比较三种DNA指纹分析方法在玉米品种纯度及真伪鉴定中的应用

本项研究归纳出三种DNA指纹分析方法,即特征谱带法、引物组合法和核心引物组合法,并比较了这三种方法在玉米品种纯度及真伪鉴定中的应用价值.在玉米基因组上均匀选取62对SSR引物对60个玉米自交系进行分析.62对SSR引物共检测到238个等位基因变异,平均每个位点的等位基因数4.08个,平均多态性信息量(PIC)0.612,平均标记索引系数(MI)2.58,评估引物多态性的三个指标并不完全一致.三种方法的比较研究表明,特征谱带法仅在固定的材料范围内有效,当扩大范围后,原来具有特征带的样品往往不再具有特征带,且需要筛选大量的引物,效率很低;引物组合法通过不同引物的有限组合,完全可以区分全部材料,避免了筛选大量引物的工作;核心引物组合法是引物组合法的扩展, 不同实验室通过使用固定的一套核心引物组合,其指纹图谱可以相互比较和整合,为玉米DNA指纹图谱分析的标准化奠定基础.     

引物组合法在利用DNA指纹鉴定玉米自交系真伪中的应用研究

利用ＲＡＰＤ分子标记方法对我国４６个骨干玉米自交系进行了鉴定研究,结果表明,仅用Ａ６,Ｃ６,Ｄ２,Ｆ１０,Ｈ１９,Ｎ１９等６个引物的指纹组合即可将这４６个自交系相互区分开来,不需要针对每个自交系筛选特异性标记,克服了利用特异性标记鉴定玉米自交系的局限性;研究出基于ＷＩＮＤＯＷＳ９８操作平台的玉米ＤＮＡ指纹数据库和指纹分析软件,并且该数据库和分析软件对自交系的数量和引物数量都是开放性的。如果要区分开ｍ个自交系,最多只用ｎ个引物即可,二者的关系是：２＾ｎ≥ｍ。     

DNA指纹用于杂交水稻种子纯度和真伪鉴定的研究进展

本文简要阐述了RAPD、RFLP、AFLP、SSR等几种主要的建立DNA指纹图谱的分子标记技术及其在杂交水稻种子纯度和真伪鉴定中的研究和应用情况,同时评述了这几种分子标记技术各自的优缺点,并就水稻DNA提取方法的改进、PCR扩增反应程序和反应体系的优化、扩增产物的检测以及DNA指纹在杂交稻种子纯度和真伪鉴定中的准确性等问题进行了讨论。DNA指纹在杂交水稻种子纯度和真伪鉴定中具有广阔的应用前景,关键是要建立一套完善的、标准化的技术体系,进一步简化实验操作程序,降低成本,真正做到简单快速、准确可靠,使DNA指纹能用于规模化、商业化的种子质量鉴定之中。     

DNA指纹技术在河南省玉米品种区试管理中的应用

近年来,河南省玉米品种数量不断增加,目前生产上推广品种达300多个,每年参加河南省玉米区试的品种达100多个.出现了品种多、乱、杂现象.DNA指纹技术是从分子水平上为每一个品种确定一个身份证,克服一品多名和一名多品的现象,因此开展玉米品种DNA指纹鉴定、构建玉米品种标准DNA指纹库,对规范种业市场以及对玉米新品种权进行保护具有重要意义.     

DNA指纹鉴定玉米品种技术要点

NY/T1432—2007《玉米品种鉴定DNA指纹方法》是玉米（Zea mays L．）品种DNA指纹鉴定的标准方法。该方法适用于玉米自交系和单交种的品种真实性和品种纯度鉴定。该技术以PCR为基础,具有可靠性强、重复性高、多态性丰富、呈共显性遗传、易于分析等特点,可用来高效、准确地检测生物体中的遗传变异。该标准的发布实施。一方面给种子管理部门、品种保护部门以及广大的种子生产者、     

AFLP标记技术在玉米种子真实性及品种纯度鉴定中的应用

本文利用AFLP方法对在农业生产上大面积推广使用的4个玉米杂交组合及其8个亲本共12个材料进行了分析研究,得到了清晰的DNA扩增指纹图谱。在AFLP分析当中,共采用了10个EcoRI 3／MseI 3引物组合,每个引物组合扩增出的条带数在62～95条之间,平均为85．3条。并从这10个引物组合中筛选出一个引物组合,能够用来对供试4个玉米杂交种进行真实性及品种纯度鉴定。从而证明了AFLP技术在玉米种子真实性及品种纯度鉴定中的可行性。该项技术应用于玉米种子真实性及品种纯度鉴定在国内尚属首次。其具有稳定性重复性好,检测分辨率高等优点．很适合于玉米种子真实性及品种纯度鉴定。是今后种子真实性及品种纯度鉴定的发展方向,应加大其研究力度。     

