抗安锥赛克隆伊氏锥虫的生物特性

为了解对安锥赛有抗药性的伊氏锥虫的特性和危害，将伊氏锥虫浙江株克隆，然后人工诱导其对安锥赛产生抗药性，观察抗药性锥虫的生物特性。克隆繁殖后的伊氏锥虫分为3组C(0)0为原种对照组；C(15)0为不接触安锥赛的同步繁殖对照组；第3组为连续经环磷酰胺免疫抑制小鼠人工诱导对安锥赛产生的5种不同程度抗药性锥虫C(1)6、C(3)16、C(6)43、C(9)83和C(15)199。采用无细胞培养技术分别测定C(0)0、C(15)0、C(1)6、C(3)16、C(6)43、C(9)83和C(15)199的IC50，结果依次为0.01550、0.01346、0.0263、0.10237、1.40929、1.92290和9.92330。将这7种锥虫各自按1.0×104条/只经腹腔感染5只小鼠，镜检它们在小鼠尾血中的出虫时间，结果依次为69.6、67.2、76.8、86.4、93.6、98.4、96.0h；各组感染小鼠存活时间依次为154、142、194、207、205、198、202h；各组死亡率均为100%。结果表明，伊氏锥虫经安锥赛作用于小鼠体内传15代后，其生长繁殖和对小鼠的毒性均发生变化，随着伊氏锥虫对安锥赛的抗药性程度升高至IC50为1.92290，抗药锥虫的生长繁殖速度降低，对小鼠的毒性减弱，但毒性并不随锥虫抗药性程度的提高而进一步减弱。这些结果显示，伊氏锥虫在安锥赛作用下，以生长、繁殖、毒力的代谢发生变化来适应安锥赛的作用而生存。     

克隆伊氏锥虫对安锥赛抗药性的培育

为了深入观察伊氏锥虫对安锥赛抗药性的形成,将伊氏锥虫浙江水牛株克隆,克隆繁殖后的虫体一部分作为原种对照组,即C01组;一部分虫体连续经环磷酰胺免疫抑制的小鼠,再用安锥赛亚治疗剂量治疗该小鼠,使其伊氏锥虫对安锥赛产生7个不同程度的抗药性组,即C1～C7组;另一部分虫体也连续经环磷酰胺免疫抑制的小鼠,作为伴随C7的同步繁殖组,即不用药物的C02组.结果C01、C02、C1～C7组所用安锥赛剂量依次为0、0、6、16、40、80、196、406、638mg/kg,它们经小鼠传代数依次为0、28、1、3、6、9、15、22、28代.用体外生长繁殖抑制法测得它们的ICs0值依次为0.015 50、0.016 87、0.082 60、0.102 37、1.409 29、1.922 90、9.923 30、23.563 00、43.84000.结果表明,安锥赛亚治疗剂量与伊氏锥虫抗药性的IC50值呈曲线关系,从C1到C4的IC50值上升较缓慢,从C4后的ICs0值上升较快,并且几乎呈直线上升;伊氏锥虫所经小鼠的代数与它们的IC50值的关系呈抛物线型,从C1到C4的ICs0值上升很慢,C4以后的IC50值上升很快.用体内试验测试C01～C4组的CD100值,每个组感染35只小鼠,每只小鼠接种1.0×104条锥虫,其中30只小鼠分为安锥赛的3个剂量治疗小组,另5只小鼠为不治疗对照组.结果C01组和C1组的CD100值分别为7.0、13.0 mg/kg,这表明C1组只经1代免疫抑制小鼠,注射安锥赛剂量3×2 mg/kg,就使该组伊氏锥虫对安锥赛的抗药性提高了6 mg/kg,并且它们的IC50值C1是C01的6.6倍.C2、C3和C4组由于抗药性程度过高均不能治愈,因此尚未测到它们的CD100值.这些结果表明,伊氏锥虫经免疫抑制小鼠对安锥赛产生抗药性的速度是非常快的.     

