件下120 min内其吸光值基本不变,稳定性较高;测定牡蛎外套膜、鳃、唇瓣、性腺、肝胰腺、闭壳肌的加标回收率介于95.3%~105.8%,说明该法具有较高的准确性。因此,该研究建立的微量反应体系测定牡蛎糖原的方法具有试剂用量小、操作简单、单样品成本低等优势,同时重复性、稳定性、精确性均较高,适用于大批样品批量测定。该研究为快速、高效完成牡蛎样品糖原的检测提供了有效的技术方法。     

夏季北黄海贝类养殖区环境因子、长牡蛎糖原和免疫指标变化的调查研究

为解析夏季环境胁迫和长牡蛎（Crassostrea gigas）机体响应特征,实验针对2021年北黄海夏季高温降雨期的长牡蛎养殖海区开展了2次调查研究和对比分析。结果显示,7月份海区表层水温分别为25.3 ℃和24.9 ℃,盐度分别为26.41和27.87;表层海水中硅藻丰度分别为3.6×103和3×103 个/L,低于往年平均水平,甲藻多样性增加,表层海水中细菌的总丰度分别为2.10×109和2.77×1010 拷贝/L,弧菌丰度分别为3.37×108和5.40×108 拷贝/L;长牡蛎肝胰腺糖原含量分别为40.96和31.58 mg/g、闭壳肌糖原含量分别为6.63和8.91 mg/g;鳃MDA含量分别为13.74和8.69 nmol/mg prot、鳃T-AOC分别为0.46和0.77 U/mg prot;海区养殖长牡蛎血淋巴细胞中CgIL17-5和CgTNF-1的mRNA表达量在第一次调查时相对室内暂养长牡蛎均剧烈升高;血淋巴细胞中CgCaspase3的mRNA表达量升高但差异不显著。综上,2021年北黄海贝类养殖区在经历6—7月夏季高温降雨期后出现水温升高和盐度降低现象,硅藻丰度较往年平均水平下降而甲藻多样性增加,细菌总丰度较入夏前水平降低而弧菌丰度显著升高。与室内暂养对照组长牡蛎相比,海区养殖长牡蛎的糖原含量下降,并发生轻度氧化应激。研究结果有助于我们进一步理解夏季养殖环境的变化规律和长牡蛎机体响应特征,为预防夏季大规模死亡发生提供理论依据和参考。     

基于崩解时限的牡蛎糖原片剂配方组合优化研究

为了确定牡蛎糖原片剂的制备工艺,以崩解时限为重要指标,利用单因素结合正交试验法筛选优化牡蛎糖原片剂配方组合。研究结果表明,以牡蛎糖原冻干粉添加量15%、微晶纤维素15%、麦芽糊精5%、羧甲基淀粉钠5%、硬脂酸镁0.02%、玉米淀粉59.98%为片剂处方,优选出的处方工艺简单可行,制备的片剂质量符合中国药典(2015版)的有关规定,稳定性好。     

高碘高产海带新品系的培育成功

在科学研究必须为无产阶级政治服务、为社会主义建设服务的方针指引下。青岛海洋水产研究所和中国科学院海洋研究所两个单位的科研工作者坚持与工农相结合，走向生产第一线，与20多个单位共同战斗，经过四年的努力，培育成功高碘高产的二个海带新品系。     

