牛胚胎玻璃化冷冻保存技术及国内近期研究进展

本文就胚胎玻璃化冷冻保存的原理、冷冻保护剂的作用和冷冻方法及近期国内牛胚胎玻璃化冷冻的研究进展情况进行了详细的综述.     

牛胚胎玻璃化冷冻保存研究进展

1 玻璃化冷冻的基本原理 所谓的玻璃化冷冻就是在完全的玻璃化状态下冷冻保存细胞、组织或器官.为了在一定冷冻速度下形成玻璃化,需要使用高浓度的可渗透性低温保护剂. 玻璃化冷冻法是根据物理学原理,将高浓度的低温保护剂(约7 mol/L)在超低温环境下凝固,形成无规则的玻璃化固体,这种固态物质能保持液态时的正常分子与离子分布,因而在细胞内发生玻璃化起到保护作用.这种方法不仅大大简化了冷冻过程,而且减少了由于细胞冰晶形成所引起的一系列物理及化学损伤.此外,这种方法采用迅速通过临界温度区,从而减轻了一些动物胚胎冷冻中常见的冻伤现象.     

哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存的研究进展

玻璃化(vitrification)是指利用物理学原理将高浓度的抗冻保护剂急速降温后，由液态转化为外形类似玻璃状的稳定而透明的非晶体化固体状态的过程。玻璃化的固体保留了液体正常的分子和离子分布，可以视为一种无序黏稠的超冷液体，因而避免了细胞内形成冰晶而对细胞产生伤害。1985年，Rall等率先将玻璃化冷冻方法用于小鼠胚胎的冷冻保存，推动了该方法在哺乳动物胚胎冷冻保存的方面的应用。之后，玻璃化冷冻保存不断改进，     

牛IVP胚胎玻璃化冷冻技术的研究

作者比较了乙二醇传统冷冻和OPS玻璃化冷冻牛IVP胚胎的效果,目的是改善其冷冻效果,提高IVP胚胎的移植妊娠率。结果表明,玻璃化冷冻后的存活率(D7-71)明显高于D7-71L(P<0.01),D7-72组与D7-71L组(传统冷冻方法)的存活率基本一致(P>0.05)。     

牛胚胎玻璃化冷冻技术研究进展

胚胎冷冻保存是保存和繁殖遗传优势动物的主要工具,是胚胎移植产业的重要组成部分。目前广泛使用的冷冻方法主要有慢速冷冻和玻璃化冷冻2种。由于玻璃化冷冻具有成本低、效率高、操作简单等优点,玻璃化冷冻法越来越受到人们的重视。经过多年研究,研究人员已经在玻璃化冷冻方法、冷冻液等方面取得了大量进展,玻璃化冷冻法已经开始进入商业化应用。本文综述了牛胚胎冷冻保存技术的研究进展,旨在为相关从业人员提供一定借鉴和参考。     

动物胚胎冷冻保存技术研究进展

胚胎冷冻保存一般指0~-80℃的温度下保存胚胎,而超低温冷冻保存则是在极低的温度(液氮-196℃、液氦-269℃)下保存动物胚胎。处于超低温下的胚胎,其新陈代谢几乎完全暂时停止,因而可以达到长期保存的目的。朱等(1998)对小鼠扩张囊胚在液氮中冷冻保存1h、1年和2年,解冻后的囊胚恢     

早期胚胎玻璃化冷冻保存技术研究进展

本综述阐明了胚胎玻璃化冷冻原理，比较了玻璃化冷冻技术各种方法及其优缺点，分析了胚胎玻璃化冷冻的影响因素，展望了玻璃化冷冻技术的应用前景。     

胚胎玻璃化冷冻保存技术及其在牛和猪应用的研究进展

1　前言胚胎冷冻保存是胚胎移植技术真正走向商业化应用的关键环节。自从英国学者Ｗｈｉｔ ｔｉｎｇｈａｍ等人在 1 972年首次报道利用慢速冷冻法保存小鼠胚胎获得成功以来 ,胚胎冷冻保存技术即受到人们的广泛关注 ,并投入了大量的人力和物力进行研究开发利用。随后 ,牛、兔、绵羊、大鼠、山羊、猪和人等的胚胎冷冻保存研究也相继获得成功。冷冻方法也在不断改进。1 977年 ,Ｗｉｌｌａｄｓｅｎ发明了快速冷冻方法 ,将原先需要大半天的冷冻过程缩短在 2ｈ以内 ;超快速冷冻技术的出现 ,又使冷冻过程缩短在 1ｈ之内。 1 985年Ｒａｌｌ玻璃化冷…     

