绣线菊丛枝病病原的分子鉴定

用植原体16S rRNA基因的通用引物,对表现黄化、丛枝、顶枯等症状的绣线菊DNA进行PCR扩增,得到了约1.2kb的特异性片段.测序结果证明其病原为植原体.RFLP和序列分析表明:该分离物属于翠菊黄化组的16SrⅠ -B亚组.与GenBank中其他植原体分离物序列比较,发现该分离物与16SrⅠ -B亚组中的西方翠菊黄化植原体(SAY)同源性高达99.6%.     

猪屎豆丛枝病植原体的分子检测与鉴定

植原体(phytoplasma),原称类菌原体(MLO),在植物和昆虫中广泛分布,为无细胞壁原核微生物,尚不能在人工培养基上离体培养.迄今,世界各地已统计有1000多种植物自然感染植原体病害(Seemüller et al.,1998),我国也报道了100多种植物植原体病害(赖帆等,2008).     

羽脉山黄麻丛枝植原体的分子鉴定及病害调查

【目的】了解羽脉山黄麻丛枝病在云南省玉溪市新平县的发生情况和危害程度,通过分子生物学方法确定病原物及其分类地位,为本地区植原体防控提供参考。【方法】利用普查法获得病害发病率,评估病害危害程度。利用植原体通用引物P1/P7及R16F2n/R16R2对感病植株总DNA进行巢式PCR扩增、克隆和测序,得到16S r DNA序列。再用植原体在线分类鉴定工具i PhyClassifier以及MegaX软件分别进行序列分析和构建基于16S r DNA序列的系统进化树,确定病害病原物及其分类地位,通过在线分析软件MUSCLE比较相关序列的同源性。【结果】根据调查发现羽脉山黄麻丛枝病发生于大约101°35'—101°53'E和23°56'—24°20'N之间,主要是在低海拔400～600 m温度相对较高的干热河谷地区,说明高温有利于植原体病害的发生。该处连续3年发生此病害,2018年7月调查得知其平均发病率为38.9%,属中度危害。PCR扩增获得约1 246 bp的羽脉山黄麻丛枝病植原体16S r DNA序列(株系:TLWBYN01,登录号:MN513329)。分析表明TLWBYN01与翠菊黄化植原体(Candidatus Phytoplasma asteris)的参考菌株(M30790)相似度为99.8%,因此该植原体为‘Candidatus Phytoplasma asteris’相关菌株,属于16S r I组成员。TLWBYN01的F2nR2片段虚拟RFLP模型与16S r I-X亚组的参考模型番木瓜束顶植原体(登录号:JF781308)最为相似,相似系数为0.98,17种限制性内切酶的酶切图谱显示与16S r I-X参考株只有MseI不同,因此该植原体属于16S r I-X亚组的变种。比较得出TLWBYN01与16S r I-X亚组成员番木瓜束顶植原体(JF781308)和印度葫芦植原体(LT594117、LT594118)同源性分别为99.2%和99.6%。【结论】玉溪市新平县发现的羽脉山黄麻丛枝病属局部常发病害,中度危害,但一旦感染,就会严重影响植物生长。羽脉山黄麻丛枝植原体属16 Sr I组成员,也是报道较少的植原体16S r I-X亚组的一个变种,且羽脉山黄麻为新发现的植原体新寄主。     

从我国20种感病植物中扩增植原体16S rDNA片段及其RFLP分析

本研究收集了２０种感染植原体的植物材料,从患病材料和相应健康植物组织中提取总ＤＮＡ用作ＰＣＲ模板,选择两对通用引物进行巢式ＰＣＲ,扩增植原体的１６ＳｒＤＮＡ片段,回收扩增产物,通过限制性酶切片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析进行分类。２０种患病植物材料中的植原体有１３种属于翠菊化种,２种属于白对黄化种,３种属于花生丛枝种,２种属于三叶草丛生种。     

灰叶丛枝病病原的分子鉴定及系统发育分析

实验应用PCR扩增、iPhyClassifer分析、序列同源性及系统发育分析等方法对海南省灰叶丛枝病病害进行了分子检测及其病原的鉴定、系统进化研究.iPhyClassifer结果显示:灰叶丛枝病植原体为花生丛枝组(16SrⅡ组)16SrⅡ-A成员.序列同源性分析结果表明:灰叶丛枝病植原体与16SrⅡ、16SrⅡ-A成员...     

