半滑舌鳎源创伤弧菌分离鉴定与药敏试验

为查明引起河北省昌黎县某海水养殖场半滑舌鳎患病及死亡的病原菌,本研究从半滑舌鳎肝、脾、腮、肠道分离纯化得到1株优势菌株,对其进行了理化鉴定和16S rDNA序列分析、致病性试验、毒力基因检测和中西药的药敏试验。结果显示,分离菌为创伤弧菌(V.vulnificus),序列比对显示与创伤弧菌同源性为100%,菌株命名为V.vulnificus QHD-1。动物回归试验证明该菌是半滑舌鳎的病原菌。小鼠半数致死量(LD_(50))为2.4×10~6 CFU/mL,携带毒力基因溶细胞素(vvhA)、细胞毒素(rtxA)、铁载体(viuB)、荚膜多糖(wza)等。西药药敏试验结果显示,分离菌株V.vulnificus QHD-1对氟苯尼考等7种药物敏感,对氧氟沙星等5种药物中敏;对头孢拉定、土霉素等6种药物耐药;中药药敏试验结果表明,苏木、诃子、乌梅、五倍子抑抑菌效果较好;最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)均为1.9～7.8 g/L;中药联合抑菌试验结果表明,黄芩和黄柏组合、五倍子和黄芩组合、乌梅和五倍子组合、艾叶和荆芥组合、板蓝根和黄芩组合对创伤弧菌表现协同作用。研究结果证明V.vulnificus QHD-1对鱼和小鼠具有较强的致病性,具有一定的公共卫生危害性;同时药敏试验结果为该地区鱼病的防治提供了依据。     

苏州大型超市小水产品中副溶血性弧菌的污染调查及耐药性分析

目的了解副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)在苏州市大型超市小水产品中的污染状况及耐药性,为建立副溶血性弧菌食物中毒预警系统提供科学依据。方法定期从苏州一大型超市抽取小水产品,根据GB/T4789.7-2008标准进行副溶血性弧菌的分离培养和鉴定,应用K-B法进行药敏实验。结果在144份样品中检出副溶血性弧菌56株,检出率38.9%。所有分离菌株对先锋必素、诺氟沙星和环丙沙星敏感;部分菌株对氨苄西林、阿莫西林、复方新诺明和头孢噻吩等具有较强的耐药性,耐药率分别为55.4%、42.9%、35.7%和32.1%;有9株菌株出现了多重耐药。结论苏州大型超市小水产品中副溶血性弧菌污染严重,应加强副溶血性弧菌食源性疾病预警,同时加强水产品抗生素使用的管理,防止其耐药菌株的传播。     

基于tlh基因病原副溶血弧菌LAMP检测方法的建立

为了研究副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)的快速分子生物学检测方法,试验以副溶血弧菌特异性tlh基因为分子靶标设计引物,利用环介导恒温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立病原副溶血弧菌的快速检测方法。结果表明:特异性检测仅副溶血弧菌基因组DNA可扩增出阶梯状条带,且反应产物中加入荧光染料SYBR GreenⅠ后呈现明显的绿色阳性反应;而鳗弧菌、河口弧菌、美人鱼弧菌、霍乱弧菌、哈氏弧菌、鱼肠道弧菌这6种对照病原菌均未出现任何扩增条带,且反应产物中加入荧光染料SYBR GreenⅠ后呈现橙色阴性反应;灵敏度检测的最低检测限为42 cfu/mL;对人工染菌的9种水产品检测均可获得阳性扩增结果;该方法检测时间从核酸抽提到结果分析仅需1 h左右,较传统方法操作简单、耗时短、不需昂贵仪器。说明该方法可用于针对副溶血弧菌的进出口检验检疫、食品安全检测及由该菌引起的水产动物疾病的诊断与分子流行病学调查。     

大黄芩鱼泡腾片对虾池病原菌的体外抗菌活性研究

为研究自制大黄芩鱼泡腾片对养虾池中分离菌株的体外抗菌活性，试验采用鉴别培养、生化反应、PCR方法鉴定菌株，并用微孔-平板法测定体外抑菌活性。结果显示：具有致病性的菌株有副溶血弧菌（Vibrio Parahemolyticus，V.p）、弗尼斯弧菌（Vibrio furnissii，V.f）和泛菌属的Pantoea eucrina（P.e）。大黄芩鱼泡腾片对V.p的MIC和MBC均为1 mg/mL|对V.f的MIC为4 mg/mL、MBC为8 mg/mL|对P.e的MIC和MBC均为4 mg/mL。由此表明，大黄芩鱼泡腾片对副溶血弧菌有较好的体外抗菌活性。 [关键词] 大黄芩鱼散|泡腾片|抗菌活性     

