不同炮制去心法对巴戟天多糖含量的影响

〔摘要〕目的比较不同炮制去心方法的巴戟天及其术心中多糖的含量〔方法采用80%乙醇回流提取,用改 进的苯酚一硫酸法测定多糖的含量〔结果巴戟天不同炮制品及其术心中多糖含量高低依次为:制巴戟天>巴戟肉> 盐巴戟天>巴戟天术心、结论巴戟天经甘草制有利于多糖的溶出,盐炙品的多糖含量低于巴戟肉,巴戟天术心多 糖含量最低、     

HPLC-ELSD法检测石榴中的游离糖含量

[目的]建立一种HPLC-ELSD分析方法,测定白皮甜石榴和红酸石榴2个不同品种石榴中的可溶性游离糖。[方法]采用超声水溶解提取石榴的游离糖分,以乙腈-水为流动相,氨基色谱柱,应用HPLC-ELSD测定其中的糖分组成及含量。[结果]当乙腈-水体积比为80∶20时,各游离糖组分分离效果良好。甜、酸石榴中的可溶性游离糖分均为果糖和葡萄糖。果糖的标准回归方程为lnCFru=-14.9440＋0.9424lnAFru,线性范围0.18～2.77mg/ml;葡萄糖的标准回归方程为lnCGlu=-14.0600＋0.9271lnAGlu,线性范围0.48～7.44mg/ml。白皮甜石榴中果糖和葡萄糖的含量分别为7.58%、6.66%,红酸石榴中的含量分别为3.18%、3.74%。[结论]甜石榴总游离糖含量是酸石榴的2倍,所建立的分析方法对水果糖类的测定具有一定的实际应用价值。     

HPLC-ELSD法测定梨果实中不同种类可溶性糖含量

采用高效液相色谱(HPLC)法测定4个品种梨果实中可溶性糖组分(葡萄糖、果糖、蔗糖、山梨糖醇)和含量。结果表明:高效液相色谱条件为CAPCELL PAK NH2(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,50℃柱温,流动相为乙腈-水(体积比为70∶30)溶液,流速为1.0 mL.min-1;蒸发光散射检测器(ELSD),漂移管温度为80℃,N2(氮气)流速为2.0 mL.min-1。在12 min内能准确检测出梨果实中4种糖,加标回收率为96.40%～103.20%。‘巴梨’、‘黄冠梨’、‘丰水梨’和‘砀山酥梨’果实中各种糖组分的HPLC-ELSD法测定结果表明,梨果实内主要的可溶性糖是葡萄糖、果糖、蔗糖和山梨糖醇,其中果糖含量最多,占总糖含量的43%～66%,其次为山梨糖醇和葡萄糖,分别占总糖含量的13%～28%和14%～18%,蔗糖含量最少,约占总糖含量的4%～12%。     

HPLC-ELSD法测定红树莓果实中水溶性糖含量

研究了红树莓果中水溶性糖含量的测定方法.采用HPLC-EISD法分别测定了红树莓果实中的葡萄糖、果糖和蔗糖的含量,测定值分别为37.81,40.19,2.88 mg/g.结果表明:葡萄糖、果糖和蔗糖分别在2.5～12.5,2.52～12.6,2.505～12.49 μg范围内线性关系良好,相关系数为葡萄糖r=0.999 9、果糖r=0.999 8、蔗糖r=0.998 9.该方法快速、简便、灵敏度高、重现性好,是测定红树莓中水溶性糖含量的理想方法.     