泡桐丛枝病检测试剂盒的研制和应用

在进行引物筛选、ＤＮＡ提取和试剂筛选的基础上，合成了高严谨的巢式ＰＣＲ检测试剂盒。该文对构成试剂盒的各种影响因素进行了分析，给出了详尽的试剂盒使用步骤和注意事项，可为有关泡桐丛枝病的研究和应用提供参考。     

植原体检测和鉴定技术

植原体是一种广泛传播的植物病害病原,在世界范围内造成了非常大的经济损失。各国的研究人员对植原体造成的病害,一直进行着不懈研究。利用传统的组织和化学检测技术,取得了很多研究成果。随着现代生物技术的飞速发展,人们又建立了许多植原体的鉴定和检测的新方法,为探索植原体的遗传特征和生物学特性,提供了技术基础。本文就植原体被发现以来,对此病害检测和鉴定技术的发展进行论述。     

泡桐丛枝病检测试剂盒的研制和应用

在进行引物筛选、DNA提取和试剂筛选的基础上 ,合成了高严谨的巢式 PCR检测试剂盒。该文对构成试剂盒的各种影响因素进行了分析 ,给出了详尽的试剂盒使用步骤和注意事项 ,可为有关泡桐丛枝病的研究和应用提供参考     

抗生素对泡桐丛枝病植原体和发病相关蛋白质的影响

泡桐(Paulownia sp.)是我国重要的速生用材和绿化树种;然而,丛枝病的发生给我国的泡桐生产带来了巨大的损失.     

泡桐丛枝植原体抗原膜蛋白基因序列分析与蛋白结构预测

泡桐(Paulownia spp.)原产中国,栽培历史悠久.其自然分布或栽培区遍布全国23个省(市)、自治区,北起辽宁,南至广东、广西、云南南部,东起台湾及沿海诸省,西至甘肃.     

我国木本植物致病性土壤杆菌的分子检测和比较鉴定

根据根癌土壤杆菌Ti质粒的保守序列设计了2对引物,对我国不同木本植物上分离鉴定的10株致病性根癌土壤杆菌进行PCR,致瘤性根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)扩增出427 bp和338 bp的特异性DNA片段,而发根土壤杆菌(A.rhizogenes)仅扩增出338 bp片段,放线土壤杆菌(A.radiobacter)、丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)和泡桐丛枝病植原体(phytoplasma)皆未有特异扩增带.用CYT/CYT'引物对也可鉴定T-DNA遗传转化瘤组织,而VirD2A/VirD2E可用于工程土壤杆菌株侵染能力鉴定.从北京通州杨树苗圃和河北廊坊桃园的病树冠瘿组织和土壤中经选择培养基分离菌株,然后PCR筛选出6个致病性根癌土壤杆菌菌株,而未能从施用过抗根癌生防制剂的北京玉渊潭公园樱花根癌病园中分离和鉴定出典型的致病根癌土壤杆菌株.将杨树根癌土壤杆菌菌株(CFCC1001)异戊烯基转移酶基因(ipt)片段克隆和序列测定结果显示与A.tumefaciens Ti15955菌株的ipt基因序列同源性为83.64%.用此片段制备的ipt cRNA基因探针进行斑点杂交和Northern blot,结果显示此探针与杨树根癌土壤杆菌以及玫瑰、樱花、海棠、桃树等木本植物上分离鉴定的致病土壤杆菌菌株所扩增出的427 bp片段都有明显杂交信号,但与引起泡桐丛枝病植原体染色质和染色质外DNA均未有明显杂交信号.     

茶翅蝽对植原体的传播能力

经１９９６年至１９９８年室内接种试验,分别比较了人工饲养带毒和自然带毒的杀翅蝽成虫和若虫的传病特点。结果显示：室内人工饲养带毒的３龄、４龄若虫接种泡桐发病率分别达６１．７％和４６．５％,高于自然带毒的若虫１６％的传病率。室内饲带毒成虫的接种发病率为１４．１％,高于自然带毒成虫４．５％的传病率。寄主体内病原的最短潜育期（ＭＩＰ）室内饲毒３龄若虫为３４ｄ,４龄为４５ｄ,成虫处理为２１９ｄ;自然带毒若虫     

樱桃带化病组织中植物菌原体16SrDNAPCR扩增及其产物RFLP分析

樱桃带化病是从以色列引种樱桃园中发现的新病害。本文报道了按照检测植物菌原体（ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ）的方法提取ＤＮＡ，扩增患病植株中植物菌原体的１６ＳｒＤＮＡ片段，证明樱桃带化病中有植物菌原体存在，并对此扩增片段进行限制性酶切片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析。根据ＲＦＬＰ分析结果，参照Ｌｅｅ，Ｉ．Ｍ．等的文献资料，对本次樱桃带化病病原进行鉴定与分类，初步定为Ⅶ类。     

早竹丛枝病的调查及病原菌的分子鉴定

[目的]对早竹丛枝病进行调查及病原菌分子鉴定,为早竹丛枝病的病害诊断和防治提供科学依据。[方法]采用单株水平和单枝盘水平的2种病害分级标准对早竹丛枝病进行调查。使用植原体16S rDNA和真菌rDNA-ITS序列的特异性PCR引物,对早竹丛枝病的病原菌进行分子鉴定。[结果]调查的6块样地早竹丛枝病的平均发病率为18.59%,平均病情指数为6.67。感病的早竹DNA样品能够扩增出真菌的rDNA-ITS序列,而不能够扩增出植原体的16S rDNA序列;扩增出的序列与报道的竹针孢座囊菌的序列同源性达到99.00%,与其它真菌的序列同源性最高仅为94.00%。[结论]浙江省德清县早竹丛枝病的病原菌为竹针孢座囊菌。