应用SPA菌体免疫扫描电镜法检测鸡新城疫病毒

兔抗鸡新城疫血清致敏的SPA菌体与不同稀释度鸡新城疫病毒反应后,在扫描电镜下,可观察到其表面吸附有大小不均(直径大约在100～300nm之间),形态不规则的病毒颗粒。与正常组织液反应后,菌体表面光滑,无吸附物。     

鸡新城疫病毒分子生物学特性及检测方法研究进展

鸡新城疫是由新城疫病毒(NDV)引起的一种急性败血性传染病,是危害养鸡业发展最严重的疫病之一.NDV属于副黏病毒科、副黏病毒亚科、腮腺炎病毒属,是一种有囊膜的负链RNA病毒[1].     

用单抗夹心ELISA快速检测鸡新城疫病毒

采用传统的病毒分离的方法将免疫鸡群泄殖腔棉拭样品盲传一代，再用新城疫单抗夹心ELISA对F1尿囊液进行新城疫病毒(NDV)检测。结果表明本方法具有良好的特异性，NDV阳性样品检出率很高，且鸡禽流感病毒(AIV)对此无干扰作用；分别检测阳性样品453份、阴性样品2959份，与动物世界卫生组织(OIE)推荐的病毒分离及鉴定、毒力试验的经典检测方法相比较，符合率为99．3％、99．7％；测定的变异系数为8％，稳定性较好，同时本法比经典的检测方法缩短检测时间7d。结果表明用单抗夹心ELISA法检测鸡泄殖腔棉拭样品F1尿囊液新城疫病毒实用、准确、特异、稳定、快速。     

新城疫病毒单克隆抗体研究Ⅲ酶标单克隆抗体ELISA夹心法检测鸡新城疫病毒抗原

应用双抗体ELISA夹心法检测禽类新城疫病毒(NDV)抗原,用单克隆抗体或多克隆抗体包被固相载体,将活化的40孔板作为捕捉待检新城疫病毒抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)与单克隆抗体的结合物作为示踪抗体,比较了单克隆抗体和多克隆抗体的捕捉效率.结果表明,NDV单抗2C₁₂、4H₁₀优于血清IgG,同时确定了双抗体ELISA夹心法对不同日龄健康鸡组织产生背景反应的O.D.值基本参数,以X+2SD为判定阈值.捕捉抗体2C₁₂、4H₁₀的工作浓度为500～400μg/ml;示踪抗体2C₁₂、4H₁₀的工作浓度为1:3000～1:2000,ELISA夹心法的灵敏度可达4μgNDV蛋白/ml;对NDV不同毒株感染鸡各脏器的NDV检出率为:肾100%、肺90%.证明用双抗体ELISA夹心法检测鸡新城疫病毒抗原特异,敏感,是禽类新城疫病毒检测的新途径.     

新城疫病毒分子检测技术

新城疫病毒是一种能导致大多数禽类消化道、胃肠道和中枢神经系统损伤为主要特征的急性热性高度接触性传染病.新城疫病毒的检测主要采用单克隆抗体技术、RT-PCR技术、荧光定量RT-PCR技术、核酸探针技术、基因芯片等分子检测技术.     

鸡新城疫病毒等三重PCR检测方法的建立及应用

正近几年来,随着国家禽业规模集约化程度不断提高,鸡群养殖工作质量得到明显提高,但同时也出现了鸡群混合感染和二次感染情况。鸡新城疫病毒、鸡细小病毒和禽流感病毒是这其中最为常见,也是危害最大的疾病,已经得到了人们的高度重视。从症状上看,3种疾病临床特征较为相似,难以区分,必须要通过实验室的具体验证后进行     

单克隆抗体夹心ELISA试验检测鸡新城疫病毒抗原的研究

从10株抗鸡新城疫病毒(NDV)特异性单克隆抗体(MAbs) 中筛选出2株MAbs—M22和F23,分别用作包被抗体和酶标抗体而建立的MAbs—夹心ELISA试验,对提纯NDV的最小检出量为25ng/ml病毒蛋白.NDV鸡阳性血清对本试验的特异性阻断作用和与其他禽类病毒交叉反应的阴性结果,证明本试验对NDV的特异性。从临床疑为鸡新城疫的724只病鸡的口腔棉试样品中共检出阳性502只,其中200个样品与病毒分离试验结果完全一致,两者均查出阳性鸡176只。     