转基因兔胚胎玻璃化冷冻保存的研究

在２５℃条件下,将兔体外受精精子载体转基因兔桑椹胚置于含有４０％乙二醇、１８％Ｆｉｃｏｌ、０．３ｍｏｌ蔗糖的ｍＰＢＳ溶液（ＥＦＳ４０）中平衡２分钟,然后直接投入液氮,成功地进行了玻璃化冷冻保存。解冻后桑椹胚发育至囊胚和孵化囊胚的比例分别为６５．８１％和３９．２４％,与未经冷冻的鲜胚发育比例（７１．０５％和４３．４２％）相比,没有明显的差异。７８枚经玻璃化冷冻和解冻的桑椹胚移植给５只受体,其中２只妊娠,共产下８只活仔兔。     

奶牛冷冻胚胎分割移植效果探讨

分割加拿大奶牛冷冻胚胎 ,借荷斯坦牛受体移植。共分割冷冻胚胎 1 5枚 ,分割为裸半胚 30个 ,分割成功率 1 0 0 %。移植受体 2 7头 (其中移植一对半胚的受体 3头 ) ,移植妊娠 1 4头 ,受体移植妊娠率51 .85% ,产犊 1 4头 ,半胚产犊率为 4 6 .6 7% ,按未分割的整胚计算 ,产犊率达到 93.34 % ,比整胚移植产犊率还提高 1 8.34个百分点。移植半胚生产 1头犊牛需胚胎 1 .0 7枚 ,比整胚减少 0 .2 6枚 ,降低成本1 51 0 .6 0元。说明胚胎分割是降低成本 ,扩大卵源 ,增加良种牛数量的有效方法。     

绒山羊超数排卵和胚胎冷冻技术的初步研究

内蒙古绒山羊是我国珍贵的畜种资源,其产绒量及羊绒品质居世界领先水平。根据内蒙古白绒山羊地方标准,“八·五”期间内蒙古自治区已培育出产绒量５００ｇ以上达标母羊３２２６只,并形成一个产绒量达８００ｇ以上的育种核心群,培育出产绒量８００ｇ以上的达标公羊３７...     

胚胎因素对奶牛体外受精胚胎解冻孵化影响的试验研究

对胚胎因素影响奶牛体外受精胚胎培养效果进行了研究。结果发现：在胚胎因素中，胚胎类型（冻胚和鲜胚）与胚胎发育阶段对胚胎培养效果没有显著影响（P〉0．05）；冷冻胚胎解冻后停留时间对胚胎培养效果影响显著（P〈0．01）；冷冻胚胎解冻后胚胎等级对胚胎培养效果影响显著（P〈0．05），解冻后A级胚胎存活率（80％，128／160）、囊胚孵化率（58．75％，94／160）显著高于B级胚胎存活率（59．38％，95／160）和囊胚孵化率（37．5％，60／160）（P〈0．05）；解冻水浴温度（20℃、30℃）对培养效果有极显著影响（P〈0．01）。     

几种冷冻保存方法对奶牛胚胎保护效果的研究

选取奶牛体内生产胚胎93枚(其中囊胚54枚,桑椹胚39枚),比较研究了不同冷冻方法和保护剂对其的保护效果。结果表明:乙二醇处理组对奶牛囊胚的保护效果优于One-Step-Freezing组、甘油组和玻璃化组(回收率、形体正常率和继续发育率四组分别为91.0%、82.0%、66.6%;91.0%、91.0%、88.8%;86.6%、85.0%、83.3%和80.0%、66.7%、50.0%),其中继续发育率在乙二醇组、甘油组和玻璃化组间差异显著(P<0.05);而桑椹胚的各项指标以乙二醇处理组最高,玻璃化组最低,但各组间差异不显著。结果说明乙二醇处理组对胚胎的保护效果优于其它几个处理组。     

