拮抗链霉菌AFLP分析技术体系的研究

1材料与方法 1．1菌株供试拮抗链霉菌共10个菌株,均由该课题组分离自京郊菜田土壤和天然次生林土壤（表1）。     

拮抗链霉菌AFLP分析技术体系的研究

[目的]探索基于AFLP的拮抗链霉菌DNA模板制备方法及其扩增体系,为AFLP技术在链霉菌乃至放线菌资源分析中的应用提供依据。[方法]以改进的CTAB法提取DNA,利用Pst I／Mse I型AFLP试剂盒及其反应体系进行扩增,采用5％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析扩增结果。[结果]提取了10个拮抗链霉菌菌株的基因组DNA,0.8％琼脂糖凝胶电泳检测显示其主带清晰,片段大小为37.64-40.86Kb,无降解现象,亦无RNA残留;其OD260/OD280为1.625-1.833;Pst I／Mse I双酶切产物琼脂糖电泳呈弥散荧光长带,说明酶解充分;筛选出的3对引物对DNA模板的扩增谱带清晰,多态性丰富。[结论]该研究建立的DNA模板制备方法及其扩增反应体系可用于链霉菌的AFLP分析。     

水稻稻瘟病拮抗链霉菌的筛选

为从自然生态环境中寻找对水稻稻瘟病菌有拮抗作用的链霉菌,采用平板对峙法,从土壤中筛选出4株对稻瘟病菌有明显抑制作用的链霉菌St-10、St-85、St-107、St-120,通过测定拮抗带宽度并对拮抗菌株发酵液拮抗性的测定,最终得到1株高拮抗活性物质菌株St-10,抑菌率为52.0%。但试验分离到的菌株能否用于田间防治水稻稻瘟病,还需要进一步研究。     

水稻稻瘟病拮抗链霉菌的诱变选育

以稻瘟病拮抗链霉菌St-10为出发菌株,进行紫外线(UV)和60Co-γ射线的诱变选育,初步明确了该菌株紫外线20 cm照射距离下的最佳照射时间为40 s,60Co-γ射线最佳处理剂量为6万伦琴。经初筛和复筛后,获得了一株遗传稳定性好的突变菌株C-18,其相对抑菌率由出发菌株的52.4%提高到73.5%,是出发菌株的1.4倍。     

杨树根癌病原菌拮抗链霉菌的筛选

通过对杨树根癌病发病根系土样及健康根系土样链霉菌进行分离,得到63株链霉菌。并且使用纸片法测定了链霉菌及其无菌发酵滤液对根癌土壤杆菌的抑菌能力,得到有拮抗效果的链霉菌17株,其中5株链霉菌平板抑菌能力较强,抑菌圈直径大于3.0 cm。但这5株链霉菌无菌发酵滤液拮抗能力下降,甚至不表现抑菌活性。     

链霉菌(Streptomyces spp·)对几种蔬菜病原菌的拮抗作用

测定了２６株链霉菌对番茄早疫病菌、番茄灰霉病菌、甘蓝黑腐病菌、白菜软腐病菌和大肠杆菌这５种病原菌的抑菌作用。结果发现：在供试的２６株链霉菌中,菌株Ｍｅｎ－ｍｙｃｏ－９３－６３、６３、Ｍｙｃｏｓｔｏｐ、ＧＳ－９３－１０、ＧＳ－９３－３和ＧＳ－９３－２３对番茄早疫病菌,菌株１５、６３、ＧＳ－９３－１０、９３和Ｍｙｃｏｓｔｏｐ对番茄灰霉病菌,菌株３２、ＧＳ－９３－２、ＧＳ－９３－３、ＧＳ－９３－２３和９３对甘蓝黑腐病菌,菌株ＧＳ－９３－３、ＧＳ－９３－２３１、ＧＳ－９３－１０和Ｍｅｎ－ｍｙｃｏ－９３－３８对大肠杆菌抑菌作用较强,它们的抑菌活性明显高于对照化学药剂,白菜软腐无抑菌活性强的菌株,只有菌株ＧＳ－９３－１０和ＧＳ－９３－２３１抑菌活性中等。     

不同森林土壤链霉菌及其绿霉拮抗菌的分布

本文研究了五种不同林分土壤生态系中链霉菌及其绿霉拮抗菌的分布特征及某些土壤理化因子与土壤链霉菌分布的关系．研究结果表明：土壤链霉菌各类群在不同林分土壤中分布差异较大，土壤含水量、Ｃ／Ｎ和速效磷含量与链霉菌的数量分布呈正相关，在被试验的五种林分中，绿霉拮抗菌仅在杉木林、毛竹林和楠木林土壤中有分布，而以毛竹林土壤中分布最多．     

土壤链霉菌CaiF1抗菌物质的分离纯化及活性研究(英文)

[目的]从土壤链霉菌CaiF1发酵液中分离纯化抗菌物质,并研究该物质的活性。[方法]采用乙酸乙酯萃取,大孔吸附树脂吸附,硅胶层析和制备型高效液相色谱(HPLC)等分离技术纯化抗菌物质,以金黄色葡萄球菌、白粉病菌为指示菌进行活性研究。[结果]土壤链霉菌CaiF1发酵液中抗菌物质得到分离纯化;该物质在pH2.0-pH10.0、100℃和紫外照射24h条件下抑菌活性几乎不变,对白粉病的防治效果达69.7%。[结论]分离纯化的土壤链霉菌CaiF1抗菌物质具有很好的稳定性,为其结构鉴定和开发应用提供了理论依据。     

绿菇(Russula virescens(Schaeff.)Fr.)对灰霉菌(Bortrytis cinerea)的拮抗作用研究(英文)