副溶血弧菌现场快速检测方法的建立及初步应用

为了实现副溶血弧菌的现场快速筛查,降低副溶血弧菌引起的食品安全问题,保障食品安全,试验利用副溶血弧菌tdh基因建立了可以快速检测水产品中副溶血弧菌的恒温环介导扩增(LAMP)方法,并通过添加钙黄绿素实现现场快速判定水产品中是否存在副溶血弧菌,同时利用建立的方法对螃蟹及贝类共40份水产品进行检测。结果表明:试验建立的方法具有良好的特异性,灵敏度可达7.92×10~(-3) ng/μL,实时浊度仪观察只有副溶血弧菌扩增出曲线,采用钙黄绿素法观察只有副溶血弧菌的扩增体系见到黄绿色。检测方法初步应用结果显示,从1例板蟹和1例蛤蜊中检测到副溶血弧菌核酸,证实2例水产品中存在副溶血弧菌。说明试验建立的方法可用于水产品中副溶血弧菌的现场检测。     

海豹副溶血性弧菌病的诊治

<正>副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)又称为副溶血弧菌,属于弧菌属,是一种常见的嗜盐性的革兰氏阴性菌病原菌。2012年8月,通辽某酒店引进4只海豹食用了遭该菌污染的食物,引发食物中毒,导致心脏衰竭死亡,经本院诊断为副溶血性弧菌感染,报告如下。1发病情况与临床症状该酒店引进4只海豹用作观赏,每天以鱼虾为食物。2012年8月,4只海豹均表现不同程度的食欲减退、腹部膨     

副溶血性弧菌和沙门氏菌检验的几点体会

副溶血性弧菌和沙门氏菌是进出口动物产品微生物检验的主要致病菌,进出口动物产品尤其水产品容易受这两种致病菌的污染。据有关资料介绍,在水产品中副溶血性弧菌和沙门氏菌的检出率约为20%左右,各国有关检验检疫技术法规对这两类致病菌的检验都有严格的要求。为了把好检验检疫关,应对进口国的技术壁垒,促进动物产品的出口贸易,我们在实验室检验工作中,     

从进口冷冻海鱼中分离出海鱼弧菌

海鱼弧菌(Vibrio damsella),又名少女(鱼)弧菌、闺女鱼弧菌或雀鲷鱼弧菌,该菌曾被命名为EF-S群,是已知的11种人类致病性弧菌之一。今年7月,我局细菌学检验室在进行中国水产联合总公司从泰国进口的冷冻黄花鱼检验时发现了该菌,现报道如下:     

绿海龟细菌性疾病流行病学调查

中国绿海龟(Chelonia mydas)繁育技术的进步促进了自然保护区内绿海龟种群规模的不断增加,细菌性病原感染成为威胁绿海龟(稚龟)繁育安全的首要问题。为深入了解中国绿海龟(稚龟)细菌性疾病流行情况,在2019—2021年对广东惠东海龟国家级自然保护区内的患病绿海龟(稚龟)进行了病原菌分离鉴定,采用16S rRNA分子鉴定结合细菌生化鉴定技术,共分离鉴定疑似病原株45株,涉及10个菌属,革兰氏染色显示均为革兰氏阴性细菌。弧菌属(Vibrio)细菌19株,占疑似病原菌的42.22%,其中溶藻弧菌(V.alginolyticus)7株,占分离弧菌的36.84%,属优势弧菌。对溶藻弧菌进行攻毒与病龟组织切片分析,结果显示,溶藻弧菌对中华草龟(Chinemys reevesii)具有较高的致病力,其LD₅₀为2.99×10⁶～2.59×10⁸cfu/mL;分离的溶藻弧菌可以引起中华草龟肠道、肝脏和脾脏组织病理损伤。进一步分析45株病原菌对水产养殖允许使用的6种抗生素的耐药性,结果显示分离菌株对盐酸多西环素、复方新诺明具有较高...     

