水芋体细胞胚胎发生及植株再生休系的建立

以水芋幼叶为外植体,应用均匀设计法筛选其最适合的胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导、体细胞胚胎发育及植株再生的培养基,建立了水芋体细胞胚胎发生体系.对不同阶段培养材料的形态结构及超微结构的观察证明了水芋体细胞胚胎的发育过程.结果表明:水芋叶片胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导最适宜培养基为:LS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 2.0mg/L,诱导率为98.5%;体胚发育及植株再生最适宜的培养基为:LS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.5mg/L+IAA 1.0 mg/L,体胚萌发率为96%,萌发的体胚在发育培养基上继续培养25 d后全部发育成完整植株.     

花烛体细胞胚胎发生及植株再生研究

 以花烛(Anthurium andraeanum Lind. ) 盆花品种无菌苗叶片、叶柄、根段为外植体, 对花烛体细胞胚胎发生及植株再生进行了研究, 建立了花烛体细胞胚胎发生体系。结果表明, 花烛叶片较其他外植体更适宜体细胞胚的诱导; 胚性愈伤组织及胚性结构诱导最适培养基为改良MS + 2, 4-D 2.0～3.0 mg·L ^{- 1} + KT 0.5 mg·L ^{- 1} +蔗糖2% +葡萄糖1% , pH 5.5, 暗培养40 d, 诱导率可达90.3%; 体胚发育适宜培养基为改良MS + 6-BA 0.5 mg·L ^{- 1} +蔗糖3% , 光强20 μmol·m ^-2 · s^-1 , 培养20 d后体胚萌发率达6219%; 萌发的体胚在发育培养基上继续培养30 d后均能发育成完整植株。对不同阶段培养材料的组织结构及超微结构的观察证明了花烛体胚发生过程。     

文冠果体细胞胚胎发生体系建立

以文冠果果实的幼果期、中期和成熟期种胚为外植体,利用组织培养技术,对影响文冠果体细胞胚胎发生多种培养因子进行筛选,建立稳定的文冠果体细胞胚胎发生的培养体系。结果表明:文冠果果实发育中期的种胚诱导体细胞胚效果较好,种胚在MS+BA 1.0 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+2%蔗糖的固体培养基上暗培养形成愈伤组织,在MS+BA 2.0 mg/L+NAA0.05 mg/L+2%蔗糖的固体培养基上暗培养产生体细胞胚。     

黄瓜体细胞胚途径再生体系的建立及优化

以不同生态型的黄瓜（Cucumis sativus L.）为材料，利用不同基因型建立黄瓜体细胞胚再生体系，并在此基础上对 黄瓜体细胞胚再生体系进行了优化。结果表明：华南型黄瓜9101 和D4 能够诱导出正常的胚状体。以筛选出的9101 为材料， 进一步通过不同组织部位、激素配比、暗培养等对体细胞胚再生体系进行优化，认为子叶节是最佳的外植体，其胚性愈伤 组织诱导的最适培养基为MS + 2.00 mg·L-1 2，4-D，诱导率可达100.00%，出胚的最适培养基为MS+0.10 mg·L-1 2，4-D + 0.5 mg·L-1 KT，其出胚率可达33.33%。此外，在愈伤诱导培养前期给予暗培养条件能提高愈伤诱导率、出胚率及正常再生植株 的获得。对体细胞胚的形态学观察发现，黄瓜体细胞胚发源于子叶节表面的胚性愈伤组织，经历球形胚、心形胚、鱼雷形胚 和子叶胚等时期，最终发育成完整的黄瓜植株。     

