Lj20和St24发酵液粗提物对番茄体内防御性酶活性的影响

为明确植物内生放线菌对植物体内防御性酶活性的影响,以植物内生放线菌Lj20和St24发酵液粗提物处理番茄植株,测定其根、茎、叶中过氧化氢酶(CAT)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性变化。测定结果表明,用Lj20和St24粗提物处理番茄植株后,除SOD处理和对照没有明显差异外,CAT、PPO和POD酶的活性都有所增强,但酶活性随时间变化规律各不相同。其中Lj20粗提物处理的番茄茎和叶中PPO的活性增加最明显,在测定时间内呈直线上升趋势。这表明Lj20和St24的代谢物不仅对病原菌具有直接抑制作用,而且可通过提高植物体内防御性酶活性来提高植物的抗病性。     

放线菌WZ162菌株发酵液抗香蕉枯萎病菌稳定性研究

放线菌WZ162菌株发酵液对香蕉枯萎病菌具有良好的抑菌活性,对其发酵液在不同条件下的稳定性测定结果表明,WZ162菌株的发酵液在温度低于80℃的条件下热稳定性良好;在自然光照及紫外照射条件下稳定,发酵液不发生分解或化学结构上的改变;在酸性条件下发酵液对香蕉枯萎病菌的抑菌率在24．92％-34．73％之间,在碱性条件下抑菌率在11．21％-25．39％之间,发酵液在酸性条件下的稳定性比在碱性条件下的好;pH为1-12的发酵液经不同时间的100℃水浴处理后对香蕉枯萎病菌的抑制作用明显低于未经水浴加热处理的,其中pH为1时的发酵液稳定性比在其他pH条件下的好。     

植物内生放线菌St24发酵液杀虫活性的研究

从番茄植株根茎接合部分离得到1株有杀虫活性的植物内生放线菌St24,其发酵液对小菜蛾幼虫具有较强的拒食作用,选择性拒食率和非选择性拒食率分别为100%和97.86%。并对朱砂叶螨有一定的触杀作用和产卵忌避作用,发酵液处理24h后成螨死亡率达55.9%,产卵忌避率为74.19%。     

放线菌Lj20发酵液杀虫活性的研究

[目的]为抗生素类药剂的开发和合理使用提供参考。[方法]从辣椒根部分离得到植物内生放线菌Lj20,研究其发酵液对小菜蛾幼虫、朱砂叶螨成螨及产卵的杀虫活性。[结果]处理24 h后,植物内生放线菌Lj20的发酵原液对小菜蛾幼虫的选择性拒食率、非选择性拒食率分别为95.45%9、7.84%,处理48 h后分别为81.55%、96.51%;对朱砂叶螨成螨的校正死亡率最高,为54.51%,随着稀释倍数的增加,校正死亡率逐渐降低。发酵原液和不同稀释倍数的发酵液对朱砂叶螨都具有较强的产卵忌避活性,处理24 h后原液的产卵忌避率高达90.24%。[结论]植物内生放线菌Lj20的发酵液对小菜蛾幼虫有较强的拒食作用,对朱砂叶螨有较强的触杀作用和产卵忌避作用。     

稻瘟病生防放线菌菌株A11发酵液中 抗菌物质的稳定性测定

在实验室分离获得的放线菌A11菌株,其发酵液采用对峙培养对植物病原真菌均表现良好的抑菌活性。对发酵液在不同温度和不同pH下的稳定性进行测定,结果表明菌株A11发酵液在中性及酸碱条件下都稳定,在极酸和极碱条件下抑菌活性丧失;A11发酵液能经受75℃温度60min,仍保持原来的抗菌活性,温度升高到100℃时活性丧失。     

植物内生放线菌St24代谢产物对小菜蛾的拒食作用

通过植物内生放线菌St24不同溶剂提取物对小菜蛾的拒食作用的测定表明,不同溶剂提取所得的粗提物及不同浓度的粗提取的拒食活性差异显著。其中乙醚提取物为最佳溶剂,对小菜蛾有很强的拒食作用,处理24h后的选择性拒食率和非选择性拒食率分别为100%、100%,48h后仍高达73.70%和98.89%。     

两株植物内生放线菌在植株体内定殖能力的测定

用抗药性标记法对两株植物内生放线菌进行标记,并测定其在黄瓜、小麦、白菜以及番茄四种植物体内的定殖能力[1],发现在四种植物的茎中都检测到Fq24菌株的存在,在小麦、番茄根茎和黄瓜茎中发现有Lj20菌株。并且发现两种内生放线菌对四种植物种子的根、芽萌发有不同程度的促进或抑制作用,而只对番茄和小麦苗期的根茎生长有促进作用。     

