绒山羊精液冷冻保存技术的研究

为了使绒山羊精液得到长期保存,充分发挥和提高优良种公羊的利用率,本实验对绒山羊精液冷冻保存技术进行了研究,比较了4种自行研制的保存稀释液的冷冻效果。结果表明:采用Ⅰ液(葡萄糖-卵黄-柠檬酸钠)冷冻保存绒山羊精液,解冻后精子活率(0.508±0.010)极显著高于Ⅱ液(葡萄糖-卵黄-乳糖-柠檬酸钠)(0.275±0.008)、Ⅲ液(葡萄糖-卵黄-蔗糖-柠檬酸钠)(0.354±0.012)和IV液(葡萄糖-卵黄-蔗糖-乳糖-柠檬酸钠)(0.319±0.006)(P<0.01);Ⅲ液极显著高于Ⅱ液(P<0.01)和显著高于Ⅳ液(P<0.05)。解冻后Ⅰ液的精子顶体完整率(59.4%±0.5%)极显著高于Ⅱ液(47.1%±0.8%)、Ⅲ液(52.4%±0.6%)和IV液(51.3%±0.5%)(P<0.01)。精液解冻后在室温(23±2)℃下避光培养,Ⅰ液中精子活率在5h内能够保持0.30以上,Ⅱ、Ⅲ液和Ⅳ液精子活率维持在0.3不到2h。     

小尾寒羊精液保存技术研究

为了充分发挥种公羊的生产潜力,快速扩繁优良群体,本实验以取材方便的小尾寒羊为实验动物,对其精液采用室温、低温和细管法冷冻3种保存方法进行了研究。结果表明:在低温(4±0.5)℃条件下稀释保存小尾寒羊精子,显著优于室温(23±2)℃条件下的保存效果。其中采用II液低温保存绵羊精子的时间和活率(168 h,0.35)显著优于III液(72 h,0.30)I、V液(48 h,0.35)和I液(18 h,0.42)。而采用III液冷冻保存绵羊精液,其解冻后活率(0.532±0.004)极显著高于IV液(0.470±0.003)I、液(0.445±0.004)和II液(0.432±0.012)3种冷冻稀释液(P<0.01)。4种冷冻稀释液冷冻解冻后的精子,均能在室温下6 h内保持0.35以上的活率。     

猪精液细管法冷冻保存技术的研究

为研制更为简易、高效的冷冻稀释液配方及冷冻程序,充分发挥优良种公猪的生产潜力,本实验采用细管法对种公猪精液冷冻保存技术进行了研究,比较了4种基础液配方稀释液冷冻效果,基础液I:葡萄糖、蔗糖、柠檬酸钠;基础液II:葡萄糖、蔗糖;基础液III:葡萄糖、乳糖、柠檬酸钠;基础液IV:葡萄糖、乳糖。结果表明:采用一步法稀释和IV液冷冻保存猪精液,其解冻后精子活率(0.501)极显著(P<0.01)高于I液(0.359)和III液(0.359),显著(P<0.05)高于II液(0.476),II液显著(P<0.05)高于I液和III液;解冻后IV液的精子顶体完整率(26.9%)显著(P<0.05)高于I液(22.4%)、II液(24.2%)和III液(22.5%),IV液冷冻解冻后精液的精子活率,在室温(23±2)℃下4h内能够保持0.30以上。     

几种糖类对水牛精子冻后效果的观察和比较

本研究比较了几种糖类对水牛精液冷冻保存的效果,以筛选出适于水牛精液冷冻保存的糖类保护剂。在水牛精液冷冻稀释液中分别添加半乳糖、果糖、葡萄糖和蔗糖,观察并比较它们对水牛精液冷冻保存的效果。试验结果表明:在原Tris-柠檬酸钠-鸡卵黄-甘油基础稀释液中,加入果糖能较显著提高水牛精子冻后的活力和顶体完整率(P0.05),加入半乳糖、蔗糖与葡萄糖没有显著差异(P0.05)。     