多花蔷薇假珠芽诱导、体细胞胚发生及植株高效再生

 以多花蔷薇‘无刺3号’成熟种子为外植体,探讨了假珠芽诱导、体细胞胚发生及植株高效再生的方法。结果表明,种子的子叶在添加2, 4-D 0.5～2 mg·L-1的1/2 MS培养基上暗培养30 d后所产生的愈伤组织,接种到添加TDZ 5～20 mg·L-1的1/2 MS培养基上光培养20 d产生初级假珠芽。假珠芽在添加TDZ 10 mg·L-1和GA3 0.1 mg·L-1的诱导培养基上暗培养20 d后,在含麦芽糖的无激素培养基上光培养产生少量次级假珠芽和胚性愈伤组织。假珠芽保存在诱导培养基上。胚性愈伤组织可发育成大量正常体细胞胚,继而再生正常植物。假珠芽可通过上述方法不断诱导体细胞胚和假珠芽,通过这种方法假珠芽已经保存了2年。     

中国樱桃‘对樱桃’不定根离体再生植株的研究

 采用中国樱桃‘对樱桃’( Prunus pseudocerasus) 无菌生根苗的不定根作为外植体, 成功诱导了胚性愈伤组织, 实现了通过分化不定芽和诱导初生体细胞胚两种方式再生植株。根切段在MS + NAA1.0 mg/L + BA 0.05 mg/L + IBA 0.05 mg/L 培养基诱导获得胚性愈伤组织, 诱导频率达54.2 % , 该愈伤组织在MS + NAA 1.0 mg/L + BA 0.5 mg/L 培养基上不定芽分化率为100 % , 不定芽在MS + BA 0.5 mg/L + IBA 0.1mg/L 培养基上生长发育良好, 转入MS + NAA 0.02 mg/L + IBA 0.02 mg/L 生根培养基生根率达100 %; 整体不定根系统在MS 附加2 ,4-D 1.0～3.0 mg/L 和BA 0.5 mg/L 的培养基上同时诱导初生体细胞胚发生和单极不定芽发生, 每外植体上平均体细胞胚数5～25 个, 不定芽3～22 个。体细胞胚转到MS + BA 0.5 mg/L +IBA 0.1 mg/L 培养基上发育为完整植株, 植株再生率100 %。     

苹果体细胞悬浮培养及植株再生研究

以苹果试管苗叶片的再生不定芽嫩叶为试材,对苹果体细胞悬浮系的建立及植株再生的影响因素进行了研究.结果表明:在MS+NAA 0.5 mg/L+BA 2.0 mg/L培养基上可诱导获得高活力的愈伤组织.将该愈伤组织转入MS+2,4-D 2.0 mg/L+BA 1.0 mg/L液体培养基中培养,采用无菌筛网分离获得含单个细胞和少于8～10个细胞的小细胞团进行继代培养,建立体悬浮细胞培养系.将悬浮细胞转到MS+2,4-D 2.0 mg/L+BA 1.0 mg/L的固体增殖培养基上暗培养25 d后,可形成微型愈伤组织,将该愈伤组织转到MS+BA 5.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L的植株再生培养基上暗培养30 d后转入光下,光照培养30 d后53％的愈伤组织可再生植株.该研究建立的苹果体细胞悬浮培养技术,不仅可用于细胞融合及遗传转化过程中杂种细胞和转化细胞的分离及植株再生研究,而且对于利用组织培养技术筛选变异株系也具有重要意义.     

唐菖蒲体细胞胚起源、发育的形态与组织细胞学观察

 以唐菖蒲‘Advanced Red’品种的籽球为试验材料,将籽球切片放在MS + 6.0 mg · L^-1 TDZ培养基上暗培养21 d,诱导胚性愈伤组织;将胚性愈伤组织转入MS + 1 mg · L^-1 2,4-D培养基中暗培养28 d诱导体细胞胚。使用立体显微镜和石蜡切片技术对体胚形态与细胞组织进行观察。结果表明：体胚诱导14 d后,开始出现一些胚性细胞,之后形成多个细胞组成的原胚（pre-embryonic cell complexes）,原胚进而发育形成球形、盾形,心形、鱼雷形胚和子叶期胚。将成熟的体胚转入MS培养基后长出不定根和不定芽,形成完整的植株。唐菖蒲体胚的起源有外起源和内起源两种方式。在初生体胚发育过程中还伴有次生胚的形成。     