伊氏锥虫对安锥赛抗药性机制的初步探讨

选用克隆伊氏锥虫的安锥赛敏感株 C0 1、C0 3和 5个不同程度抗药株 C1、C2、C4、C6、C7,用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离它们的己糖激酶 (HK)、6 -磷酸葡萄糖脱氢酶 (G6 PDH)、丙氨酸转氨酶 (AL AT)、天冬氨酸转氨酶 (ASAT)同功酶 ,并测定胆碱酯酶活性。结果 ,这 5种酶与伊氏锥虫对安锥赛产生抗药性无关。用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离和测定这 7个样品的粗蛋白质 ,结果相对分子质量为 15 790带在抗药株 C1、C2、C4、C6和 C7含量较高 ,这表明它可能与安锥赛抗药性的产生有一定关系 ;相对分子质量为 1976 0带在高抗药株 C4、C6和 C7的含量很高 ,这表明它可能也与抗药性的产生有一定关系     

伊氏锥虫安锥赛抗药性相关基因-TbTA1的分析

为探讨伊氏锥虫对安锥赛抗药性的分子机理，以布氏锥虫对砷剂药物抗药性相关的TbTA1基因设计引物，以55℃、57℃、60℃、63℃和65℃不同退火温度，分别从伊氏锥虫敏感株的cDNA和基因组DNA中扩增出TbTA1基因的全长序列，但是从安锥赛抗药株伊氏锥虫的cDNA和基因组DNA中都未扩增出TbTA1基因，这表明基因TbTA1可能与伊氏锥虫安锥赛抗药性的产生有关。伊氏锥虫与布氏锥虫的，TbTA1基因序列比较，它们有10个碱基不同，即第88位的G（T.e）-A（T.b）、第144位的T（T．e）-C（T．b）、第224位的C（T．e）-T（T．b）、第471位的C（T.e）-T（T.b）、第472位的A（T．e）-G（T.b）、第549位的G（T．e）-T（T．b）、第1008位的C（T．e）-T（T.b）、第1033位的A（T．e）-G（T．b）、第1293位的A（T．e）-G（T．b）和第1384位的T（T．e）-C（T．b），其中有5个碱基所编码的氨基酸不同，即Val^30（T.e）Ile（T．b）、Ala^75（T．e）-Val（T．b）、Ile^158（T．e）-Val（T．b）、Thr^345（T．e）-Ala（T．b）和Ser^462（T.e）-Pro（T．b），这表明伊氏锥虫与布氏锥虫的TbTA1差异可能是它们的种间差异。     

伊氏锥虫对安锥赛抗药性机制中的TbTA1基因

为探讨伊氏锥虫对安锥赛抗药性的分子机理,以已报导的布氏锥虫对砷剂药物抗药性相关的TbTA1基因设计引物,以不同退火温度(55℃、57℃、60℃、63℃和65℃)和不同DNA聚合酶(Clontech的50×Advantage Poly-merase Mix和上海生物工程公司的Taq聚合酶),分别从伊氏锥虫敏感株(C03)的cDNA和基因组DNA中分离出TbTA1基因的全长序列,而从抗药株(C7)的cDNA和基因组DNA中都没分离出TbTA1基因,这表明抗药株的Tb-TA1已发生改变;根据TbTA1的5'端和1041端设计引物,从敏感株和抗药株都分离到约1000bp的片段,这表明因安锥赛抗药性的产生而TbTA1的改变主要发生在TbTA1的1042-1415部分.由此确定TbTA1与伊氏锥虫的安锥赛抗药性有关.将伊氏锥虫敏感株的TbTA1克隆、测序,其序列与布氏锥虫TbTA1序列比较,它们有10个碱基不同,即第88位的G(T.e)-A(T.b)、第144位的T(T.e)-C(T.b)、第224位的C(T.e)-T(T.b)、第471位的C(T.e)-T(T.b)、第472位的A(T.e)-G(T.b)、第549位的G(T.e)-T(T.b)、第1008位的C(T.e)-T(T.b)、第1033位的A(T.e)-G(T.b)、第1293位的A(T.e)-G(T.b)和第1384位的T(T.e)-C(T.b),其中有5个碱基所编码的氨基酸不同,即Val30(T.e)-Ile(T.b)、Ala75(T.e)-Val(T.b)、Ile158(T.e)-Val(T.b)、Thr345(T.e)-Ala(T.b)和Ser462(T.e)-Pro(T.b),这表明伊氏锥虫与布氏锥虫的TbTA1差异可能是它们的种间差异.     