番茄内生放线菌Fq24发酵条件的优化

【目的】确定番茄内生放线菌Fq24的最佳发酵液培养基配方和最佳发酵条件。【方法】通过测定Fq24菌株发酵液对灰葡萄孢的抑菌作用,研究了Fq24菌株在不同发酵培养基、培养时间、接种量、装液量、起始pH、培养温度、碳源、氮源条件下的生长情况及其代谢物活性,以确定其最佳发酵条件。【结果】Fq24发酵液培养基的最适配方为:葡萄糖20 g,黄豆饼粉20 g,玉米面30 g,淀粉10 g,牛肉膏1 g,KNO32 g,NaCl 2 g,MgSO40.3 g,CaCO36g,KH2PO40.2 g,H2O 1 000 mL;筛选出的最佳发酵条件为:培养时间7 d,接种量10%,500 mL容量瓶中装液量100mL,起始pH值6.5,培养温度28℃,碳、氮源分别为葡萄糖和KNO3。【结论】在最佳发酵液培养基和培养条件下,Fq24菌株发酵液对灰葡萄孢的抑菌率可达到92.1%。     

药用植物内生菌抑菌作用研究进展

植物内生菌是指在其全部或部分生活史中存活于健康植物组织内部,而不引发宿主植物表现出明显感染症状的微生物,主要包括细菌、真菌及放线菌。药用植物内生菌不仅可以产生与宿主植物相同或类似的产物,还能产生大量结构新颖的活性代谢产物。目前,从药用植物中分离筛选具有生防作用的内生菌并研发生物农药,成为植物抗病虫研究的新热点。本文综述了药用植物内生细菌、内生真菌以及内生放线菌的分离及其抑菌作用方面的最新研究进展,为药用植物内生菌在农业和医药业中的应用研究提供参考。     

鱼腥草内生放线菌的分离及杀菌活性研究

[目的]探索鱼腥草内生放线菌的杀菌生物活性。[方法]以新鲜鱼腥草为材料,从其根、茎和叶部共分离得到7株内生放线菌。采用抑制菌丝生长速率法和抑制孢子萌发法对7株内生菌发酵产物进行杀菌活性筛选。[结果]这7株内生放线菌均具有一定抑制活性。其中,编号为K3和K15的2株内生菌发酵液对玉米纹枯病菌、玉米小斑病菌、黄瓜枯萎病菌和禾谷镰刀菌等4种植物病原真菌均有较强抑菌活性,其抑制率均在70%以上,对玉米小班病菌孢子萌发的抑制率在90%以上。进一步研究K15和K3菌株的抑菌活性可知,K15和K3菌株发酵液对玉米小斑病菌的孢子萌发的EC50值分别为3.71和14.97 mg/ml;盆栽和田间试验结果均表明K15和K3菌株发酵液对小麦白粉病有较好的防治效果,对小麦白粉病的盆栽保护和治疗效果均高于70%,田间防治效果分别为77.46%和66.55%。[结论]K15和K3菌株发酵产物具有广谱的杀菌活性,特别对小麦白粉病菌有很好的田间防治效果。     

白蚁肠道纤维素分解菌的筛选鉴定及产酶条件的研究

从白蚁肠道中筛选出1株强降解纤维素的菌,经培养特征及生理生化试验初步鉴定其隶属于放线菌类链霉菌属菌株.液体摇瓶发酵试验显示其最佳的摇瓶发酵培养基配方为:CMC 5 g、(NH_4)_2SO_4 6 g、牛肉膏6 g、KH_2PO_40.50 g、MgSO_4·7H_2O 0.50 g、CaCl_2 0.10 g、FeSO_4 0.10 g、水1 000 mL;产酶最佳条件:发酵时间约120 h、起始pH为5.0、装料量为60～80 mL.此时分解菌所产酶酶活最高,其CMC酶活、滤纸酶活、脱脂棉酶活分别达到583、1 654和28单位.     

泽漆内生菌的分离及抗病毒活性筛选

从泽漆健康组织中分离出内生真菌、细菌和放线菌共101株,根据菌落特征和生长特性对其进行了初步归类。并将分离出的内生菌进行液体培养,通过室内盆栽试验进行了抗病毒活性筛选,得到2株有较好抗病毒活性的放线菌菌株。     