HPLC-ELSD法测定梅子提取物中糖和糖醇的含量

建立了一种高效液相色谱-蒸发光散射法（HPLC-ELSD）同时测定梅子提取物中果糖、葡萄糖、山梨醇、蔗糖、麦芽糖水合物、麦芽三糖、麦芽四糖的方法。分离采用Grace Prevail Carbohydrate ES色谱柱,柱温为30℃;流动相为乙腈-水,流速为1.00 mL/min;检测使用蒸发光散射检测器,漂移管温度为60℃,氮气流速为2.50 L/min。结果表明,果糖、山梨醇、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖水合物、麦芽三糖、麦芽四糖分别在34.69～2 220.00、16.22～1 038.00、38.66～2 474.00、24.53～1 570.00、22.91～1 466.00、6.09～390.00、14.69～940.00μg/mL范围内线性关系良好,精密度良好,重复性的相对标准偏差（RSD）为1.00%～4.09%,各目标物的回收率为85.5%～110.1%,精密度为0.3%～4.6%(n=6)。本方法在30 min内实现了糖和糖醇的分离,灵敏度和重复性检测较好,有效避免了溶剂及温度的影响,测量结果较准确且操作方便,可用于批量检测梅子提取物中糖和糖醇的含量。     

HPLC-ELSD测定豆科植物中D-松醇的含量

[目的]比较研究豆科植物中的D-松醇含量。[方法]采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）测定黄皮黄豆、绿皮黄豆、大豌豆、黑豆、红豆、豆角、荷兰豆、豌豆、毛豆、刀豆的D-松醇含量。[结果]D-松醇含量测定的标准曲线回归方程为：Y=1.421 1X＋6.276 4,r=0.826 5,其进样质量线性范围为0.377～1.844μg。青豌豆荚的D-松醇含量为0.084%,青豌豆子实的D-松醇含量为0.339%,青荷兰豆子的D-松醇含量为0.190%,青荷兰豆子实的D-松醇含量为0.342%,青毛豆荚的D-松醇含量为0.760%,青毛豆籽实的D-松醇含量为1.135%,青长豆角的D-松醇含量为0.203%,荷兰豆的D-松醇含量为0.342%,黄皮大豆的D-松醇含量为0.198%,绿皮大豆的D-松醇含量为0.229%,黑皮大豆的D-松醇含量为0.319%,赤豆、豌豆和刀豆中未检出D-松醇。[结论]D-松醇在豆科植物中广泛存在,不同生长期其含量差别较大。     

HPLC-ELSD测定心通口服液中黄芪甲苷的含量

[目的]建立心通口服液中黄芪甲苷含量的测定方法。[方法]采用超声提取方法,利用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）检测。流动相：乙腈-水（35∶65）。[结果]黄芪甲苷在4.06～8.12μg范围内呈线性,平均回收率为97.12%,RSD为1.54%。[结论]该方法简便、准确,可用于该制剂中黄芪甲苷的含量测定及质量控制。     

HPLC-ELSD法测定礼品西瓜果实可溶性糖的种和含量

[目的]建立以高效液相色谱-蒸发光散射法(HPLC-ELSD)测定西瓜果实糖分类型和含量的方法,为精准鉴定西瓜种质资源的糖分类型和测定其含量及西瓜品质育种提供参考依据.[方法]采用HPLC-ELSD法,设置色谱条件采用Comosil Sugar-D柱(4.6 mm ID×250.0 mm),流动相为乙腈-水(体积比75:25),流速1.0 mL/min,柱温30℃;ELSD参数:漂移管温度80℃,气体流量1.60 mL/min,分析西瓜果实中可溶性糖的类型和含量.[结果]在10 min内准确检测出西瓜果实中葡萄糖、果糖和蔗糖3种糖,葡萄糖、果糖和蔗糖在线性范围0.25～3.00 mg/mL内线性关系良好,相关系数r果糖=0.9943、r葡萄糖=0.9997、r蔗糖=0.9988.加样回收率98.57％～101.36％;西瓜果实中果糖、葡萄糖和蔗糖含量分别为45.88、16.62和34.03 mg/g.[结论]HPLC-ELSD法具有操作简便、准确、重复性好等优点,可快速准确测定西瓜果实中糖的类型及其含量.     