陕北白绒山羊精液冷冻稀释液配方优化

为筛选陕北白绒山羊精液冷冻保存稀释液中最适的甘油及卵黄浓度,试验以三羟甲基氨基甲烷(Tris)6.057 0 g,蔗糖5.134 6 g,果糖1.500 0 g,柠檬酸钠3.318 6 g,青霉素10万IU,双蒸水200 m L配制成基础液,采用双因素正交试验研究不同浓度甘油、卵黄对精液冷冻保存的影响;采用一步稀释法冷冻保存陕北白绒山羊精液,复苏后检测活率、畸形率等确定精液冷冻稀释液最佳配方。结果表明:最佳冷冻稀释液配方为基础液80.5%+甘油6%+卵黄13.5%,精液冷冻、复苏后精子活率达到(37.2±0.5)%,精子畸形率为(11.2±0.5)%,质膜完整率为(64.2±0.5)%,均优于其他组,冷冻效果达到最佳,是保存山羊精液的冷冻稀释液最佳配方。     

陶赛特羊精液品质和冷冻精液保存稀释液的研究

对两只1～2岁新西兰陶赛特羊的精液品质、冷冻精液保存稀释液和制作冻精技术进行了研究.结果表明:[1]引进陶赛特羊的精子密度、活率、畸形率、冻精的平均菌落数、射精量、pH值、颜色均属正常范围,但个体间有差异.[2]在果糖-卵黄-柠檬酸-甘油(一号)、葡萄糖-卵黄-柠檬酸钠-甘油(二号)以及果糖-卵黄-柠檬酸钠-甘油(三号)三种稀释液中三号稀释液的冷冻保存效果极显著地(P<0.01)优于一号和二号.     

不同稀释液中添加十二烷基硫酸钠对吐鲁番黑羊精液冷冻保存的影响

为改善吐鲁番黑羊精液的冷冻保存效果,提高精液冻后的精子活率,本实验在3种精液冷冻稀释液中添加不同浓度(0、1%、2%)的十二烷基硫酸钠(SDS),TrⅠs-葡萄糖-柠檬酸钠为Ⅰ液,蔗糖-葡糖糖-柠檬酸钠为Ⅱ液,OptⅠdyl稀释液做对照为Ⅲ液。熏蒸冷冻后解冻,用精子分析系统(CASA)和流式细胞仪检测冷冻效果。结果表明:Ⅰ液1%SDS组精子活率最高(65.4%),与Ⅰ液2%SDS组精子活率没有差异,高于其他7组(P<0.05);Ⅲ液1%SDS组畸形率(9.4%)低于Ⅱ液0%SDS组、Ⅱ液2%SDS组和Ⅲ液2%SDS组(P<0.05);Ⅰ液1%SDS组直线运动速率(51.4μm/s)高于Ⅰ液0%SDS组、Ⅱ液2%SDS组和Ⅲ液0%SDS组(P<0.05);Ⅰ液1%SDS组和Ⅲ液1%SDS组的质膜完整率高于Ⅰ液2%SDS组和Ⅱ液1%SDS组(P<0.05),且Ⅰ液1%SDS组最高;Ⅰ液1%SDS组的顶体完整活精子比率高于Ⅱ液1%SDS组(P<0.05),各组的活精子顶体完整率无显著差异;Ⅰ液1%SDS组高线粒体膜电位比率(43.0%)高于Ⅱ液1%SDS组(P<0.05)。因此,采用添加1%SDS的Tris-葡萄糖-柠檬酸钠稀释液配方显著提高了吐鲁番黑羊精液冷冻保存效果。     

近交五指山小型猪精液冷冻保存技术的研究

用液氮熏蒸法在氟板上制作冻精颗粒,以解冻后的精子活率、活力和质膜完整性为判定指标,比较4种冷冻稀释液及不同冷冻-解冻程序对五指山小型猪精液冷冻的效果。结果表明:①Ⅳ号冷冻稀释液冷冻解冻后精子的活率(0.610±0.036)、活力(0.427±0.025)和质膜完整性(0.503±0.015)均显著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ号冷冻稀释液(P<0.05)。②实验中精液在4℃冰箱中平衡降温2 h的精液精子活力、质膜完整性均好于在17℃平衡3 h再放入4℃冰箱中平衡2 h的解冻效果,而且精子活率差异显著(P<0.05)。③湿解法的效果优于干解法。     