SSR分子标记技术在杂交油菜种子纯度鉴定中的应用初探

采用形态学方法和SSR分子标记技术，对甘蓝型杂交油菜贵杂4号及其亲本进行杂种性状表现、DNA指纹图谱和种子纯度的研究结果表明：田间形态学观测结果杂种性状表现亲子间存在明显亲子关系和母本效应，利用作物的这一共性特点可对作物种子真实性和纯度进行鉴定；采用SSR分析从100对SSR引物中筛选出5对多态性很强且极易识别的特殊引物，通过这5对特殊引物的指纹组合构建了贵杂4号及其亲本的DNA指纹图谱；利用遗传决定的蛋白质组分不受环境影响和其在组分上的差异性反映的是基因型的原理，通过特殊引物组合对种子的扩增图，可快速有效的对种子真实性和纯度进行鉴定。     

DNA指纹技术在杂交水稻种子纯度鉴定中的应用

文章概述了对RFLP、RAPD、SSR、AFLP4种DNA指纹技术的原理及其在杂交水稻种子纯度鉴定上的应用，并对他们的开发前景作了探讨。     

我国玉米品种标准DNA指纹库构建研究及应用进展

介绍了我国玉米品种标准DNA指纹库构建的进展及应用情况。我国玉米品种标准DNA指纹库规模已达到22 089份,经与国内外作物品种DNA指纹库比较,是全球品种数量和建库规模最大的DNA指纹库,并且在区域试验、品种权保护及种子质量管理等方面都得到了广泛应用。至今已开展玉米品种真实性鉴定等达40 000多份次。同时,对DNA指纹库构建未来发展进行预测,建议继续发挥SSR标记的作用、加快推进SNP标记的研发、发掘In Del标记的应用潜力并持续关注测序技术的发展。     

农业部玉米专家组组长赵久然建立玉米品种DNA指纹库

北京市农林科学院玉米研究中心主任赵久然,致力于打造玉米科技创新体系,加强优势学科建设,主持完成多项国家及省部级重大项目,经过近10年深入系统研究,使玉米品种DNA指纹鉴定技术经济、简便、快速、准确,并建立了已有5000多个玉米品种的标准DNA指纹库,实现了理论技术化、技术标准化。     

玉米种子DNA快速提取及杂交种纯度的快速鉴定

本研究用玉米杂交种渝单8号及其双亲的干种子作为材料,使用NaOH溶液研磨玉米种子胚,提取基因组DNA,并利用多重PCR扩增进行玉米杂交种子的纯度鉴定.结果表明,利用玉米种子快速提取方法获得的DNA可进行正常的SSR扩增,并且从20对玉米核心引物中筛选出了8对扩增谱带呈双亲互补型的引物,将其中3对引物YISSR、phi072和phi299852组合起来扩增,扩增谱带清晰可辨,对渝单8号杂交种子的纯度进行准确鉴定.初步表明利用多重PCR技术鉴定玉米种子纯度是可行的,不仅简便快速,而且降低了检测成本.     

适合RAPD分析的三种玉米基因组DNA提取方法比较

本文通过对3种玉米基因组DNA提取方法的比较得出，DNA提取时采用一次氯仿／异戊醇抽提方法，得到的DNA质和量都较为理想，并且能够达到RAPD实验的要求。     

利用DNA指纹技术进行玉米亲子鉴定方法研究

利用DNA指纹分析技术 ,分析了同母异父 5个杂交组合分别与其父母本之间的遗传距离 ,结果发现 ,每个杂交组合与其相应的父本之间的遗传距离最小 ,所有组合完全一一对应。因此 ,可以通过计算遗传距离来进行玉米亲子鉴定 ,只需计算出玉米杂交种与所有可能父本自交系之间的遗传距离 ,与其遗传距离最小的自交系就是该杂交种的真正父本。     

矮孟牛及其后代育成品种的多态性分析与指纹鉴定

为深入了解矮孟牛及其衍生品种(系)的遗传特性,为育种工作中合理利用小麦育种骨干亲本提供理论依据,本研究利用22对SSR引物分析了矮孟牛及其衍生品种(系)共25份材料的遗传多样性.在25份材料中共检测到128个等位变异,等位变异数目为3～9个,每个位点上平均等位变异数为5.82个.25份材料间的遗传相似性系数(GS)在0.43～0.90,平均为0.63,表明品种间遗传差异较小.用非加权配对算术平均法UPGMA将25份材料分为五类,聚类结果较好地反映了品种(系)间的亲缘关系.利用其中3对多态性较好的引物可以对供试材料的DNA指纹进行鉴定,为我国小麦品种的指纹图谱构建及品种权保护提供参考.     