水产品中霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌多重PCR检测方法的建立

霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌是引起全球范围的食源性疾病的重要病原菌,建立一种能准确鉴别这3种弧菌的方法具有重要意义。groEL基因是包括弧菌属在内的多种细菌检测的分子标记。本研究根据3种弧菌的groEL基因分别设计引物,经PCR扩增及反应条件的优化,建立一种能同时检测这3种弧菌的多重PCR方法。结果表明应用多重PCR技术对霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌能分别特异性地扩增出418、644、192 bp的目的片段。检测其他非目标供试菌时,不出现任何扩增条带。敏感性检测结果表明,对霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌最低检测限分别为102、102、103CFU/m L。人工染菌水产品检测结果显示,所建立的多重PCR方法能够有效检测出目的细菌,而未染菌组均为阴性。本文通过建立的多重PCR方法实现了对这3种弧菌的同时检测,具有快速、灵敏度高和特异性强等优点,对水产品中这3种弧菌的检测和流行病学调查具有重要意义。     

海产品中嗜盐菌的分离

嗜盐菌(Halophilic bacteria)能在含盐较浓(3—4％)的环境中生长,而在无盐环境中则不能生长。本菌现已在分类上划归弧菌属,其学名为副溶血性弧菌(Vibrio Parahemolyticus)。 本菌常存在于海水和海产品中。食用污染本菌的食品常引起中毒。潜伏期一般很     

进境的冻水产品中多次检出溶藻弧菌的报告

溶藻弧菌(Vibrio．alginolyticus)属弧菌科弧菌属，是人类致病菌之一，该菌分布全球，生活在海水、淡水及寄生于有关的水生动物中。溶藻弧菌是鱼类的一种条件性致病菌，多表现为继发感染。2003年底至2004年3月，厦门出入境检验检疫局技术中心从进境的冻墨鱼、冻鱿鱼、冻带鱼中检出溶藻弧菌6批次，     

浙江省舟山地区水产品及其养殖环境中霍乱弧菌污染状况调查

为了解浙江省舟山地区水产养殖环境及水产品中霍乱弧菌的污染状况,于2007年与2009年采集水样、泥样及多种水产品等176份样品。用TCBS选择性培养基从样品中分离弧菌,并应用基于编码胶原酶的霍乱弧菌看家基因(vcc)的特异性PCR方法检测霍乱弧菌。霍乱弧菌的总检出率为5.1%(9/176),其中2007年的检出率(5.5%)稍高于2009年(4.5%)。9株霍乱弧菌分离株中,5株来自环境,4株来自水产品。虾类产品中检出3株,而检出这3株霍乱弧菌的虾类产品均为南美白对虾。由此可见,水产品及其养殖加工环境存在安全隐患。     

致病性哈氏弧菌生物学及分子特征

从2尾病死的观赏用长鳍真鲨中分离到大量优势生长的细菌,致病性试验表明该菌对牙鲆及大菱鲆均有较强的致病性.在对分离菌进行了形态特征、理化特性、胞外酶及溶血素活性等生物学性状检验的同时,使用API-ID32E对分离菌做了进一步鉴定;同时,测定了该菌的16S rRNA和gyrB基因序列,分析了与相关细菌16S rRNA和gyrB基因序列的同源性,构建了系统发生树,比较了2种基因在相似细菌的检测和鉴别能力,结果gyrB基因用于细菌种间鉴定更具优越性.根据分离菌的表型特征及分子特征,判定分离菌为弧菌属(Vibrio Pacini 1854)的哈氏弧菌(Vibrio harveyi Johnson and Shunk 1936).胞外酶及溶血活性检测表明,分离菌均能产生淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、DNA酶和卵磷脂酶,在含7%家兔脱纤血液营养琼脂培养基上呈β型溶血.以哈氏弧菌溶血素基因的保守区段设计的特异性引物,能够扩增出特异性片段.     

禽流感疫苗的研究进展

禽流感(Avian Influenza,AI)是由禽流感病毒(Avian In-fluenza Virus,AI V)引起的一种禽类传染病。根据AI V对易感鸡致病性的差异,可将AI V分为高致病性AI V(HPAI V)和低致病性AI V(LPAI V)。HPAI V引起的禽类感染,死亡率极高,可对养禽业造成毁灭性打击。据资料记载,该病1878年在意大利的鸡群中首次暴发,其后在世界各地均有暴发流行的报道。20世纪50年代至90年代,全球共暴发19次高致病性禽流感,病毒亚型主要包括H5、H6、H7和H9等〔1〕。1992年我国证实鸡群中有禽流感流行〔2〕,1997年我国香港地区暴发禽流感,损失约达8000…     