HPLC-ELSD法测定食品中甜蜜素

[目的]采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD）建立测定食品中甜蜜素的方法。[方法]以C18柱分离,甲醇-0.01 mol/L乙酸铵（20：80,V/V）为流动相,使用蒸发光散射检测器进行检测。[结果]甜蜜素的线性范围为50～1000 mg/L,相关系数为0.9991,检出限为1.0 mg/kg,相对标准偏差为2.95%,平均回收率为98.48%。[结论]建立了食品中测定甜蜜素的HPLC-ELSD法。该方法准确度高、稳定性与重现性好且操作简单,为食品中甜蜜素含量的测定提供了一种准确、灵敏、快速的分析方法。     

不同产地益母草饮片中盐酸水苏碱含量差异分析

目的比较全国不同产地益母草饮片中盐酸水苏碱含量差异,为益母草的质量研究提供参考依据。方法按照2010版《中国药典》规定,采用HPLC-ELSD法测定各样品中盐酸水苏碱的含量。结果不同产地益母草饮片中盐酸水苏碱含量差异很大,在0.102%～2.142%之间。结论为保证益母草饮片的质量和疗效,建议选择规范化人工栽培的益母草。     

巴戟天内生真菌Cytospora rhizophorae中ProL蛋白的表达纯化及性质分析

【目的】从巴戟天内生真菌Cytospora rhizophorae中克隆proL基因,异源表达ProL蛋白并研究其理化性质,为解析ProL在合成Cytorhizins类新骨架活性化合物途径中的生物学功能奠定基础。【方法】利用PCR技术从C. rhizophorae中克隆proL基因,通过同源重组的方法将proL基因片段插入到pET28a原核表达载体,在大肠埃希菌Escherichia coli中异源表达,使用尿素对ProL蛋白梯度复性,采用SDS-PAGE技术和质谱测序对ProL蛋白进行分析和鉴定,运用生物信息学方法对ProL蛋白的氨基酸序列相似性进行分析,推测其编码蛋白的结构和功能。【结果】克隆得到proL基因的编码序列,开放阅读框全长909 bp,编码303个氨基酸,ProL蛋白分子式为C1495H2320N424O444S13,相对分子质量为33 754.22,原子数为4 696,等电点为5.69,为酸性蛋白。ProL蛋白在大肠埃希菌中以包涵体的形式大量表达,尿素梯度复性获得了纯度为98.9%的ProL蛋白。生物信息学分析发现ProL氨基酸序列在已知蛋白中与Aspergillus ibericus XP025570169.1的酰胺水解酶2相似性最高,为59.40%,其三维结构模型中包含8个α-螺旋和8个β-折叠,保守氨基酸序列为207～216位。【结论】ProL蛋白属于酰胺水解酶超家族,预测其为一种新颖蛋白,该蛋白可能在生成高度氧化的二苯甲酮类化合物途径中起水解作用。     

凹叶厚朴用于细胞悬浮培养的愈伤组织的制备研究

目的 研究凹叶厚朴适用于细胞悬浮培养的愈伤组织。方法 通过对基本培养基（B₅、MS和1/2MS）、外植体（茎段、顶芽和叶片）、激素浓度及组合进行筛选的方法进行厚朴愈伤组织诱导和继代研究。结果 B₅ 为最适合厚朴愈伤组织诱导的基本培养基;顶芽是最佳诱导愈伤组织的材料;最适合厚朴愈伤组织诱导的培养基为B₅+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA;最佳继代培养基为B₅+2.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA,愈伤组织生长倍数达到2.87倍。结论 初步筛选出凹叶厚朴用于细胞悬浮培养的愈伤组织,为凹叶厚朴细胞培养奠定基础。     

