气载镰孢菌的RAPD分子特性研究

采用微型电钻研磨法提取了89株气载镰孢菌Fusarium菌株的基因组DNA。从30个RAPD引物中筛选出了扩增条带平均为5—10条的5个引物：S330（ccgacaaacc）、S29（gggtaacgcc）、S122（gaggatccct）、S129（ccaagcttcc）和S121（gggatatcgg）,对待测基因组DNA进行扩增。通过对电泳谱带的标记和采用EPCI。UST软件进行聚类分析,研究结果表明,当遗传距离封闭在0．62时,基本可以将形态学鉴定的镰孢菌种区分开来,根据遗传距离还可以将不产孢的疑难菌种的分类地位加以明确。     

羊舍气载真菌的浓度及分布特征

采用6级Andersen空气生物采样器,以孟加拉红培养基为培养介质,测定并分析羊舍气载真菌浓度、分布特征及与环境的关系,以期为羊舍的环境控制提供依据。结果表明,羊舍内真菌气溶胶浓度为2 855(±1 806)~3 698(±3 087)CFU/m3;9∶00左右浓度最低,显著低于13∶00和17∶00(P<0.05);真菌粒子主要分布在采样器第3~5级,粒径<5μm的真菌粒子约占80%,可侵入肺泡;与环境因素的相关性分析表明,空气真菌含量与环境因素有显著的线性关系,与温度呈正相关,与相对湿度呈负相关。     

山西省东南部羊舍气载真菌浓度变化及空气动力学特征

试验研究了山西省东南部羊舍气载真菌浓度变化规律和真菌气溶胶的空气动力学特征,以期为羊场的环境控制提供依据。应用Andersen-6级空气微生物采样器,以孟加拉红培养基为采样介质,于春、夏、秋、冬分别采集了山西省东南部3个羊场羊舍的真菌气溶胶,分析其气载真菌浓度和真菌气溶胶的粒径特点。结果表明,羊舍气载真菌一年中以秋季浓度最高,显著高于其他季节（P<0.05）,且秋季一天上午、中午、下午3个时间段中,浓度差异显著（P<0.05）;羊舍真菌气溶胶粒子4个季节在采样器上的分布基本相同,高峰出现在第Ⅳ级,主要分布在Ⅲ~Ⅴ级,占各级总数的72.66%~83.87%,可进入人和动物的肺泡;羊舍真菌气溶胶粒子计数中值直径（CMD）为1.3~2.9 μm,粒径分布的离散度（GSD）为1.6~2.7 μm;夏季CMD显著低于其他季节（P<0.05）。综合以上结果,羊舍气载真菌浓度与季节密切相关,80%左右气溶胶粒子可进入人和动物肺泡,且CMD小于其他动物圈舍,潜在危害较大。     

利用RAPD分子标记研究苜蓿种质资源遗传多样性

利用RAPD分子标记对53份苜蓿Medicago sativa种质资源的遗传多样性进行分析,计算了35个RAPD分子标记的多态性比率和每份苜蓿种质资源的Shannon多样性指数和Nei指数,并通过计算53份苜蓿种质资源的遗传距离(CD),进行聚类分析,探讨它们之间的素缘关系.结果如下:1)35个RAPD标记扩增共得到306条带,其中多态性条带288条,多态位点比率为94.12%.说明这53份苜蓿种质资源具有较高遗传多样性.2)53份苜蓿种质资源的Shannon多样性指数和Nei指数变化规律一致.直立黄花苜蓿的Shannon多样性指数和Nei指数最低,说明其遗传多样性最小;公农1号的Shannon多样性指数和Nei指数最高,说明其遗传多样性最大.3)53份苜蓿种质资源间的遗传距离变异范围为0.136 3～0.661 0.以λCD=0.275为标准将53份苜蓿种质资源划分为7个组群,直立黄花苜蓿单独被划分成一个组群.     

气载细菌内毒素的国内外研究现状

本文简单介绍了气载细菌内毒素的形成及生物学作用,并从人的生活环境及动物舍环境两方面介绍了国内外对气载内毒素的研究现状,使得人们对气载内毒素有一个初步认识,便于更好的控制环境、改善环境质量。     

气载细菌内毒素的国内外研究现状

本文简单介绍了气载细菌内毒素的形成及生物学作用,并从人的生活环境及动物舍环境两方面介绍了国内外对气载内毒素的研究现状,使得人们对气载内毒素有一个初步认识,便于更好的控制环境、改善环境质量。     