体外培育抗苏拉灭伊氏锥虫克隆

将３个苏拉灭敏感的伊氏锥虫原种的克隆连续培养于改良Ｂａｌｔｚ无细胞培养系统中，通过逐步提高培养基中苏拉灭的含量，培育了３个抗苏拉灭的伊氏锥虫克隆─ＪＧｃ１－１６０、ＪＸ－１ｃ１－１６０和ＺＪｃ１－１４０。它们体外药敏试验的ＩＣ５０依次为３５８．５、４１２．３和２４６．４μｇ／ｍＬ，是各自亲本克隆的１２９２．５、１８７４．１和１７６０．ｏ倍；小鼠治疗试验的ＣＤ１００，对免疫功能正常小鼠依次为８０、１２０和３０ｍｇ／ｋｇ，为各自亲本克隆的５．３、８．０和３．０倍，对免疫抑制小鼠为２５０、３００和１００ｍｇ／ｋｇ，分别是相应免疫正常小鼠的３．１、２．５和３．３倍。试验结果表明，抗锥虫药治疗剂量不足和宿主免疫功能不全是导致产生抗药虫株的重要因素，各自既可单独发挥作用，又可相互协同。本文报道了体外培育伊氏锥虫抗药虫株的方法，这一方法对研究锥虫抗药性具有重要作用。     

灭锥灵治疗小白鼠伊氏锥虫病试验

伊氏锥虫病在我国流行甚广,造成马、牛的大批死亡。国内现用于治疗伊氏锥虫病的药有安锥赛和贝尼尔,因为副反应严重或疗效差,使用有一定局限性,而且有些锥虫地理株对上述两种药已产生抗药性,进口的拜尔205疗效较好,但药价昂贵。所以,寻找疗效好,使用方便的新药显得尤为迫切。我们采用灭锥灵治疗小白鼠伊氏锥虫病试验。     

银染mRNA差异显示法克隆柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)抗药性相关基因

以柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）敏感株、地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株孢子化卵囊为材料，用银染mRNA差异显示方法筛选和克隆与球虫抗药性相关的基因。首先提取这3个虫株孢子化卵囊的总RNA为模板．用Oligo（dT）12GG为锚定引物和2个10碱基随机引物组合进行RTPCR，产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染。分别切取5务差异条带，进行2次PCR扩增，产物回收后与PGEM—T—easy Vector连接转化。经PCR鉴定正确后，再进行斑点杂交试验、序列分析和同源性比较。结果发现，地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株分离的差异片段中都有2个cDNA片段（可能为新的基因片段），这为克隆全长cDNA和探索球虫抗药性产生的分子机理奠定了一定的基础。     

用免疫抑制小鼠快速培育抗苏拉明伊氏锥虫

将伊氏锥虫克隆ＪＧｍｃ５用环磷酰胺处理的免疫抑制小鼠频繁地连续传代，并予以亚治疗剂量的苏拉明治疗，连续传代１４次，历时８８日，即获得对苏拉明具有高水平抗药性的伊氏锥虫群体。在用免疫活性正常的健康小鼠测定抗药性时，此抗苏拉明锥虫群体仍保持高水平的抗药性，ＣＤ１００＞４００ｍｇ／ｋｇ。在以体外药敏试验测定时，其ＩＣ５０为１２３．２μｇ／ｍｌ。实验结果表明，宿主免疫系统的损害，在实验条件下，可导致伊氏锥虫迅速产生抗药性。在野外条件下，机体免疫系统的损害对锥虫抗药性的产生可能也起一定作用。     

四种抗锥虫药治疗伊氏锥虫病效果比较试验

目前,在我国应用治疗伊氏锥虫病药物有纳嘎诺尔(拜尔—205,苏拉明),贝尼尔(三氮脒),安锥赛(喹嘧腰),沙莫林(Trypamidium)四种。对其疗效,据各地兽医工作者临床应用结果,评价不一。有的发现纳嘎诺尔有抗药性,有的认为贝尼尔疗效差,有的认为沙莫林疗效差。我们曾用这4种药进行治疗伊氏锥虫(江苏株)病试验,结果提示不同地理虫株对各药的抗性不同°为此,我们又对伊氏锥虫(浙江株)病作     