依赖性派生玉米品种DNA指纹鉴定标准研究

模仿育种是一快速、高效、针对性强的(改良)育种方法,但是根据最新国际保护公约规定,所育品种属于依赖性派生品种,侵害了原品种权人的权利。改良品种与原品种的遗传差异多大才算是依赖性派生品种,目前国内外没有标准。以BA为母本,以H28、昌7-29、502、P138、齐319、连87、吉853、京2101、京343、京832为父本组配了10对同母异父玉米杂交组合,研究了杂交组合两两之间的遗传差异。结果表明:遗传差异在20%以下的组合,父本之间具有明确的血缘关系;遗传差异在20%~30%的组合,父本之间有40%具有血缘关系,没有血缘关系的占60%;遗传差异在30%以上的组合,父本之间全部没有血缘关系。无论两父本之间是姊妹系,还是其中一个父本是用另一个父本回交2次改良而成,用它们组配的杂交组合之间的遗传差异都在10%以上。通过回交3次改良的组合,与原组合之间的遗传差异在10%以下。因此,将遗传差异小于10%作为判断是否是依赖性派生品种的DNA指纹鉴定标准。     

6个玉米杂交种种子纯度的SSR鉴定

玉米杂交种纯度是影响玉米产业发展的重要因素之一,建立快速、准确可靠的纯度检测技术是控制杂交种纯度的有效措施。从30对SSR引物中筛选出6对表现为双亲互补型的引物,建立了6份杂交种纯度鉴定的SSR体系。Umc1002、bnlg1112、bnlg238、Umc1153、phi072、bnlg240可分别用于玉米杂交种农大108、浚单20、郑单958、莱农14、莱农15和鲁玉16的纯度检测。双亲互补型等位变异基因频率在0.028～0.072之间,可较准确地检出样品中的自交株和大部分异型株。SSR鉴定玉米杂交种纯度结果略低于幼苗鉴定,但二者差异不显著,相关系数为r=0.8434。本试验建立的SSR技术体系可用于6个玉米杂交种纯度的快速检测。     

SSR技术在玉米种子纯度鉴定上的应用(上)

在对玉米种子纯度检测方法进行了广泛的调研与比较后,选定SSR方法进行优化研究,建立了新的玉米单株幼苗DNA提取方法,优化了操作系统,验证了技术的成熟性,筛选出了8对核心引物,用于192个杂交玉米组合的纯度检测工作,探索出了一套玉米种子纯度快速检测新方法.     

玉米杂交种DNA指纹图谱及其在亲子鉴定中的应用

采用79对SSR引物分析了86个玉米杂交种的72份亲本自交系的遗传多态性,从中筛选出扩增带型清晰、稳定的50对引物用于构建86个杂交种的DNA指纹图谱数据库;进而确定10对核心引物和判别标准用于亲子鉴定研究。结合玉米SSR分子标记检测技术和单籽粒DNA快速提取方法,DNA指纹数据库和判别标准可有效地用于玉米杂交种的亲子鉴定。     

玉米品种DNA指纹数据库构建的标准化规范

为了保证玉米品种DNA指纹库构建的标准化,从建库标记、检测平台、试剂、样品、评估程序、数据整合、模式库、扩展库、随机盲测等九个方面进行了全面的规范:(1)通过对不同分子标记的比较,确定SSR标记作为建库标记;(2)通过对不同DNA指纹检测方法的比较,确定毛细管电泳结合多色荧光检测方法作为DNA指纹片段分析方法;(3)规范了DNA、引物、Taq酶等试剂质量,以保证数据的稳定性和可重复性;(4)规范了样品来源、样品类型及分析样品数量;(5)确定评估品种的数量及引物的取舍标准;(6)为解决不同来源DNA指纹数据的有效整合问题,提出了固定一套核心引物、提供标准品种、提供标准DNA、确定引物等位基因BIN、规定对异常带型数据处理方式、规定数据的编码方式等6个解决策略;(7)规范了构建模式库的材料名单、来源及构建方式;(8)规范了构建扩展库的材料来源及构建方式;(9)进行数据库数据随机盲测,以评估入库数据质量.以上规范将为不同单位合作开展大规模的DNA指纹库构建研究奠定基础.     

一个新矮生玉米种质资源矮生性状QTL的定位

用新发现的玉米矮生种质资源矮2003×冀257构建的255个F2:3家系为作图群体, 利用114个覆盖玉米全基因组的SSR标记构建连锁图谱, 图谱总长度2 852.1 cM, 标记间平均距离为27.42 cM。2006年在北京与海南进行随机区组试验, 鉴定了255个F2:3家系成株期株高。用复合区间作图法(composite interval mapping, CIM), 对控制玉米株高性状的遗传位点进行QTL检测。在两个不同环境下均检测到相同的控制玉米株高的QTL位点3个, 分别位于第1和第2条染色体。其中在第1染色体上的1.10~1.11区段存在一个控制株高的主效QTL, 与dwarf plant8 (d8)位置相近, 在北京和海南环境下分别能够解释株高表型变异的50.5%和37.5%, 作用方式表现为显性效应。深入的序列分析结果显示, 该基因/QTL位于已知的d8基因下游20~30 cM的染色体区间, 这可能是玉米中控制株高的一个新基因。