水貂养殖舍中细菌气溶胶与气载内毒素检测

摘 要：[目的]本研究旨在了解水貂舍细菌气溶胶和气载内毒素对环境的污染及对饲养人员健康的潜在危害。[方法]采用Andersen-6空气收集器和AGI-30液体冲击式采样器对市郊不同饲养条件的2个水貂场6栋养殖舍内的细菌气溶胶和气载内毒素进行定期检测。[结果]两个场舍内气载需氧革兰氏阴性菌浓度分别介于4.17×101~2.43×103 CFU/m3之间和4.27×101~5.1×103 CFU/m3之间,以大肠杆菌科为主,假单胞菌属和巴斯德氏菌属次之;从革兰氏阴性菌在Andersen-6空气收集器层级上的分布规律来看,主要分布在Ⅲ级（36.9%）,气溶胶颗粒直径在2~6 mm之间。两个场舍内的气载内毒素浓度分别介于2.92×102~2.15×103 EU/m3之间和2.67×101~2.56×102 EU/m3之间。[结论]水貂舍内气溶胶颗粒可以进入到动物和人的支气管、细支气管,甚至肺泡,在一定程度上增加了水貂和饲养人员呼吸道疾病发生的可能性;气载内毒素的浓度部分超出了对人体无影响的推荐标准（1.0×102 EU/m3）,可对水貂饲养人员的健康造成一定的危害;舍内气载革兰氏阴性菌与内毒素之间没有必然的相关性,表明空气中气载内毒素含量不能用空气中气载革兰氏阴性菌的含量来评估。     

兔舍环境气载内毒素检测

兔舍内气载内毒素的含量介于65￣217 EU/m 3;需氧革兰氏阴性活菌的含量介于0.7￣1.6×103 C FU/m 3空气之间,占优势的是肠杆菌,其中大肠杆菌最为常见;需氧菌含量介于3.3￣7.8×103 C FU/m 3。气载内毒素与需氧革兰氏阴性活菌含量和需氧菌总数在数值上存在弱的正相关(r=0.23;r=0.20)。结果表明:不能通过测定气载革兰氏阴性细菌或细菌总数来估计气载内毒素的含量。气载内毒素含量与粪便和饲料中内毒素浓度之间呈正相关(r=0.71;r=0.58),证明饲料和粪便是气载内毒素的重要来源。     

两株少孢节丛孢菌在不同培养基中的形态学差异及生长特性

为了观察捕食线虫性真菌少孢节丛孢菌不同分离株在不同培养基中的形态学特性及生长情况,将少孢节丛孢菌分离株DH 066和F 107接种于10g/L麸皮琼脂(WBA)培养基、10g/L玉米粉琼脂(CMA)培养基、20g/L葡萄糖离子琼脂(DIA)培养基和20g/L葡萄糖琼脂(DA)培养基中,置于25℃恒温箱培养,观察不同分离株在不同培养基中的形态学特性并测定其产孢量。对2个分离株在6种不同培养基中菌丝生长长度每天进行定时测量。结果表明,该菌在4种培养基中的特征为分生孢子梨形至倒卵形,1个分隔,偶见2个分隔,分生孢子梗无色,直立,分隔,偶见分枝,分生孢子在10g/L WBA产量最大。此外,对2个分离株在不同培养基中生长速度研究表明,该菌在10g/L麸皮自来水琼脂(WBWA)培养基和10g/L玉米粉自来水琼脂(CMWA)培养基中生长最快。     

紫花苜蓿品种鉴定的RAPD分子标记技术研究

试验分别以中苜一号(Medicago sativa L. cv.Zhongmu No.1)、肇东(M.sattva L. cv.Zhodong)、甘农三号(M.sativa L. cv.Gannong No.3)、公农一号(M.satzva L. cv.Gongnong No.1)紫花苜蓿品种的混合DNA(由各品种60个单株的DNA等量混合)为模板筛选RAPD特异性引物,分析比较品种鉴定的特异性谱带.结果表明:从120条随机引物中筛选出S1、S78、S89和S¨5共4条随机引物,可以通过特异性分子标记位点反映品种间的差异;另外,筛选出的RAPD标记引物对各品种60个单株DNA的测试显示品种内部存在特异性标记的单株比例较高;通过RAPD分子标记引物的筛选、标记程序的完善,确定品种特异性标记谱带,可以进行紫花苜蓿(Medicago sativa)品种的鉴定.     

