过表达H3K9me3 去甲基化酶对猪克隆胚胎体外发育效率的影响

为了探索过表达组蛋白H3K9me3去甲基化酶KDM4B/KDM4D对猪克隆胚胎体外发育效率的影响,研究构建了鼠源KDM4B/KDM4D表达载体,通过体外转录获得KDM4B/KDM4D mRNA并将其分别显微注射至猪克隆胚胎。结果显示两组注射的克隆胚胎的H3K9me3水平、卵裂率和囊胚率与对照克隆胚胎无显著差异,但两组注射的克隆胚胎的H3K9me3去甲基化酶表达水平显著高于无注射的对照克隆胚胎,且注射KDM4B mRNA的克隆胚胎的囊胚细胞数显著高于注射KDM4D mRNA的克隆胚胎及对照克隆胚胎,表明过表达组蛋白H3K9me3去甲基化酶KDM4B可以显著提高猪克隆胚胎的体外发育效率。     

H3K9me3对猪卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的影响

H3K9的异常甲基化被认为是影响胚胎发育障碍的主要表观遗传修饰之一. 毛壳素是 H3K9me3的特异性抑制剂,能抑制其甲基转移酶SUV39H1/2和G9A的活性,下调 H3K9me3水平.本实验通过在猪卵母细胞体外成熟过程中添加毛壳素, 探究调控 H3K9me3对猪卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的影响. 在0～22h用...     

鸡卵泡颗粒层组蛋白H3K4me3和H3K27me3的表达研究

卵母细胞成熟过程受组蛋白H3K4me3(trimethylation of lysine 4 on histone 3)和H3K27me3(trimethylation of lysine 27 on histone 3)及其相关的甲基化和去甲基化酶的调控，因此考虑对鸡的卵泡发育也存在一定的影响。选取“苏禽3号”配套系第一母本为研究对象，采用Western blot法探究组蛋白H3K4me3和H3K27me3在鸡卵泡不同发育阶段颗粒层中蛋白的表达模式。结果表明：在苏禽3号卵泡颗粒层中，组蛋白H3K4me3在卵泡发育不同阶段表达模式呈降低→升高→降低→升高的波浪形趋势，波浪变化较为平缓，在F5、F2和F1 3个表达高点的表达量与SWF(small white follicle)、LWF(large white follicle)、SYF(small yellow follicle)和F3 4个表达低点的表达差异显著（P<0.05）。组蛋白H3K27me3在不同发育阶段表达模式亦呈波浪形表达趋势，波浪变化起伏较明显，在SWF、SYF和F33个表达高点的表达量与F5、F4、F1和F2 4个表达低点的表达差异显著（P<0.05）。相关性分析显示，组蛋白H3K4me3与H3K27me3在不同发育阶段卵泡颗粒细胞中的表达呈较强的负线性相关(R=-0.808，P=0.000)。结果提示：组蛋白H3K4me3和H3K27me3在不同发育阶段卵泡颗粒层中的表达具有组织差异性，呈负相关的动态修饰性，可能共同协调卵泡生长过程中各基因的表达与功能，研究结果为鸡繁殖性状调控机理提供了理论依据。     

H3K4me3对猪卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的影响

哺乳动物卵母细胞的成熟与组蛋白甲基化修饰密切相关. CPI-455是一种组蛋白去甲基化酶抑制剂,可特异性抑制组蛋白去甲基转移酶KDM5A/B的活性,提高H3K4me3(组蛋白H3第4位赖氨酸三甲基化)的表达水平.本实验在猪卵母细胞体外成熟过程中添加CPI-455,探究H3K4me3组蛋白甲基化对猪卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的影响.首先,用不同浓度CPI-455在不同时间处理猪卵母细胞,发现在0～22 h添加5μmol CPI-455的处理方法效果最佳,卵母细胞成熟率与囊胚形成率均显著高于未处理组(p0.05). 0～22 h添加5μmol CPI-455处理卵母细胞显著提高了囊胚中H3K4me3的表达(p0.05),降低了卵母细胞中KDM5A和KDM5B的表达(p0.05),并且显著提高了囊胚中Nanog,Oct4,CDX2等多能性基因的表达(p0.05). CPI-455处理可以通过降低卵母细胞中相关基因的表达,上调囊胚中多能性基因的表达,调控H3K4me3的甲基化水平,从而促进猪卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育.     