厚朴不同种源苗期生长模型的拟合

【目的】掌握厚朴不同种源苗期苗高、地径的生长规律及物候期参数和生长参数特征,为厚朴幼苗生产管理和优良种源筛选提供参考。【方法】对15个不同种源及2个种源区厚朴幼苗在苗期的生长状况进行连续观察,并用Logistic方程对其生长动态过程进行拟合,获得苗高、地径、物候期与生长特征参数。【结果】厚朴不同种源间苗高生长节律基本一致,速生期起止时间和持续时间存在较大差异,其中线性生长始期、线性生长末期和线性生长持续期最多分别相差21,22和18 d,线性生长量占总生长量的55%以上,该时期为幼苗生长的关键期;种源间幼苗地径的线性生长期、最大线性生长速率、线性生长速率均存在较大差异;苗高与线性生长始期、线性生长末期、最大线性生长速率、线性生长速率、线性生长量呈显著或极显著相关,地径与后三者及苗高呈极显著相关,线性生长始期和线性生长末期共同决定线性生长期和线性生长量。种源A区厚朴幼苗的苗高线性生长期比种源B区长15 d左右,种源A区厚朴幼苗的苗高和地径的最大线性生长速率、线性生长速率和线性生长量均高于种源B区。【结论】用Logistic方程可以拟合厚朴幼苗苗高和地径的生长动态,建议在幼苗线性生长期加强肥水管理,延长该生长期,促进线性生长量,提高线性生长量占总生长量的百分率。     

芦笋胆固醇C-22羟化酶基因 AoCYP90B27的克隆及表达模式分析

为研究芦笋（Asparagus officinalis L.）甾体皂苷合成中下游胆固醇C-22羟化酶基因,首先通过基因组家族结合芦笋的转录组分析,筛选、预测到1个胆固醇C-22羟化酶基因 AoCYP90B27,通过qRT-PCR进行组织表达模式分析,利用plantCARE数据库进行启动子顺式作用元件预测分析及该基因在脱落酸、水杨酸及茉莉酸甲酯等激素及干旱胁迫中的表达情况分析。结果表明, AoCYP90B27基因的cDNA全长为1 443 bp,编码含有481个氨基酸残基,启动子区域除含有TATA-box等保守元件,还存在与非生物胁迫和激素诱导响应的作用元件。该基因在不同组织器官中均有表达,根中的表达量显著高于地上部组织。在干旱胁迫、脱落酸、水杨酸和茉莉酸甲酯诱导处理及其不同处理时间其基因的表达量明显不同,推测该基因在皂苷合成的下游途径中能催化胆固醇C-22羟基化,形成多样的皂苷元参与多年生芦笋根系的逆境胁迫应答,为阐明皂苷合成的分子机制奠定了实验基础。     

土壤养分、种植年限和种植方式对巴戟天寡糖含量的影响

目的 分析土壤养分、种植年限、种植方式(林下和非林下)等3个重要因子对巴戟天Morinda officinalis品质核心指标寡糖含量的影响,为我国“四大南药”之一的巴戟天种植提供理论与数据支撑。方法 在广东省德庆县巴戟天道地产区选择18个非林下种植点,采用随机多点采样法采集土样和不同生长年限巴戟天样品,测定土壤养分和巴戟天肉质根寡糖含量,分析土壤养分含量和不同生长年限与巴戟天寡糖含量的关系;分别采集林下和非林下种植的巴戟天样品,通过主成分分析探究林下和非林下种植方式巴戟天的品质差异。结果 土壤pH与巴戟天蔗糖含量呈极显著的负相关关系(P<0.01),与寡糖含量呈显著正相关关系(P<0.05);土壤全磷、速效磷、速效钾与1-蔗果三糖、耐斯糖含量呈显著正相关关系(P<0.05)。3年生巴戟天的蔗糖含量显著高于其他生长年限的巴戟天,4年生巴戟天的1-蔗果三糖含量显著高于2年生巴戟天。林下种植巴戟天的品质优于非林下种植。结论 提高土壤中速效磷与速效钾含量可以提高巴戟天品质,4年生巴戟天的药材品质最佳,林下种植有利于提高巴戟天品质。     

山茱萸的营养成分及保健作用

研究了秦岭山区山萸肉中维生素、矿物质、氨基酸、有机酸和山茱萸皂甙的含量，结果表明：人体所必需的几种维生素含量较高，其中维生素Ｃ含量达１８４０．５ｍｇ／ｋｇ；矿质元素种类较多，有较丰富的宏量元素（如Ｃａ，Ｍｇ等）及一些重要的微量元素（如Ｓｅ，Ｃｏ等）；氨基酸含量为９３５８．３６ｍｇ／ｋｇ，远高于一般水果；总酸量达９．４４％，其中熊果酸是一般水果不具有的。此外，对山萸肉的保健作用与化学成分的关系进行了分析     