壳金长牡蛎自交和杂交家系生长与存活比较

选择具有生长优势的长牡蛎(Crassostrea gigas)G2(A)家系及具有明显生长和存活优势的G19(B)和G28(C)家系进行完全双列杂交,得到包括3个自交组(AA、BB、CC)和6个杂交组(AB、AC、BA、BC、CA、CB)共9个壳金长牡蛎实验组,分析各实验组在幼虫期及稚贝期不同日龄的各生长指标和存活性能,并评估了杂交组的杂种优势。结果表明,在整个培育阶段,大多数杂交组在不同生长时期均表现出较高的生长和存活性能,其中,浮游幼虫期5日龄,所有杂交组的壳高和壳长均显著大于自交组(P0.05);10日龄后,杂交组CB、BC和AC的壳高显著大于相应的自交组(P0.05),杂种优势明显;稚贝期85和130日龄,杂交组CB的壳高性能大于其他实验组。浮游幼虫期10日龄,CB组存活率显著大于AA、CA组(P0.05);稚贝期85日龄后,杂交组AC、CA和CB的存活率杂种优势逐渐增大;190日龄,杂交组AC、BC与自交组AA、CC之间存活率差异显著(P0.05)。研究结果为壳金长牡蛎新品种的培育及杂种优势的充分利用奠定了重要基础。     

培育密度对长牡蛎面盘幼虫生长影响的对比试验

长牡蛎育苗期间经常出现面盘幼虫生长参差不齐现象,影响单位水体出苗量。笔者在正常培养密度范围内6～12个 ml作对比试验:低密度6～8个 ml培养的幼虫生长速度快,个体差异小;重视亲贝促熟,加强优质新鲜饵料的供给,有良好的水环境,能够减少幼虫差异显著的现象。     

长牡蛎(Crassostrea gigas)壳宽快速生长选育群体遗传多样性及遗传结构的微卫星标记分析

为了监测长牡蛎(Crassostrea gigas)在选育过程中的遗传变异、分析选育对其遗传结构的影响,本研究以选育目标为壳宽快速生长的长牡蛎为实验材料,利用微卫星(Simple Sequence Repeats)标记技术,对长牡蛎基础群体(P0)和连续两代选育群体(F1和F2)进行遗传多样性评估。结果发现,所有微卫星位点在3个群体中都表现出了较高的多态性,P0、F1和F2代群体的平均等位基因数分别为16.5、12.2和12.8;P0、F1和F2代群体多态性信息含量(Pic)的平均数值分别为0.9068、0.8982和0.8836。所有群体10个位点的观测杂合度值(Ho)均小于期望杂合度值(He),观测杂合度平均值的大小范围为0.5775–0.6484,期望杂合度范围为0.8594–0.9279。哈迪-温伯格平衡(HWE)结果显示,3个群体在10个位点上有24个群体的位点组合显著偏离HWE(P<0.05),说明人工选育对选育群体的遗传结构有一定的影响。3个群体在10个位点上的Fis值均为正值,平均范围为0.1541–0.2341,表明群体内各位点上的杂合子比例有所下降;各群体间Fst值范围为0.0093–0.0245,遗传分化程度较弱。此研究表明,以壳宽快速生长为选育目的,长牡蛎连续选育群体仍具有很高遗传多样性,人工选育过程中保持一定选择压力,仍然会使长牡蛎的优良生长性状得到不断提高。     

Consumer Preference and Sensory Properties of the Pacific Cupped Oyster (Crassostrea gigas) and the European Flat Oyster (Ostrea edulis)

ABSTRACT

Experts in the oyster supply chain (farmers, retailers, and gourmet chefs) in The Netherlands have suggested that the European flat oyster (Ostrea edulis) has superior sensory qualities compared to the Pacific cupped oyster (Crassostrea gigas). However, scientific evidence is lacking. The aim of this study was to evaluate consumer preferences for these two oyster species and to determine the sensory properties of both species by consumers. Two-alternative forced choice tests were performed with the oysters involving a panel of 74 naïve consumers. No significant differences in preferences between the oyster species were observed by the consumers. Nine sensory attributes of both oyster species were evaluated. Consumers did not observe significant differences between species in the sensory attributes: overall odor intensity, sea odor, mud odor, sweetness, pungency, and firmness. The Pacific cupped oyster was perceived as significantly saltier and more intense in greenness than the European flat oyster. We concluded that only a few sensory properties of the European flat oyster and the Pacific cupped oyster are perceived as being different by untrained consumers.     