[目的]研究绿菇(Russula virescens(Schaeff.)Fr.)对灰霉菌的拮抗作用。[方法]采用对峙培养测定法研究了绿菇菌丝体,发酵液及菌丝体提取液对灰霉菌的拮抗效果。[结果]绿菇对灰霉菌的拮抗作用主要表现为菌丝体重寄生和代谢产物生长抑制作用,对峙生长抑制率介于 46.9%~52.3%,重寄生现象明显。PDB培养基培养绿菇获得的发酵液生长抑制作用最强,对辣椒灰霉菌生长抑制率最高,为61.59%;发酵液热稳定性良好;绿菇菌丝提取液对供试灰霉菌无生长抑制作用。[结论]该研究为灰霉菌的分化和药敏感性研究提供了理论依据。     

利用拮抗链霉菌防治植物病害

本文对植物病害的重要生防因子这一链霉菌作了综述总结。人们利用链霉菌对真菌，细菌和线虫引起的植物病害进行了广泛的研究，我们的实验室，温室和大田试验结果表明，从自然界马铃薯疮痂病抑制性土壤中分离出来的链霉菌系显著地减轻马铃薯疮痂病害。本文还对马铃薯疮痂病的生防机制进行了探讨，并对链霉菌的分类学地位作了回顾总结。     

适用于AFLP分析的泡桐DNA提取方法研究

分别采用3种方法提取了豫杂一号泡桐组培苗叶片DNA,并对其得率和质量进行了检测.结果表明,DNAkit,CTAB-Ⅰ和CTAB-ⅡI法提取DNA的得率分别为0.250,0.284,0.312 mg·g~(-1);CTAB法提取的DNA片段大于DNA kit法;利用CTAB-Ⅱ法得到的DNA可被EcoRI,MspⅠ和Hpa Ⅱ完全酶切,该DNA经AFLP-PCR扩增电泳后,产物带型清晰,稳定,重复性好.CTAB-Ⅱ法为泡桐DNA提取的最佳方法.     

黄瓜叶片DNA的提取及AFLP分析体系的建立

以黄瓜叶片为研究材料提取基因组DNA并进行了AFLP扩增。对影响AFLP分析体系的关键因素进行了比较和优化,探索出适宜黄瓜的DNA提取方法,并建立了AFLP分析体系,得到了较为清晰可辨的AFLP指纹图谱,为进行黄瓜的遗传多样性分析、遗传图谱构建和基因定位等研究奠定基础。     

橡胶树AFLP银染体系建立前期的准备

以橡胶树杂交群体为材料,来寻找适合于研究橡胶树的AFLP技术体系的建立,优化是在多方面原因的,在众多关键因素的影响中,其中优化的关键前提为质量较高的基因组DNA。本实验采取CTAB改良法提取DNA为橡胶树的AFL,P技术后续工作顺利开展打下基础。     

1株链霉菌对几种植物病原真菌抑菌活性的初步研究

为了研究链霉菌1#所产生生物活性物质对5种植物病原真菌的抑菌活性。通过测定其次生代谢产物的抑菌活性,研究其发酵液对5种植物病原真菌的抑制效果。在链霉菌1#的同一批发酵液中,对小麦赤霉病菌的菌丝生长抑制率为60.8%,对棉花黄萎病菌和水稻稻瘟病菌的菌丝生长抑制率为20.0%和4.3%。100℃以下热处理15 min,拮抗成分仍有较强的活性,但随着温度和处理时间的增加,拮抗活性的丧失也就越明显。链霉菌1#粗发酵液活性作用在pH值3.8~9.0基本不变。在接近中性条件下,粗发酵液的拮抗活性最强。这株链霉菌的粗发酵液对几种植物病原真菌有很好的抑制效果,它具有一定的耐热性,抑菌效果在pH值3.8~9.0无明显差异。     

抗烟草青枯病拮抗菌的筛选及抑菌活性研究

[目的]为了筛选能有效防治烟草青枯病的生防菌株。[方法]对从土壤中分离到的链霉菌产生的次生代谢产物的抑菌活性和理化性质采用管碟法进行了测定。[结果]离体条件下,发酵液具有耐热性,在100℃以下仍具有较强的抑菌活性。在一定的pH值范围内(pH值3.8～9.0),拮抗能力无明显差异,其中在接近中性条件下拮抗活性较强。拮抗物质经胰蛋白酶处理后,拮抗活性亦无明显变化。经终浓度为2 mol/L(NH4)2SO4处理过的粗发酵液,其上清液与沉淀均具有拮抗活性,沉淀经SDS-PAGE凝胶电泳检测证明其拮抗物质具有蛋白质性质。[结论]1#链霉菌具有很好的开发研究价值。     

一种快速高效适于柑桔AFLP分析的DNA提取方法

利用改进的CTAB法提取了柑类、桔类、橙类及部分柑桔杂交实生后代等120多个品种的基因组,结果表明:该方法提取的DNA溶液无色透明,紫外分光光度计测得A260/A280为1.8～1.9,1%琼脂糖凝胶电泳为清晰的一条带,RNA去除干净,无降解现象,DNA的纯度和质量能满足AFLP分析要求.     

适于AFLP分析的柿树DNA提取方法研究

对柿基因组DNA的提取方法进行了研究,结果表明,采用提取液中含100mmol/LTris-HCl(pH8 0),20mmol/LEDTA,1 4mol/LNaCl,2%CTAB,1%PVP-40,10mmol/LNa2S2O5及100mmol/Lβ—巯基乙醇(用前加入)的改良CTAB法,可有效去除单宁、酚类、色素等,提取的柿叶片DNA质量和纯度较高,可用于AFLP分析。