利用未成熟种子建立野生阿宽蕉胚性细胞悬浮系和植株再生的研究

以纵切的野生阿宽蕉60d龄未成熟种子为外植体,在MI1愈伤组织诱导培养基(MS大量和微量元素及铁盐+MorelandWetmore维生素+0.1mmol/LKH2PO4+87mmol/L蔗糖+4.5μmol/L2,4-D+1g/LGelrite)中培养60d后开始出现浅黄色松散的胚性愈伤组织,150d后愈伤组织诱导率为(15.11±1.95)%。该类愈伤组织被转移到含18μmol/L2,4-D的MI2培养基中继代60d后,可获得状态均一的理想的胚性愈伤组织。胚性愈伤组织悬浮培养后,通过2个月的筛选和继代培养,可得到均质的胚性细胞悬浮系。理想的胚性愈伤组织在体细胞胚诱导培养基中培养10d后可见到白色半透明体细胞胚的发生,体细胞胚诱导率为7.70×105个/gFW。成熟体细胞胚的萌发率为(33.33±3.37)%,植株再生率为(20.83±1.68)%。     

普通狗牙根种子组培技术优化及植株再生

以普通狗牙根的成熟种子作外植体,通过胚性愈伤组织的发生进行植株再生。结果表明:诱导狗牙根种子产生愈伤组织的最佳培养基为:MS+2,4-D 3 mg/L+壳聚糖4 g/L;暗培养优于光培养,最高出愈率为87.0%;所诱导愈伤组织在1/2原激素浓度下继代,以MS+6-BA0.1 mg/L为分化培养基,获得了再生植株;半透明粘稠状愈伤组织的分化率最高,为63.1%。     

褪黑素对‘无核白’葡萄体细胞胚的诱导作用

以欧洲葡萄‘无核白’（Vitis vinifera‘Thompson Seedless’）未开放的小花蕾为外植体,研究0、1.0、2.0、3.0 mg ? L-1褪黑素（Melatonin）对其体细胞胚的诱导效果。结果表明：‘无核白’小花蕾在 MS + 1.0 ~ 3.0 mg ? L-1 褪黑素 + 2.0 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1蔗糖 + 3 g ? L-1植物凝胶的培养基上继代培养30 d时愈伤组织诱导率较好,为73.67% ~ 89.10%,显著高于2,4-D处理,愈伤组织形成所用时间较2,4-D处理缩短了14 d。愈伤组织诱导120 d时,不同浓度褪黑素均出现体细胞胚,其中,以MS + 1.0 mg ? L-1褪黑素 + 2.0 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1蔗糖的培养基体细胞胚的发生率最高,180 d时达12.05%。体胚在 MS + 60 g ? L-1 蔗糖 + 0.5 g ? L-1活性炭的X6培养基中萌发30 d后,将萌发的子叶胚转移至MS + 0.2 mg ? L-1 6-BA + 0.1 mg ? L-1 NOA + 30 g ? L-1 蔗糖 + 0.5 g ? L-1活性炭的成苗培养基上,其中,1.0 mg ? L-1褪黑素诱导产生的体胚发育正常的数量较多,为14.84%。不同浓度褪黑素处理的体胚诱导率均于180 d后增长较快,且低浓度的褪黑素有利于体胚萌发与正常发育,2,4-D诱导的愈伤组织无体胚形成。     

防风愈伤组织培养研究

以防风为试材,研究不同外植体、激素组合对愈伤组织诱导及不定芽分化的影响。结果表明:茎段是防风组织培养较为合适的外植体。茎段在添加2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 1.0mg/L的MS培养基上愈伤组织诱导率最高可达100%,叶片在添加2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 1.0mg/L的MS培养基上愈伤组织诱导率可达75%;继代后的愈伤组织转到6-BA 1.0 mg/L+NAA0.5 mg/L的MS分化培养基上进行分化,其分化率达72%。     