夏季高温期三倍体和二倍体长牡蛎生理能量学及碳收支的比较研究

为解析夏季高温期三倍体与二倍体长牡蛎(Crassostrea gigas)摄食和代谢生理以及能量/碳分配策略的差异,于2022年8月,以三倍体和二倍体长牡蛎为研究对象,在山东荣成桑沟湾采用现场流水法测定滤水率、吸收效率、耗氧率、排氨率等摄食和代谢相关生理参数,并基于能量收支方程估算能量分配与碳分配情况。结果显示,三倍体长牡蛎的滤水率、同化效率均高于二倍体长牡蛎,但无显著差异(P>0.05);三倍体与二倍体长牡蛎的耗氧率、排氨率存在显著差异(P<0.05),三倍体长牡蛎的耗氧率显著低于二倍体长牡蛎(P<0.05),但排氨率显著高于二倍体长牡蛎(P<0.01)。能量收支与碳收支的结果显示,三倍体长牡蛎的摄食能/碳、同化能/碳均高于二倍体长牡蛎,但无显著差异(P>0.05);三倍体与二倍体长牡蛎的呼吸能/碳、排泄能/碳、生长余力存在显著差异(P<0.05),三倍体长牡蛎的呼吸能/碳显著低于二倍体长牡蛎(P<0.05),但排泄能/碳、生长余力显著高于二倍体长牡蛎(P<0.05)。三倍体和二倍体长牡蛎的氧氮比波动范围分别为7.91~14.11和59.81~94.19,因此,三倍体长牡蛎的主要供能物质为蛋白质,二倍体长牡蛎的主要供能物质为糖类和脂肪。研究结果为揭示夏季高温期长牡蛎倍性效应关联的能量分配方式差异提供了数据支撑。     

基于微卫星标记整合长牡蛎遗传图谱

为了提高长牡蛎遗传图谱上的微卫星标记密度,实验采用6个家系图谱间的共有微卫星标记作为锚定标记,构建了长牡蛎的整合图谱.该整合图谱共有161个微卫星标记,覆盖10个连锁群,图谱长度和平均间距分别为615.4和3.8 cM.各连锁群的标记数介于10 ～ 24个之间,连锁群长度为47.3～73.3 cM,是目前密度最高的长牡蛎微卫星图谱.不同作图家系连锁群上的标记分组保持一致,但标记顺序出现差异,可能与长牡蛎自然群体中存在大量的染色体重排现象有关.结果表明,该图谱可以为今后长牡蛎的遗传育种研究提供新的遗传工具.     

Sex-specific growth and condition of the Pacific oyster (Crassostrea gigas Thunberg)

In order to study the possibility of gaining commercial benefit from culturing an excess of one sex of the Pacific oyster (Crassostrea gigas), comparative data on the growth rate and condition of male and female oysters are reported. Historically, measurement of sex‐specific growth rate in oysters has been overlooked or confounded by protandric sex. The recent conclusion that the sex ratio of Pacific oysters is predominantly under genetic rather than environmental control introduces the possibility of manipulating sex ratio for commercial gain if they exhibit asynchronous sex‐specific growth rates. Pacific oysters were cultured intertidally in Smoky Bay, south Australia. The observations, made over the 7‐month gametogenic cycle from August to February to ensure no sex reversal, were of growth rates of male and female oysters and ambient chlorophyll a concentrations. Mean shell growth of female oysters was significantly faster than that of males (4.5 ± 3.3 compared with 3.8 ± 3.2 μm day^?1 mm^?1 total length). Sex‐specific asymmetries in length and weight were generally significant and increased in magnitude during the 7‐month study period, suggesting potential commercial benefits from increasing the proportion of cultured female oysters. The fastest increase in the sex‐specific disparity in growth and condition came after the October chlorophyll a peak, suggesting that females utilize blooms more efficiently than males. Our results compare favourably with methods currently used to increase oyster growth (e.g. triploidy can provide growth gains of 13–51%).     