基于DNA环介导等温扩增技术快速检测溶藻弧菌的研究

溶藻弧菌是引起海产鱼类、虾、贝等细菌性疾病的主要病原之一,严重危害水产养殖业的发展,建立快速、准确的检测方法对防控溶藻弧菌及保障水产养殖安全具有重要意义。本研究引入环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术,以溶藻弧菌胶原酶基因为靶基因,建立了溶藻弧菌LAMP快速检测方法,45~60 min内即可完成检测。试验结果显示,该LAMP方法可特异性检测溶藻弧菌,且灵敏度高,对纯培养溶藻弧菌的检测灵敏度约10 CFU/mL,对污染水产品中溶藻弧菌的检测灵敏度为19 CFU/mL。本研究建立的溶藻弧菌LAMP检测方法操作简便、检测快速,具有良好的实用性。     

检测创伤弧菌两种毒力基因的环介导等温扩增检测方法的建立

为建立快速检测致病性创伤弧菌两种毒素的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,分别以创伤弧菌溶血素A基因(hemolysin gene A,HA)和多重毒素(repeats in toxin,RTX)毒力基因的保守序列作为靶序列设计内、外引物。通过肉眼观察白色沉淀初步判断检测结果,通过琼脂糖电泳最终确定检测结果。LAMP检测创伤弧菌的两种基因的灵敏度都达到10 CFU/mL。特异性结果表明致病性创伤弧菌的结果为阳性,而其他几种常见弧菌和食源菌检测结果为阴性。在人工模拟样品检测中,LAMP结果显示,采用水煮法提取DNA,从样品处理到报告结果耗时1.5 h,鱼肉中创伤弧菌的检出限为1×10~2 CFU/g(RTX)和1×10~4 CFU/g(HA);采用同样方法提取DNA进行普通PCR,其检出限为1×10~3 CFU/g(RTX)和1×10~4 CFU/g(HA),耗时4 h。结果表明,本研究建立的LAMP方法检测创伤弧菌两种毒力基因时具有灵敏度高、特异性强、方法简便等优点,适用于食品和养殖业中的现场快速检测。     

水生动物嗜水气单胞菌新型疫苗研究进展

<正>嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)属于弧菌科、气单胞菌属,自然界中广泛分布,可引起鱼类、两栖类及爬行类动物暴发出血性败血症,并且对人类也有致病性,是一种典型的人-兽-鱼共患的致病菌。Ah是鱼类发病的主要病原,对水产养殖造成巨大的经济损失,过去对Ah的防治主要以抗生素为主,随着国内外的学者对Ah的研究逐渐深     

致病性副溶血弧菌三重PCR检测方法的建立和评价

根据副溶血弧菌种特异性基因(tox R)、耐热直接溶血素基因(tdh)和相对耐热直接溶血素基因(trh)为靶基因分别设计引物,进行PCR扩增及反应条件的优化,建立了检测含有溶血素毒力基因的致病性副溶血弧菌的多重PCR方法。3对引物能分别特异性地扩增出368、269、486 bp的目的片段。副溶血弧菌均能扩增出tox R基因,不含溶血素基因的菌株(tdh-/trh-)仅扩增出1条目的片段,而含不同溶血素基因的致病性副溶血弧菌则分别扩增出2条(tdh+/trh-或tdh-/trh+)和3条(tdh+/trh+)特异性条带。检测其他非副溶血弧菌的供试菌,则不出现任何扩增条带。人工模拟样品检测结果显示对致病性副溶血弧菌的最低检测浓度为103CFU/m L。结果表明该多重PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏性,对检测致病性副溶血弧菌有重要意义。     

大黄鱼弧菌病综合防治对策的初步研究

在5月下旬用哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)灭活菌苗对大黄鱼(Pseudosciaena crocea)幼鱼进行浸泡免疫,7月至8月高温季节投喂添加防病药物或者V.harveyi灭活菌苗的配合饲料,进行了综合防病试验。试验结果表明,V.harveyi灭活菌苗浸泡免疫接种可以有效地预防V.harveyi对受免大黄鱼的感染,但是,受免鱼对副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)的感染则没有显著的保护;高温季节投喂添加药物的配合饲料能够有效地降低大黄鱼的死亡率,而将药物添加在鱼糜中后的投喂方式则不能获得明显防病效果;对受免鱼口服灭活菌苗后在56 d内仍然可以观察到加强免疫效果。