菊花花瓣的组织培养技术研究

以紫色线状菊花花瓣为外植体,研究了不同培养基组成、外植体摆放方式、光照条件对其再生的影响.结果表明:菊花花瓣诱导适宜光照时间是12～16 h/d;花瓣花背向上比花背向下效果不定芽的诱导效果好,而在愈伤组织诱导时花背向下比花背向上效果好;MS+NAA 1.0 mg/L或2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L可作为外植体的愈伤组织诱导的培养基;MS+6-BA 1.0 mg/L能直接从花瓣上诱导产生不定芽;MS+IBA 0.2 mg/L+6-BA 1.5 mg/L丛生芽诱导率高,且产生的丛生芽质量高;1/2MS+IBA 0.3 mg/L为适宜的生根培养基.     

菠萝叶基愈伤组织诱导体细胞胚

以菠萝[Ananascomosus(L.)Merr.]吸芽上的叶基部组织为材料,研究了2,4-D、NAA、BA、TDZ在菠萝愈伤组织诱导体细胞胚过程中的影响。结果表明,2,4-D在体细胞胚诱导过程中起着极为重要的作用,其适宜浓度为5mg/L,适当浓度(1mg/L)的BA在降低畸形胚比例和增加体细胞胚发生率方面有重要作用,但BA也会促进愈伤组织分化不定芽;低浓度的TDZ与BA效果相似,在不同生长调节物质处理组合中,MS+0.01mg/LTDZ+5mg/L2,4-D培养基的体细胞胚发生率最高(97%)。低浓度NAA(2￣5mg/L)利于非胚性愈伤组织的增殖,而高浓度的NAA虽能促进体细胞胚发生,但这种体细胞胚很难继续增殖,在萌发时只生根不发芽。成熟体细胞胚在MS+0.2%活性炭上30d时的转株率为22.7%。     

地被月季‘Royal Bassino’高频再生体系的建立

 以地被月季‘RoyalBassino’为试材, 进行了组培快繁和外植体再生条件的研究。结果表明,以带有腋芽的茎段为外植体, MS中添加6-BA 1.5 mg/L和IBA 0.1 mg/L 为最适诱导培养基, 诱导出芽率100%; MS中添加6-BA 0.5 mg/L和IBA 0.05 mg/L可以获得最高增殖倍数(6.3) ; 而添加IBA 0.01 mg/L的1/2MS为最佳生根培养基, 生根率92%。试管苗经7 d驯化后, 移栽成活率在99%以上。分别以叶柄、叶盘和茎段为外植体进行再生培养, 以MS为基本培养基, 叶柄在添加噻苯隆(TDZ) 7μmol /L的诱导培养基中暗培养10 d后, 转接到添加6-BA 0.5 mg/L的再生培养基中光照培养约20 d, 可以获得57.1%的芽再生率。     

万寿菊组织培养体系的建立

以万寿菊为试材,采用叶片和茎段作为外植体,研究其组织培养不同阶段的最佳培养基,以建立万寿菊组织培养技术体系。结果表明:叶片是诱导愈伤组织的良好材料,适合叶片诱导愈伤组织的培养基是MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L;适合愈伤组织分化不定芽的培养基是MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L;适合生根的培养基是1/2MS+IAA 0.8mg/L+IBA 1.0mg/L。     

刺葡萄愈伤组织的诱导和分化培养

以刺葡萄叶片为材料,在1／2MS培养基上附加不同种类及浓度配比的植物激素,研究叶片愈伤组织的诱导及分化培养。实验结果表明：叶片愈伤组织的诱导较容易,最佳诱导培养基配方为以ZT1．0mg／L＋2,4-D2．0mg／L,诱导率可达100％,光培养条件下刺葡萄叶片愈伤组织的诱导率比暗培养的诱导率高。继代培养愈伤组织能诱导出根,但诱导出芽不易,刺葡萄叶片再生植株较难。增殖培养ZT以1．0mg／L＋NAA0．01mg／L为佳,1周增殖率可达1．292％。     