低渗诱导太平洋牡蛎三倍体以及与其他诱导方法的比较

通过低渗方法抑制受精卵第二极体(PB2)的释放,诱导太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)三倍体.在水温为23～25℃的条件下,分别采用不同低渗海水(盐度分别为4、6、8、10、12、14、16),在不同处理时机,即第1个第一极体(PB1)出现、30%的PB1出现、40%的PB1出现、50%的PB1出现以及第1个第二极体(PB2)出现时,对太平洋牡蛎受精卵进行10 min、15 min、20 min、25 min持续处理.处理后,于正常盐度海水中孵化,收集D形幼虫,通过流式细胞仪进行倍性测定,确定最佳诱导条件.结果表明,当太平洋牡蛎受精卵PB1出现40%时,在盐度为8的低渗海水中,持续处理15 min,得到最高三倍体诱导率为(89.16±1.39)%.与对照组相比,低渗诱导获得的三倍体幼虫表现出明显的生长优势.将低渗方法同高温(32℃)、低温(2℃)和6-DMAP(450μmo1/L)处理等多倍体诱导方法进行比较,结果显示,低渗组的卵裂率和孵化率显著高于高温、低温和6-DMAP诱导的太平洋牡蛎三倍体(P＜0.05).6-DMAP诱导的三倍体率虽略高于低渗诱导,但差异不显著(P＞0.05).通过综合评价指数(Ie)比较,认为低渗诱导多倍体的方法比高温、低温和6-DMAP诱导具有明显的优势.     

Standardization of photometric measurement of sperm concentration from diploid and tetraploid Pacific oysters, Crassostrea gigas (Thunberg)

To provide necessary standardization of procedures for cryopreservation of sperm, a spectrophotomeric method was developed to determine the sperm concentration of diploid and tetraploid Pacific oysters, Crassostrea gigas. Wavelengths of 380, 550, 581 and 780 nm were compared, and 550 and 581 nm were found to be the most sensitive and reliable. A linear relationship between sperm concentration and photometric absorbance was observed for sperm concentrations between 2 × 10⁷ and 2 × 10⁹ cells mL^?1. The regression equation for the standard curve at 550 nm for sperm of diploid oysters was Y=?8.528+1.165 log X. The equation for sperm of tetraploid oysters was Y=?8.844+1.236 log X. The equation at 581 nm for sperm of diploid oysters was Y=?8.07+1.104 log X. The equation at 581 nm for sperm of tetraploid oysters was Y=?8.331+1.167 log X. Comparisons derived from the standard curves at 581 nm between observed values and the predicted values indicated good agreement for sperm from diploid (coefficient of determination, r²=0.983) and tetraploid (r²=0.980) oysters.     

太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)类α-1,2-岩藻糖基转移酶的密码子优化与原核表达

牡蛎消化组织内存在的类A型血型组织抗原是其特异性富集诺如病毒的主要原因,FUT2(Fucosyltransferase 2,α-1,2-岩藻糖基转移酶)是A型血型组织抗原合成的关键酶.本研究在前期克隆了太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)类FUT2基因cDNA全长的基础上,根据大肠杆菌密码子偏爱性优化并合成了类FUT2基因,插入原核表达载体pRSET A构建pRSET-mof,将其转化大肠杆菌BL21,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导.经SDS-PAGE分析显示,在37℃、IPTG终浓度为0.8 mmol/L的条件下,诱导4h后出现大小约为46 kDa的特异性目的条带.利用His亲和层析柱纯化及超滤管浓缩目的蛋白,得到单一条带,说明纯化效果良好.Western blot分析显示,目的蛋白与抗6×His标签单克隆抗体、抗人FUT2单克隆抗体均能发生特异性反应,表明优化后的太平洋牡蛎类FUT2基因在大肠杆菌系统中成功表达.本研究结果为今后研究太平洋牡蛎类FUT2基因的功能,进一步探索牡蛎特异性富集诺如病毒的分子机理奠定了基础.