6种野生蚕类的RAPD分析

野生蚕类是我国重要的泌丝昆虫资源,研究其亲缘关系对于发掘和利用野生蚕类资源具有重要意义。利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术分析大蚕蛾科的柞蚕、栗蚕、野生柞蚕、天蚕、蓖麻蚕、透目天蚕间的亲缘关系,利用从54个引物中筛选出的30个重复性较好的随机引物对6种野生蚕类的基因组DNA进行扩增,共得到632个RAPD标记,其中可变条带数为632条,单个引物扩增的条带数为15～27,平均为21.1。6种野生蚕类相互间的遗传距离(D)较大,说明相互间的亲缘关系较远,其中:蓖麻蚕和栗蚕的遗传距离最大,为0.761 2;天蚕和透目天蚕的遗传距离最小,为0.671 1。采用UPGMA法构建的聚类图显示6种野生蚕类聚为4类,柞蚕与野生柞蚕聚为一类,天蚕与透目天蚕聚为一类,栗蚕、蓖麻蚕各自单独聚为一类。     

RAPD与形态学对片形吸虫种类鉴别的比较研究

通过形态学特征观察与随机扩增多态DNA（RAPD）技术，对国内外8株片形吸虫（Fasciola)作比较鉴别。形态典型的6株肝片形吸虫（F.hepatica)和1株大片形吸虫（F.gigantica)两种方法结果。南京的1株不典型虫种（F.sp)，其形态特征类似日本中间种／印度片形吸虫（F.indica),RAPD检测则与大片形吸虫聚类，差异仅0．255，亲缘于大片形吸虫，是一株形态不典型的大片形吸虫。比较表明，形态学方法能简单易行正确地判定典型片形吸虫，但难以识别中间种或亲缘种；RAPD技术则从分子遗传变异水平上鉴别虫种，有利于对中间种或亲缘种的识别及新种的发现，两者具有相互不可替代的相辅相成作用。     

几种绢丝昆虫遗传多样性的RAPD研究

选用重复性较好的 10个引物对 6种绢丝昆虫 2 3个个体进行扩增 ,共得到 2 45个RAPD标记。RAPD分析结果表明 :家蚕及野桑蚕种内各品种材料的遗传距离较大 ,天蚕、蓖麻蚕及柞蚕较小 ;家蚕与野桑蚕两者之间遗传距离小 ,反映出家蚕和野桑蚕亲缘关系较近 ;而天蚕、蓖麻蚕和柞蚕三者之间以及分别与家蚕和野桑蚕之间的遗传距离较大 ,亲缘关系远。聚类分析的结果与之相同。并且对家蚕的起源及绢丝昆虫遗传多样性的保护利用做了探讨。     

鸡肠道菌基因组DNA的RAPD分类的研究

本文以7种鸡肠道菌为研究对象，分别提取基因组DNA，利用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术对其基因组进行DNA分析，筛选出一系列随机引物，能在7种肠道细菌中有较好的多态性，可用作分子标记鉴别这7种肠道菌。     

朱NFDD4RAPD反应体系的研究

以朱Huan基因组DNA为材料，对RAPD反应体系各参数进行了筛选，建立了一套较好的反应体系。该体系为：Mg^2 浓度为2.5mmol/L,dNTP浓度为2.0mmol/L，随机引物浓度为0.33μmol/L,TaqDNA聚合酶用量为0.5U/μL，模板DNA用量为50ng/μL，反应终体积为25μL。     

荷斯坦奶牛随机扩增多态DNA(RAPD)反应条件的优化

以中国荷斯坦奶牛为试验材料,研究了Mg2 浓度、dNTPs浓度、引物浓度、模板DNA浓度、TaqDNA聚合酶,以及退火温度对RAPD反应的影响,建立一套适合中国荷斯坦牛的最佳RAPD反应体系。反应总体积为20μL,Mg2 浓度为2.5mmol/L,TaqDNA聚合物浓度为1U,引物浓度为2μmol/L,dNTPs浓度为400μmol/L,模板DNA浓度为100ng。PCR反应程序:94℃预变性2min→40循环(94℃变性1min→36℃退火1min→72℃延伸1min)→72℃延伸5min。     

扁穗牛鞭草RAPD影响因素的研究

以扁穗牛鞭草Hemarthria compressa基因组DNA为模板,通过单因子试验分别研究了RAPD反应体系中主要成分:Mg2 浓度、dNTP浓度、引物浓度、模板浓度、TaqDNA聚合酶用量以及BSA浓度对RAPD-PCR扩增的影响,找出各自的最适条件,建立了适合扁穗牛鞭草的RAPD反应体系:在25μL反应体系中,内含1×PCRbuffer、1.5~2 mmol/L Mg2 、150μmol/L dNTP、20 ng引物、40 ng模板、1 UTaqDNA聚合酶。     

Molecular typing of Staphylococcus aureus based on PCR-RFLP of coa gene and RAPD analysis

The aim of this study was molecular identification of S. aureus strains isolated from mastitic milk samples and establishing the genetic relationship between strains isolated from cows belonging to the same herd. In all 43 isolated strains the gap gene (930 bp) was amplified, which enabled their affiliation to the Staphylococcus genus to be established. PCR-RFLP with AluI endonuclease of the gap gene as well as nuc (450 bp) and coa (1130 bp) gene amplification allowed precise S. aureus species identification. One hundred percent of the genetic relationship between strains was established via RAPD-PCR and coa-typing.