鸡新城疫病毒耐热冻干保护剂的研究

对利用耐热保护剂制成的新城疫病毒冻干品的研究表明 :制品在 3 8℃条件下 8、14和 2 1d ,其中较理想一组冻干病毒的EID50 / ( 0 .1ml)由 10 6 .33分别下降为 10 3.6 7、10 4 .33、10 3.6 7。     

中药复方抗鸡新城疫病毒作用研究

[目的]探讨中药复方抗鸡新城疫病毒（NDV）的作用机理,为临床合理使用抗病毒性药物提供科学的理论依据。[方法]以白花蛇舌草、金银花、黄芪和甘草组成中药复方,制备成中药复方流浸膏并配制成不同浓度梯度的药液;测定中药复方对鸡成纤维细胞（CEF）最大无毒浓度,并测定NDV在CEF上半数感染力（TCID50）;设中药复方不同浓度组,正常细胞和NDV感染细胞对照组,采用3种不同的作用方式作用于各组以检测中药复方抗NDV活性,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法（MTT法）测定OD值,以治疗指数为评价指标。[结果]中药复方对CEF的最大无毒浓度为2-6g/ml,NDV对CEF的TCID50为10-7.3;第①种作用方式中药复方的最小有效浓度是2-10g/ml,第②种作用方式为2-8g/ml,第③种作用方式为2-7g/ml。[结论]第①种作用方式对病毒的灭杀作用最强,第②种作用方式次之,第③种对病毒的灭杀作用最弱。表明中药复方不仅具有细胞外直接杀灭病毒作用,而且还具有抑制病毒吸附、穿入、复制和成熟的某一环节,为研究中药抗病毒的作用机理及临床应用提供了可靠的试验依据。     

制备鸡新城疫病毒抗原的优化实验

本实验主要以NDV弱毒株为实验对象探讨了几种培养因素对鸡胚尿囊液收量和血凝效价的影响。实验选择9、10、11日龄非免疫鸡胚以三个接种剂量分别接种NDVLasota株病毒液于鸡胚尿囊腔中。实验结果表明选用10日龄鸡胚接种,接种剂量为0.1ml/枚时获得尿囊液量和血凝效价为最高。     

应用血凝抑制实验检测雏鸡新城疫病毒抗体

鸡新城疫(Newcastle Diseas)是鸡的烈性病毒性传染病,病原体系副粘朊病毒科(Paramyxovirldae)的单股RNA病毒,称之新城疫病毒(Newcastle Diseas Virus)。目前国内外均应用NDV疫苗予防本病。由于广泛使用鸡新城疫疫苗,成年母鸡不同程度地接受免疫,现已查明本病疫苗主要引起体液免疫,NDV特异抗体—方面保护母鸡,免于强毒NDV的攻击,不致发病,另一方面NDV特异抗体又可经母鸡输卵管,移行入受精卵、主要含在卵黄内。在胚胎发育期及新生雏阶段,卵黄不仅做为营养的来源,同时所含的NDV抗体亦为雏鸡所吸收,使雏鸡体内在一段时间存在NDV特异抗体。这种由母鸡被动地输给雏鸡的NDV抗体,通常又称之母源性抗体,可以在一段时间内为雏鸡提供免疫保护。这是     

浅谈鸡新城疫病

鸡新城,由副粘病毒引起的高度接触性传染病。又称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟。常呈急性败血鸡新城疫鸡瘟症状。主要特征是呼吸困难、便稀、神经紊乱、粘膜和浆膜出血。死亡率高,对养鸡业为害严重。1926年首先发现于印度尼西亚,不久又在英国新城发现,世界各国均有流行记载。有强毒株和弱毒株两类。病毒分为低毒力型(即缓发型)、中等毒力型(即中发型)、强毒力型(即速发型)3型。多数高强度毒力株常属嗜内脏型新城疫病毒。鸡科动物都可患罹本病。家鸡最易感,雏鸡比成年鸡易感性更高。珠鸡、火鸡、雉、孔雀也能感染。鸭、鹅对本病有抵抗力。哺乳动物对本病有强大抵抗力,但人偶有感染而患结膜炎。     