黄瓜(Cucumis sativusL.)花药培养

以卡罗尔、HH1-8-57与津绿农家乐3个不同基因型黄瓜品种为试材,在Kumar等、Song等和詹艳等试验研究基础上,设计试验分别探讨低温预处理时间、培养基成分(胚性愈伤组织诱导培养基、胚状体诱导培养基)和基因型等因素对黄瓜花药培养的影响。结果表明:在4℃低温预处理2d时,胚性愈伤组织诱导率显著高于其他处理;在MS+1.0mg·L-12,4-D+0.5mg·L-16-BA+3%蔗糖+0.8%琼脂培养基上胚性愈伤组织诱导率最高,达到81.3%;在MS+0.1mg·L-1NAA+3.0mg·L-16-BA+3%蔗糖+0.8%琼脂培养基上胚状体诱导率最高,为40.0%;基因型间胚性愈伤组织诱导率及胚状体诱导率差异显著,津绿农家乐品种胚性愈伤组织诱导率最高,达到81.1%,HH1-8-57胚状体诱导率最高,为40.0%。本研究从2份试材中成功地诱导出胚状体并获得了黄瓜单倍体再生植株。     

韭菜组织培养高频植株再生体系的研究

 通过对韭菜组织培养过程中激素配比、外植体、基因型、苗龄及生根条件的研究, 建立了一次性诱导成芽的高频植株再生体系。适于愈伤组织和不定芽分化的最佳培养基为MS + NAA 1 mg/ L+ BA mg / L, 在此分化培养基上91-1、91-8、保定红根、寿光马蔺韭和兰州小韭根尖培养的芽分化频率分别为78. 7%、83. 7%、81. 9%、76. 7 %和73. 3 %, 平均出芽数分别为40. 1 、46. 7 、36. 3 、35. 4 和44. 5 个,苗龄为7~ 10 d 的根尖最适于组织培养。随苗龄增加, 芽的分化频率呈下降趋势。无任何激素的MS0 培养基最适于不定芽的生根, 生根率达100%, 平均根数14. 5 条。卡那霉素( Km) 对植株再生有很强的抑制作用, 在Km 为20 mg/ L 时就完全抑制愈伤组织和不定芽的发生; 羧苄青霉素( Carb) 和噻孢霉素( Cef) 也抑制韭菜根尖培养的植株再生, Cef 的抑制作用更加显著, Carb 500 mg/ L 或Cef 300 mg/ L 完全抑制不定芽的再生; Timentin 对愈伤组织和芽的分化影响不大, 抑制性主要表现在出芽数随浓度升高而降低。当Timentin 浓度为500 mg/ L 时, 平均出芽数仍可达到23. 8 个, 为对照的49. 4% 。     

月季‘萨蔓莎’愈伤组织的诱导及植株再生

 以试管苗的小叶为外植体, 探讨了月季品种‘萨蔓莎’愈伤组织诱导及植株再生的方法。结果表明: 高浓度的生长素能诱导小叶产生愈伤组织, 经2,4-D 7.0～10.0 mg/L光下诱导愈伤15 d的小叶外植体, 在含TDZ 1.5 mg/L的MS培养基上光下培养约20 d后有白色假珠芽形成, 此芽暗培养在含NAA、ZT和GA3 的培养基上产生新的假珠芽和新的愈伤组织, 通过持续选择继代生活力高的组织, 约1年后获得可长期继代的愈伤组织, 到目前为止已保存了16个月。此愈伤组织在TDZ 1.0 mg/L、NAA 0.01 mg/L和GA3 0.1 mg/L的诱导下30 d内分化出不定芽, 在含BA 2.0 mg/L和NAA 0.01 mg/L的培养基上不定芽伸长形成正常植株。