不同稀释液对杜泊羊精液液态保存效果观察

为了研究不同稀释液对杜泊羊精液液态保存效果,试验选取同质精液分别用常温保存稀释液(4种)和低温保存稀释液(3种)按1∶3的比例进行稀释保存(每个处理3个重复),检测精液品质、精子存活时间和存活指数。结果表明:常温保存稀释液葡萄糖-蔗糖-柠檬酸钠较其他3种稀释液能极显著提高精子的存活时间及存活指数(P0.01);低温保存稀释液果糖-柠檬酸钠-卵黄较其他2种稀释液能极显著提高精子的存活时间及存活指数(P0.01)。说明葡萄糖-蔗糖-柠檬酸钠(常温)和果糖-柠檬酸钠-卵黄(低温)这两种稀释液适宜在养羊生产中推广应用。     

猪精液冷冻技术的研究

从稀释液、解冻液、解冻速率方面研究了猪精液冷冻保存的效果。结果表明：在八种稀释液中,用Ⅰ号稀释液制作的冷冻精液解冻后精子活率（33&#177;1．2）％优于其它组（P〈0．05）;Ⅴ号解冻液解冻后精子活率（34&#177;2．4）％极显著高于Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ号解冻液（P〈0．01）,Ⅴ号解冻液解冻后精子存活时间506．6&#177;40．4h,极显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号解冻液（P〈0．01）;以27．5℃／s的速率解冻,解冻后精子各项指标均为最高值。     

五种糖对马精子低温保存及冷冻效果的影响

为了研究单独或组合添加葡萄糖、果糖、乳糖、棉籽糖及海藻糖对马精子低温和冷冻保存效果的影响,试验选取4匹6~12岁公马进行精液收集,经离心浓缩处理后置于含有不同糖的低温或冷冻稀释液中保存,低温保存1,24,48,72,96小时时检测活精子比例(total motility,TM)和直线运动精子比例(progressive motility,PM),评价糖对精子低温保存效果的影响,冷冻后精液于37℃水浴解冻后检测TM、PM、质膜完整率及高线粒体膜电势评价不同糖对精子冷冻效果的影响。结果表明:单独添加乳糖和棉籽糖组低温保存24 h后精液TM和PM明显低于葡萄糖、果糖及海藻糖组,葡萄糖、乳糖分别与其他几种糖两两组合低温保存1,24,48,72,96小时时精液TM和PM差异不显著,单独添加棉籽糖组精子冻融后TM和PM显著低于果糖和海藻糖组(P0.05),但精子质膜完整率和高线粒体膜电势显著高于其他各组(P0.05),单独添加葡萄糖、果糖、海藻糖及乳糖组精子冻融后TM、PM及高线粒体膜电势均无显著差异(P0.05),添加果糖组冻融后精子质膜完整性显著低于葡萄糖组(P0.05)。不同糖组合精子冻融后,乳糖+葡萄糖+海藻糖组精子质膜完整率显著高于乳糖+果糖组、乳糖+海藻糖组、乳糖+葡萄糖+果糖组、乳糖+果糖+海藻糖组(P0.05),乳糖+葡萄糖+果糖组精子高线粒体膜电势显著高于乳糖+果糖组(P0.05),与其他组相比差异不显著(P0.05)。仅含棉籽糖、乳糖或棉籽糖+乳糖的稀释液不适合于马精液低温保存,不同糖组合并没有获得比经典葡萄糖+乳糖更好的低温和冷冻保存效果。     