广西地不容内生真菌DBR-12和DBR-23代谢产物的抑菌活性

研究从广西地不容块根中分离出的DBR-12和DBR-23两株内生真菌的抑菌活性,为其在抗菌剂领域的开发利用提供依据。首先用液体培养基对内生真菌进行发酵培养,采用两相溶剂液液萃取法对发酵产物进行初步分离,然后用菌丝生长速率法和带毒平板法分别测定发酵产物对10种植物病原真菌和15种动物致病菌的抑菌活性。结果表明,DBR-12和DBR-23发酵产物乙酸乙酯萃取物对植物病原真菌均有较好的抑菌活性。DBR-12对玉米小斑病菌等6种病原真菌的抑制效果较好,有效中浓度(EC50)为0.010 4~0.079 7 g/L,其中对玉米大斑病菌的毒力最高;DBR-23对除玉米小斑病菌外的9种病原真菌抑制效果较好,EC50为0.020 6~0.174 6 g/L,其中对甘蔗凤梨病菌的毒力最高。DBR-12发酵产物正丁醇萃取物对玉米大斑病菌等5种植物病原真菌的抑制效果较好,EC50为0.107 8~0.646 9 g/L,其中对金橘砂皮病菌的毒力最高。DBR-23发酵产物乙酸乙酯萃取物对痢疾志贺氏菌等12种动物致病菌有抑菌活性,最低抑菌浓度(MIC)为1~2 g/L;DBR-12发酵产物对动物病原菌无抑菌活性。综上,广西地不容内生真菌DBR-12和DBR-23有较好的抑菌活性,在抗菌剂领域有较好的开发应用前景。     

蛇足石杉体内抑制乙酰胆碱酯酶活性物质的内生真菌的分离

[目的]从蛇足石杉体内分离筛选出具有体外抑制乙酰胆碱酯酶活性的内生真菌。[方法]取野外采集的蛇足石杉的叶、茎和根进行表面消毒后接种于PDA培养基,分离出内生真菌后进行摇瓶发酵,超声提取其发酵产物,以DTNB法检测其发酵产物在体外抑制乙酰胆碱酯酶的活性。[结果]从根、茎、叶中分离得到194株内生真菌,在马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)中发酵后,对内生真菌发酵提取液进行体外AChE抑制活性检测;共有31株内生真菌显示出体外AChE抑制活性,抑制活性较强的有13株,抑制率在50.2%～80.5%。其中从蛇足石杉茎部位分离得到9株,叶部位分离得到4株。[结论]从蛇足石杉体内可分离出内生真菌,该内生真菌的发酵产物在体外有较强的抑制乙酰胆碱酯酶活性,这可能是寻找乙酰胆碱酯酶抑制药物的有效途径之一。     

紫杉二烯合成酶基因转化红豆杉内生真菌XT5的研究

[目的]研究紫杉二烯合成酶基因转化短叶红豆杉（Taxus brevifolia）内生真菌XT5的情况。[方法]采用土壤农杆菌介导法将来自红豆杉中的紫杉二烯合成酶基因转入红豆杉内生真菌XT5中,研究紫杉醇发酵产量。[结果]成功转化得到8株重组子,其中XT5-TS-2的紫杉醇含量得到了大幅提高,其最高产量为423.983 4μg/L,比原始菌株提高了53.19%,表明转化紫杉二烯合成酶基因能够有效提高紫杉醇产量。[结论]该研究可为提高红豆杉内生真菌发酵生产紫杉醇产量提供理论支持。     

具抑菌活性的诺丽内生真菌发酵条件的优化

为了研究发酵条件对诺丽内生真菌M2抑菌性的影响,笔者采用传统方法和ITS rDNA测序方法相结合,将本实验室筛选出的抑菌效果突出的诺丽内生真菌M2初步鉴定为棘孢曲霉（Aspergillus aculeatus）,在NCBI数据库中登录号为MK560191。通过单因素试验和正交设计对内生真菌M2进行发酵优化,筛选出最优发酵条件:（1）内生真菌M2优化后的培养基方案为200 g土豆煮沸30 min浸出液、葡萄糖20 g、硝酸钠5 g、磷酸二氢钾0.2 g、七水合硫酸镁0.2 g、1 000 mL双蒸水;（2）发酵条件为150 mL锥形瓶装液50 mL、温度25 ℃、培养基初始pH8、转速170 r·min?1。     

内生放线菌gCLA4对辣椒疫病的防治研究

通过皿内对峙试验从242株供试内生放线菌中筛选到辣椒疫霉病菌拮抗菌62株，抑菌带宽度≥5mm的24株，占试验总菌株的10%，分别分离自黄瓜、牛蒡等9种植物的根部、茎部和叶片。用管碟法进行抑菌活性复筛，发现其中6株的无菌滤液对辣椒疫霉病菌和大豆疫霉病菌的抑菌圈直径≥20 mm，其中gCLA4的抑菌活性最强。进一步的研究结果表明，该菌株的无菌滤液能够强烈抑制病菌孢子囊的形成及游动孢子的释放，原液对孢子囊形成及游动孢子释放的抑制率分别高达100%和96.2%，稀释50倍后的抑制率仍分别达95.3%和85.6%，并且对其菌丝生长也有明显的抑制作用。温室盆栽试验结果表明，菌株gCLA4对苗期的辣椒疫病有较好防效。接种疫霉菌前48 h2、4 h和0 h以20 mL/盆（2株/盆）浇灌gCLA4菌株无菌滤液于辣椒苗基部土壤，接种后7 d调查病株率，其防效分别达100%、92.3%和80.8%，而接种14 d后分别为77.8%、55.6%和36.1%，说明该菌株无菌滤液具有开发成生防制剂的潜力。