几种冷冻保存方法对奶牛胚胎保护效果的研究

选取奶牛体内生产胚胎93枚（其中囊胚54枚,桑椹胚39枚）,比较研究了不同冷冻方法和保护剂对其的保护效果.结果表明：乙二醇处理组对奶牛囊胚的保护效果优于One-Step-Freezing组、甘油组和玻璃化组（回收率、形体正常率和继续发育率四组分别为91.0%、82.0%、66.6%;91.0%、91.0%、88.8%;86.6%、85.0%、83.3%和80.0%、66.7%、50.0%）,其中继续发育率在乙二醇组、甘油组和玻璃化组间差异显著（P＜0.05）;而桑椹胚的各项指标以乙二醇处理组最高,玻璃化组最低,但各组间差异不显著.结果说明乙二醇处理组对胚胎的保护效果优于其它几个处理组.     

超低温冷冻对奶牛胚胎超微结构的影响

奶牛冷冻胚胎移植成活率较鲜胚移植明显低.为明确低温冷冻造成胚胎损伤的机理、为冷冻保存方法的进一步改进提供理论依据,利用透射电子显微镜观察了奶牛胚胎常规冷冻和玻璃化冷冻前后的超微结构变化.结果表明,奶牛鲜胚细胞分为两种类型:一种位于内细胞团(ICM)外层,胞质电子致密度低而着色浅,并含有大量的线粒体和内质网;另一种位于ICM中心区域,着色较深,溶酶体的数量多,其余细胞较较少.常规冷冻后,透明带和卵周隙明显变宽,细胞间接触变得松散.囊胚中含有退化的胞核和凋亡小体,内质网变大、变粗,脂滴明显增多.玻璃化冷冻后,ICM细胞的结构发生破坏,部分细胞发生崩解,细胞碎片大量分布于细胞间隙和卵周隙中,并可见大量的脂滴,凋亡细胞和凋亡小体增多.冷冻过程对早期胚胎细胞器的损伤可能是移植后成活率下降的主要原因.     

波尔山羊超数排卵和胚胎冷冻技术的初步研究

在山东省东营市正农高科技农业园养殖场进行了波尔山羊超数排卵、胚胎冷冻试验。结果显示:放CIDR的供体与自然发情相比较,其超排效果无明显差异(P>0.05),说明CIDR是一种行之有效的超排方法;在常规胚胎冷冻过程中,鲜胚质量是影响冻胚成活率的主要因素;采用蔗糖解冻冷冻胚胎时,其浓度0.5mol/L和1.0mol/L均获得较高的解冻胚胎成活率。     

浅谈胚胎移植受体牛的选择标准

牛胚胎移植技术对牛业的发展具有重要意义。通过胚胎移植技术的大范围应用，提高了良种牛覆盖率，加快了牛育种进程。胚胎移植技术同分子标记辅助选择、基因诊断、体细胞克隆等技术相结合，将发挥更大作用。胚胎移植效果受胚胎质量、移植技术水平和受体牛的状况三因素制约。因此，受体牛的选择对胚胎移植效率具有重要影响。本文将就受体牛的选择标准做一简单综述。     

胚胎移植受体牛同期发情控制的研究

近年来,对牛同期发情技术的研究很多,且取得了较好的同期发情效果[1]。本试验针对高产奶牛繁育过程,特别是胚胎移植中受体牛的组织管理情况进行发情同期化研究,以提高受体牛的利用率,达到降低生产成本和提高工作效率的目的。1材料与方法1.1受体牛来源及试验地点受体牛大部分为陕西关中地区的秦川牛,还有部分的低产奶牛及黄牛和奶牛的杂交牛。受体牛的选择主要以青年牛为主,部分选取育成牛,在1.5~6·0岁之间,拥有正常的发情周期,无繁殖机能疾病,经检疫无传染病、健康,膘情中上等。经产牛应在分娩后90 d以上,断乳,无流产史。受体牛饲养管理:受…