猪精液冷冻技术的研究

以解冻后的精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率和人工授精结果为判定指标 ,比较了几种冷冻稀释液、解冻液及冷冻 -解冻程序对猪精液冷冻的效果 ,并对所筛选出的最佳稀释液和冷冻程序做了改进。结果如下 :(1) 号稀释液冷冻解冻后的精子活力 (32 .4± 7.3) %、活率 (4 2 .2± 3.2 ) %、顶体完整率 (6 2 .3± 0 .8) %和弯尾率 (4 2 .6± 7.5 ) %均显著高于 、 、 号稀释液 (P<0 .0 5 )。 (2 )在 号稀释液中添加 0 .5 %、1%和 2 %的 O.E.P(氨基 -钠 -十二烷硫酸酯 )使精子活率提高 5 %、弯尾率提高 6 %、顶体完整率提高近 10 % ,与对照组相比差异显著 (P<0 .0 5 )。 (3)应用改进的稀释液 ( 液加 1% O.E.P) ,细管法比颗粒法冷冻精子活率提高近 7个百分点 ,活力提高 6个百分点 (P<0 .0 5 )。(4 )室温预平衡 4h的精子活力和活率都比对照组 (0 h)有显著提高 (P<0 .0 5 ) ,而预平衡 2、6 h的精子活力和活率与对照组差异不显著 (P>0 .0 5 )。 (5 ) 号解冻液解冻后精子活力 (4 2 .9± 2 .6 ) %显著高于 、 、 号解冻液 (P<0 .0 5 )。 (6 )用 5 0℃水浴解冻精子的活力 (4 6 .3± 2 .6 ) %显著高于 39℃ (4 2 .9± 2 .6 ) %和 70℃水浴 (4 1.1± 5 .7) %解冻的精子活力 (P<0 .0 5 )。 (7)精清和 号解冻液     

提高早胜公牛冷冻精液品质的因素分析

为提高早胜牛冷冻精液的品质,研究了稀释液中添加不同浓度的海藻糖,解冻温度、解冻时间和生产中常见的解冻后保存运输方法等对精液品质的影响。结果表明:在果糖-柠檬酸钠-卵黄-甘油稀释液中,分别添加不同浓度的海藻糖(0.000、0.025、0.050、0.075和0.100 mol/L)对早胜牛精液进行稀释,各试验组均对冻精的精子活率、畸形率、顶体质膜完整率和精子存活时间产生不同程度的改善,其中,以0.050 mol/L的效果最好(P<0.01)。75℃快速解冻精子品质显著高于另外两种解冻方法(38℃、12℃解冻)(P<0.05),但仅适用于短时间保存。而38℃解冻后保存于0～5℃下的精液品质符合国家输精标准的时间较长。     

羊精液稀释保存液的筛选

试验旨在探讨不同稀释保存液对常温下羊精子活率及存活时间的影响。选取哺乳动物8种常用精液稀释液配方,检测精液稀释后精子活率变化,分析精子存活时间及生存指数。结果表明:不同稀释液对羊精子活率的影响均有差异,精子活率会随着保存时间的增加而降低;同种稀释液在4℃条件下对精子的保存效果更好,与25℃条件下相比,各项指标均有极显著的延长和提高(P0.01);B组液(无水葡萄糖+柠檬酸钠+新鲜卵黄)精子总存活时间、有效存活时间和生存指数在4℃条件下分别为(108.2±9.6)h,(61.5±7.4)h和(63.5±5.8)h,与其他各组相比差异显著(P0.05),可应用于生产。     

五种糖类对犬精液冷冻保存效果的研究

选取8只身体健康、性欲旺盛的比格公犬,采集其精液,对鲜精进行质量检测,主要包括颜色、射精量、精子活率、活力和pH。选取精子活率达到70%以上犬精液用于后续精液冷冻试验。分别将含有葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖和海藻糖的精液稀释液与精液按照1∶2的比例进行稀释。经冷冻解冻后,进行活率、活力、质膜完整性和顶体完整性的精子质量检测。通过对新鲜精液进行品质检测,结果显示5只合格用犬的平均射精量为2.85 mL,密度为2.01×10~8个/mL,pH为6.56。含有果糖的冷冻稀释液中精子活率和活力最高,分别达59.90%和54.00%;其次是添加葡萄糖和乳糖的稀释液中活率较高,分别为59.21%和56.73%,且两组稀释液中精子解冻后活力均为52.00%。进一步评估精子解冻后质膜完整率,结果显示葡萄糖和果糖组显著高于其他组,分别达48.73%和49.52%;而蔗糖添加组精子质膜完整率最低,为42.21%。稀释液中添加果糖的精子解冻后顶体完整率显著高于其他组,而添加蔗糖组顶体完整率最低。在比格犬的精液冷冻保存中,添加果糖的冷冻稀释液能显著提高精子的活率和活力,从而达到提高冻精质量的效果。     