不同组织器官中华蛇根草绿原酸含量的比较研究

目的 比较中华蛇根草不同组织器官中绿原酸的含量。方法 选用Inertsil C₁₈色谱柱,以甲醇-0.02%磷酸溶液（20：80）为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为325 nm,柱温40℃。结果 绿原酸在0.027~1.700 μg（r=0.999 9）范围内线性关系良好。2月花期采收的中华蛇根草茎、叶、花中绿原酸的含量分别为3.39、0.77、22.79 mg/g。结论 中华蛇根草不同组织器官绿原酸含量差异较大,其中花含量最高。该方法能准确、快速地进行定性定量检测,可用于中华蛇根草中绿原酸含量的测定。     

以诺丽茎段为外植体的无籽基因转化研究

以诺丽无菌苗不带腋芽的茎段为转化材料,采用根癌农杆菌介导法,将含有无籽基因的质粒pCAMBIA1305.1导入到诺丽细胞中,通过Kan快速筛选、PCR检测等方法对转化子进行鉴定.实验结果表明:抗性芽的平均分化频率为42%,经过PCR检测,以茎为外植体进行遗传转化的转化率为5.4%.在转化过程中,有些植株可能会发生饰变.该实验初步证实已把无籽基因转入诺丽,后续需Southern杂交进一步验证.     

不同保存方法对少孢节丛孢菌存活及捕食活性的影响

为了探讨少孢节丛孢菌分生孢子及菌丝长期保存方法,以分生孢子萌发、菌丝生长、产生捕食器和捕食能力为指标,比较少孢节丛孢菌分生孢子及菌丝在不同保存条件下的保存效果。结果表明,在3种保存溶液中、-20℃条件下冻存3a的分生孢子没有萌发长出菌丝,而在4℃条件下保存3a的分生孢子仍可以萌发长出菌丝,且能产生捕食器捕食线虫。在固体培养基CMA和YPSSA生长的菌丝于-20℃或4℃条件下保存2a,菌丝仍可生长并产生捕食器捕食线虫;但在-20℃保存2a的菌丝复苏后接种对绵羊粪便中线虫的捕食活性较冻存前有所下降。研究结果提示,少孢节丛孢菌分生孢子可在3种保存溶液中4℃条件下及在固体培养基CMA、YPSSA中于-20℃或4℃条件下均可长期保存,但在3种保存溶液中4℃条件下菌株的捕食活性最高。     

山茱萸果渣不溶性膳食纤维的制备工艺及性能研究

【目的】以山茱萸榨汁后的果渣为原料,研究制备不溶性膳食纤维(IDF)的最佳工艺。【方法】采用化学法提取工艺,通过预试验选择最佳工艺路线,并利用星点设计-响应曲面法优化工艺条件。以NaOH浓度、液料比、温度作为自变量,以产品质量、IDF含量和产品持水力三者所得综合指标(综合指标值=产品质量×0.1+IDF含量×0.01+持水力)作为因变量。对试验结果进行拟合,并对最佳工艺条件下制备的山茱萸果渣IDF的化学组成和部分特性进行分析。【结果】拟合方程结果显示,二次项回归方程优于线性方程和三次项方程,并以二次项回归方程建立了预测模型。用预测模型计算所得的制备山茱萸果渣IDF的最佳反应条件为:NaOH浓度0.421 4mol/L、液料比19.643mL/g、温度63.37℃,此条件下作用2h,所得产品的综合指标预测值为19.337 0。在相近的试验条件下对预测结果进行验证,结果显示综合指标值为18.578 6,接近预测值。与原料相比,最佳工艺条件下制备的山茱萸果渣IDF的IDF含量及溶胀力、持水力、持油力均有很大提高,而蛋白质、脂肪含量明显降低。【结论】得到了制备山茱萸果渣IDF的最佳工艺条件,且所得产品的化学组成和特性明显优于原果渣。