小鼠卵母细胞和胚胎发育过程中组蛋白H4K20二甲基化的表达

运用单细胞免疫荧光技术,分析了小鼠卵母细胞和胚胎发育过程中组蛋白H4K20二甲基化的表达情况。结果表明:H4K20二甲基化在生长期的卵母细胞中呈逐渐增加的趋势;15 d时的小鼠卵母细胞没有H4K20二甲基化的表达,但在第20天和第25天重新被检测到信号;卵母细胞在生发泡期(GV)、生发泡破裂期(GVBD)和减数分裂中期(MⅡ)均没有H4K20二甲基化的表达;二细胞胚胎和四细胞胚胎中有H4K20二甲基化的表达,其他时期的胚胎中检测不到荧光信号。     

孕鼠DEHP暴露影响胎儿早期卵母细胞H3K27me3表达的研究

本文以胎鼠卵母细胞为研究对象,分析了妊娠母鼠孕期暴露邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)对胎鼠卵母细胞早期发育过程中组蛋白甲基化修饰程度的影响,结果发现:妊娠母鼠在12.5 dpc到16.5 dpc 期间暴露40 μg/kg DEHP,第一次减数分裂前期的胎鼠雌性生殖细胞的H3K27me3表达受到了显著影响,导致H3K27me3强阳性细胞比例显著减少.该研究结果说明DEHP可通过孕鼠影响胎鼠卵母细胞早期发育过程中的组蛋白甲基化修饰.     

CD-1小鼠海马H3K9三甲基化水平的年龄化改变 及其与认知功能改变的相关性研究

探讨年龄对CD-1小鼠海马组蛋白H3K9三甲基化(H3K9me3)含量的影响及其与空间学习记忆能力改变的相关性。结果发现,18月和12月龄鼠在放射状水迷宫中学习期和记忆期的潜伏期、错误数均高于6月龄鼠(P_s0.05);18月龄鼠学习期及记忆期的错误数还高于12月龄鼠(P_s0.05)。18月龄鼠海马DG和CA1区H3K9me3水平高于12月龄鼠(P_s0.05),12月龄鼠也高于6月龄鼠(P_s0.05)。DG和CA1区H3K9me3相对含量与学习期的潜伏期和错误数以及记忆期错误数呈正相关(P_s0.05),而CA3区H3K9me3相对含量与学习期和记忆期的错误数、潜伏期之间无明显相关性(P_s0.05)。以上结果提示,CD-1小鼠年龄相关空间学习记忆损害可能与海马组蛋白H3K9me3升高有关。     

SETD2在猪卵母细胞体外成熟中的作用

SETD2是H3K36me3特异性甲基转移酶，参与组蛋白甲基化修饰，并通过调节多种基因的表达影响细胞功能。为探究SETD2在猪卵母细胞体外成熟（in vitro maturation,IVM）过程中的表达规律及作用，通过免疫荧光染色检测SETD2及H3K36me3在猪卵母细胞IVM过程中各个时期（GV、MⅠ、MⅡ期）的表达定位情况；在GV期显微注射SETD2干扰RNA(SETD2-siRNA)构建干扰模型，检测干扰后对SETD2、H3K36me3、DNA双链断裂标志物（γH2AX）以及第一极体（PBI）排出率的影响；通过qPCR技术检测干扰后对DNA甲基化转移酶DNMT3B、凋亡和抗凋亡相关基因BAX、BCL2表达的影响。结果表明：SETD2信号GV期聚集在DNA周围，MⅠ和MⅡ期均在细胞质中表达，而H3K36me3在整个减数分裂过程中均与核共定位；进一步研究发现，SETD2-siRNA干扰后显著降低了SETD2和H3K36me3表达水平，增加了γH2AX表达（P<0.05），同时显著降低PBI排出率（P<0.05）;qPCR结果显示，SETD2-siRNA干扰后DNMT3...     