内蒙古地区鸡新城疫病毒分离株特性的研究

在内蒙古自治区五个盟市十个养鸡埸中从发病、死亡鸡中分离出8株鸡新城疫病毒,並定名为HH_1、WH、HH_2、HH_3~-、HH_4、DS、JN和HH_5。对此8株NDV分离物电镜下的形态、毒力、蚀斑特性、血凝素的热稳定性、对部分动物红细胞的凝集能力、凝集解脱特征及对福尔马林的敏感性等生物学特性进行了系统的测定;并用新城疫单克隆抗体对NDV分离物进行了初步的抗原性分析。于此同时,并与攻毒株(F_(48)E_8、NM株)和疫苗株(Ⅰ系、Ⅱ系和LaSota株)作了比较研究。分离的8株NDV致病性测定结果表明:MDT为42.0～60.2小时;ICPI为1.61～1.98;INPI为1.02～2.43,全部属于速发型NDV。8株NDV均能在鸡胚成纤维细胞(CEF)上产生蚀斑。本试验发现了两株对热相当稳定的毒株。各NDV分离株内部以及与现行ND疫苗株和NDV参考株之间存在着一定程度的抗原性差异。     

新城疫病毒分子生物学研究进展

新城疫是由新城疫病毒（NDV）引起的一种能导致大多数禽类消化道、胃肠道和中枢神经系统损伤为主要特征的、急性高度接触性传染病。1926年该病首次被发现于印度尼西亚的爪哇,1927年Doyle在英国的新城首次分离报道并将其命名为新城疫病毒,引起的疾病称为新城疫。我国于1948年分离到NDV,但据载1935年曾有过＂鸡瘟＂流行,可能是由NDV引起。     

鸡新城疫病毒中和单克隆抗体的制备及鉴定

采用差速离心法纯化鸡新城疫病毒(NDV)标准毒株F48E8,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术制备抗NDV单克隆抗体,旨在为NDV中和抗原表位分析奠定基础。将NDV感染BHK-21细胞,建立异源免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)的单克隆抗体检测方法,筛选获得14株分泌抗NDV单克隆抗体杂交瘤细胞株,其单克隆抗体腹水IPMA效价均在0.50×10-2~2.56×10-5(F48E8株和La Sota株)。血凝抑制试验(HI)结果表明,单克隆抗体1G6、2C1、4D2、5F2和13A5具有血凝抑制活性,其HI效价在(6~12)log2(F48E8株)和(9~11)log2(La Sota株)。病毒中和试验结果表明,单克隆抗体5F2和13A5对F48E8株和La Sota株均有明显的病毒中和活性,中和效价分别为1∶400~1∶800和1∶25。夹心ELISA结果表明,单克隆抗体5F2识别NDV HN蛋白,13A5识别F蛋白。综上,成功制备了具有中和活性的NDV单克隆抗体(5F2和13A5)。     

鸡新城疫病毒强毒株的分离与鉴定

从河北、天津、北京等省市发病鸡群中分离到8株有血凝性的分离物,其血凝作用可被新城疫阳性血清所抑制,而不能被AIV(H9亚型)、EDS76阳性血清所抑制,表明8株分离物均为新城疫病毒。利用鸡胚终点稀释法对这8株NDV进行了克隆。对8株NDV的毒力指数(MDT、ICPI、IVPI)测定结果显示:MDT在42 9～49 5h之间,ICPI在1 95～2 00之间,IVPI在2 68～2 89之间。表明8株NDV均为新城疫病毒强毒株,其毒力与标准强毒株F48E8相近。各分离毒株经2%磷钨酸负染后,电镜下观察,可见丝状、圆形或不规则形态的病毒粒子,表面有纤突样结构。各毒株的大小不尽相同,粒子直径或长轴在100～500nm之间。     

用胶体金免疫电镜技术检测新城疫病毒

应用柠檬酸三钠还原法制备了20 nm的胶体金颗粒标记NDV抗体,并且用直接电镜、免疫电镜和胶体金免疫电镜技术比较观察了新城疫病毒.证明胶体金免疫电镜技术作为检测NDV的检测方法具有简单、快速、准确和无污染等优点.