不同家禽卵黄对德国牧羊犬精液冷冻的影响

为了探索不同家禽卵黄在德国牧羊犬精液冷冻中的应用效果,分别在精液冷冻稀释液中添加不同家禽(鸽、鸡、鸭、鹅和鹌鹑)和不同浓度(10%、15%、20%、25%和30%)的卵黄,并分别对冷冻前和解冻后的精子活率、顶体完整率和畸形率进行比较分析。结果:在德国牧羊犬精液冷冻稀释液中加入相同浓度的5种不同家禽卵黄,家鸽组冻后活率、顶体完整率和畸形率分别为(52.0±2.1)%、(54.3±3.7)%和(27.7±1.8)%,对德国牧羊犬精液冷冻有最佳的保护效果,其最佳浓度为20%。因此,鸽卵黄可替代鸡卵黄,作为冷冻稀释液的组成成分,用于德国牧羊犬的精液冷冻。     

保存温度和不同种类稀释液对猪精液品质的影响

猪精液在室温保存时,含庆大霉素的稀释液保存效果优于含青、链霉素的稀释液,两种稀释液在保存72h时,精子活率、顶体完整率、GOT和LDH活性以及存活指数差异极显著(P<0.01).低温保存时,含蜂蜜和卵黄的稀释液对防精子冷刺激、维持精子活率的效果比含葡萄糖、奶粉的稀释液理想.在冷冻保存条件下,以含2%甘油的稀释液保存效果最佳.液态保存(室温、低温)的猪精液,LDH活性随精子活率下降而下降;pH值则都呈先上升后下降的变化趋势.室温保存主要是引起精子顶体脊膨大和保存后期的顶体前端膨大;低温保存主要引起顶体前部膨大和保存后期的少数顶体脱落;冷冻保存主要是造成顶体的膨大程度加大和顶体脱落.3种保存条件都造成精子线粒体透性增强.液态保存和冷冻保存精液的精清GOT活性与顶体完整率无显著相关性(P>0.05).     

多浪羊细管冷冻精液制作技术的研究

为保存和利用优秀地方品种多浪羊的遗传资源,试验在多浪羊原产地进行了细管冻精制作试验.用采集的多浪羊种公羊精液,比较5种冻精保存液配方的细管冻精冷冻效果,测定解冻后精子活力.结果表明:4.83%乳糖保存液解冻后精液的活率平均为36% ,优于其它4种保存液,且差异极显著(P<0.01),解冻后精子的畸形率也均低于其它4种稀释液,差异极显著(P<0.01).表明4.83%的乳糖保存液配方是理想的绵羊细管冻精稀释液.     

无角道赛特绵羊精液低温冷冻与保存技术的研究

采用不同成分的冷冻稀释液对无角道赛特种公羊鲜精进行了低温冷冻与保存的实验。结果显示:葡萄糖3.7g+Tris0.02g+柠檬酸钠3.7g+乙二醇5ml+EDTA0.3g+PS20万IU+蒸馏水100ml作为稀释液冷冻并解冻后活力效果最好,解冻后活力为40%,顶体完整率54%;低温冷冻精液在对解冻温度进行了对比试验,42℃解冻活力效果显著(P0.01);对稀释液比例进行试验对比,鲜精与基础液1∶2比例解冻精子活力极显著于1∶1(P0.01)。     

犬精液低温保存稀释液的研究

试验对苏联红犬精液的低温保存稀释液进行了研究。结果表明,犬精液低温保存的稀释液以Tris-葡萄糖稀释液(Tris3.04%,柠檬酸1.7%,葡萄糖1.25%,卵黄20%)为最佳,在4℃保存3 d后,犬精液的精子活率仍可达0.662 5±0.058 2,精子活率>0.1的存活达5.750 0 d±0.462 9 d。在Tris-葡萄糖稀释液中加入0.5%的甘氨酸或1%的牛血清白蛋白并不能明显提高犬精子的低温保存效果,反而添加BSA后,精子活率在0.1以上的存活时间出现明显缩短(P<0.01)。