BIX-01294对山羊胎儿成纤维细胞生长状态和组蛋白H3K9二甲基化的影响

为探讨BIX-01294对供核细胞的影响,使用不同浓度的BIX-01294处理山羊胎儿成纤维细胞(Goat embryonic fibroblasts,GEFs),并检测其细胞活力、细胞周期、细胞凋亡、H3K9me2水平和多能性基因的mRNA水平。细胞活力检测结果显示,BIX-01294浓度在1.0μmol/L以下不会影响细胞活力,2.0μmol/L时24h和48h处理组的细胞活力显著下降(P0.05),≥4.0μmol/L时所有处理组的细胞活力均极显著下降(P0.01)。细胞周期和凋亡检测结果显示,H3K9me2下调会引起细胞周期的停滞和正常细胞的减少,其中BIX-01294在大于2.0μmol/L时G0/G1期细胞的比例极显著升高(P0.01),4.0μmol/L时凋亡细胞极显著增加(P0.01)。处理后的细胞H3K9me2水平均极显著下降(P0.01),但大于1.0μmol/L的处理浓度能获得较好的下调效果。处理后细胞Oct4、Sox2和Nanog的mRNA水平均有不同程度的增加,其中Oct4和Nanog的mRNA水平增加极显著(P0.01)。说明:采用1.0μmol/L BIX-01294处理山羊胎儿成纤维细胞,可以下调H3K9me2水平,增加G1/G0期细胞比例,上调细胞多能性基因表达量,而且不影响细胞活力。     

生长素对猪孤雌激活胚胎体外发育的影响及其受体基因的表达模式

为探明生长素及其受体GHSR-1a在胚胎早期发育中的作用,以猪孤雌激活胚胎为研究对象,在其体外发育过程中添加不同浓度生长素,观察胚胎发育速度和发育效率,并用荧光定量PCR检测猪孤雌激活胚胎早期发育过程中生长素特异性受体基因GHSR-1a的表达。结果显示,相对于对照组,添加10.0 mg/L生长素可以显著提高4-细胞胚胎、8-细胞胚胎、桑葚胚的发育率(P0.05),并能加快4-细胞胚胎、8-细胞胚胎、桑葚胚的发育速度(P0.05)。GHSR-1a mRNA在2-细胞期到桑葚胚期保持较高表达水平,囊胚期后显著下降(P0.05);免疫荧光染色表明GHSR-1a在猪孤雌激活胚胎各发育时期均有表达,4-细胞期、8-细胞期和桑葚胚期的表达量显著高于囊胚期(P0.05)。推测生长素通过提高GHSR-1a的表达来提高猪孤雌激活胚胎的发育速度和效率。     

解钾微生物K3与K4的分离及特性研究

用无氮培养基从土壤中选出2株菌种,然后对菌种进行分离、鉴定以及对解钾能力进行测定。结果表明：对不同地区及生物肥料样品进行稀释倒皿后,只有少数样品中分离到解钾菌株。该菌通过革兰氏染色实验、过氧化氢酶实验、硝酸盐还原实验、淀粉水解实验和V.P.实验等初步鉴定为芽孢杆菌。该菌解钾效果随时间的延长菌浓度逐渐增加,但pH变化不明显。     

拟南芥H3K27甲基转移酶CLF响应环境温度和参与温度形态建成研究

目的 探索拟南芥H3K27甲基转移酶CURLY LEAF(CLF)在温度形态建成中的作用。方法 在不同温度条件(22和16 ℃)下,对拟南芥Arabidopsis野生型Col-0和突变体clf-29进行表型分析和转录组分析,筛选差异表达基因。结果 在不同温度条件下,clf-29表现出显著的表型差异,相较于22 ℃,16 ℃时clf-29和Col-0的表型差异更小。转录组分析发现CLF的缺失会导致大量基因表达差异,并将其分为4种类型(仅在Col-0显著上调、下调,仅在clf-29突变体显著上调、下调),包含96个温度响应基因。结论 拟南芥表观遗传调控因子CLF响应环境温度,并参与温度形态建成。