捕食线虫性真菌的分离鉴定

本文报道首次从我国内蒙古土壤中分离出一株捕食线虫性真菌,该菌株适宜在２０℃,ｐＨ６,玉米粉浓度０．４ｇ／Ｌ的玉米粉琼脂（ＣＭＡ）培养基中生长。通过对其菌丝、孢子及捕食性结构的形态学观察,鉴定其为节丛孢属的少孢节丛孢菌ＣＩＭＨＩ株（Ａｒｔｈｒｏｂｏｔｒｙｓｏｌｉｇｏｓｐｏｒａ,ｓｔｒａｉｎＣＩＭＨＩ）。     

广西水牛类圆线虫病的病原体形态

类圆线虫病是广西水牛的常见寄生虫病之一,本文作者通过光镜观察,我们确认广西水牛类圆线虫病的病原体即为乳突类圆线虫。本文首次记述该虫种第四期幼虫的形态。在扫描电镜下,虫卵表面光滑,近似椭圆形。丝状蚴头端钝圆,口孔裂隙状,左右为2唇片,每唇片似分3小叶;体表两侧自劲部开始,各有2条纵嵴,延续至尾端,称为双翼膜(double alae),这是该期虫体独有的构造;丝状蚴尾端分叉。自由生活成虫具6片唇,各唇上有1个唇乳突;口孔内沿有一排锥状齿,共9枚;头端两侧各具1个半球形的头感器;头端背腹面的两侧各具1个头乳突,共4个,锥形。自由生活雄虫的泄殖腔处明显地突出于虫体表面,其周围有7对性乳突。自由生活雌虫的阴门横裂,肛门呈半月形。寄生生活雌虫头端截平,4个唇片由口缘伸向口孔,唇片近口孔中央向上翻卷,唇片上各有1个唇乳突;口孔呈倾斜(45°)的马耳他“十”字形;头感器1对,头乳突4个;阴门横裂,阴门部有1对阴侧感觉窝和1对阴后乳突;肛门横裂,突起;尾部自肛门后突然收缩,呈指状。在宿主体内未见到寄生生活雄虫。     

鸡胚法氏囊的组织发育

本试验通过对孵化至１３－２１日龄的鸡胚法氏囊进行组织学的连续性动态观察,较为详细地描述了早日龄鸡胚法氏囊的组织学分化发育过程。实验结果显示,直至出壳胶鸡胚法氏囊尚未形成较完整的能组织起 体液免疫促进作用的组织基础结构,其完善的形态结构需在后天环境中分化和发育。     

工程量清单计价模式实施探析

实行工程量清单计价是一种既符合我国市场竞争规则，又符合与国际惯例接轨的造价模式，是我国建设市场发展需要的必然结果。阐述了在我国实行工程量清单计价的重大意义，探讨了现阶段实施工程量清单计价中遇到的问题，并提出了完善措施。     

《证券法》的修改与上市公司信息披露的规范

上市公司信息披露关系到市场的健康发展，但目前上市公司信息披露存在着许多问题，如信息披露制度不完善，信息披露质量难言满意等。根据证券法修订草案中对上市公司信息披露的相应修改内容，应用XBRL技术加速上市公司信息披露规范，多管齐下改善披露质量：引入做空机制是一个优选；加重违反信息披露法律法规上市公司的法律责任；加大信息披露监管力度。     

高剂量锌促进猪生长的机理探讨

选用42头“杜长大”三元杂交猪，分为2组（每组3个重复），分别饲以添加100mg/kg和3000mg／kg锌（氧化锌）的相同饲粮，进行了为期30d的饲养试验，然后屠宰取样，研究高剂量锌促进猪生长的作用机理。结果显示：饲粮中添加300mg/kg锌显著提高了日增重（P＜0.01)和采食量（P＜0.01）；饲料干物质、粗蛋白的消化率明显上升（P＜0.01）；肝脏组织中金属硫蛋白含量增加（P＜0.01），铜，锌－超氧化物歧化酶活力增强（P＜0.01);肝脏RNA含量和RNA／DNA值显著上升（P＜0.01）；血清胰岛素、胰岛素样生长因子I水平明显升高（P＜0.01）。试验结果提示，高剂量锌似通过有效清除体内自由基的不良影响，增强DNA转录RNA，促进胰岛素、胰岛素样生长因子I的合成和分泌，加强合成代谢，而产生促生长效果。     

家兔四肢动脉解剖

家兔四肢动脉的分布情况,国内外文献均十分简单,特别是缺少一张完整的图。前、后足部的血管图,大部分文献中均略去。本文对此进行了研究,绘出了完整的模式图,可供参考。