香蕉ACS启动子酵母单杂交报告载体的构建

对香蕉ACS基因启动子进行分析，选取关键元件通过人工合成和套叠PCR技术得到一段191 bp长度含有3个重复元件的DNA序列，把该序列构建报告载体pMmakeHIS2，经过酵母单杂交实验，结果表明：载体构建成功，单杂交筛选转录因子效果良好。pMmakeHIS2转化效率达到1.6×106个克隆/3 μg，酵母单杂交获得156个阳性克隆，实验为研究香蕉ACS基因调控因子打下基础。     

高低含油量大豆成熟期胚抑制消减 cDNA文库构建及其差异表达基因分析

利用抑制性消减杂交（suppression subtractive hybridization, SSH）技术,以高含油量大豆品种“中豆32”和低含油量大豆品种“油春02-6”36天胚为实验材料构建消减cDNA文库。文库的插入片段集中在500bp左右，挑取766个克隆进行PCR筛选获得700个阳性克隆，经过点杂交筛选后选择了575个阳性克隆进行测序。经过同源性比对归并后得到237个差异表达基因，除10个未知基因外，其余涉及到蛋白贮藏、蛋白质降解、激素调节等多个方面。本文还对部分可能与油脂合成相关的差异表达基因进行了RT-PCR半定量和荧光定量PCR检测，并简要讨论了它们的功能，为进一步研究这些基因在大豆油脂合成过程中的作用奠定了基础。     

Δ6-脂肪酸脱氢酶基因克隆及其共转化表达载体的构建

采用RT-PCR的方法从海南玻璃苣中克隆了Δ6-脂肪酸脱氢酶基因(Δ6-dsa).DNA序列测定结果表明,Δ6-dsa全长1 347bp编码448个氨基酸.Δ6-dsa序列在genbank中采用BLAST程序进行同源序列分析,结果表明,Δ6-dsa核苷酸序列与克隆自美国德克萨斯州的玻璃苣Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的核苷酸序列完全相同.Δ6-dsa克隆进T-easy Vector后形成质粒pGΔ6-DSA.把质粒pGΔ6-DSA上的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因片段克隆进含有T-DNA和35S启动子的质粒pGIN22中,形成含有目的基因的表达载体pGIN23.把表达载体pGIN23与另一个含有T-DNA、启动子、筛选标记基因的表达载体PLPN28进行亚克隆,使得筛选标记基因和Δ6-dsa分别插入到同一质粒的2个相互独立的T-DNA内,构建成共转化表达载体pLIN61.     

欧文氏杆菌CXJZ95-198基因组文库的构建

采用改良鸟枪法构建了草本纤维精制高效菌种Erwinia carotovora CXJZ95-198的基因组文库,结合透明圈法,筛选到了8个甘露聚糖酶基因阳性克隆,并采用PCR方法对它们进行了分析鉴定,结果表明它们含有同一个甘露聚糖酶基因.     

利用酵母单杂交方法筛选大豆根融合基因表达cDNA文库

酵母单杂交体系通过筛选cDNA文库可直接得到与靶序列相互作用的蛋白质基因序列,是研究DNA-蛋白质相互作用和转录因子功能的最常用、最有效的方法之一.通过构建与Gal4p的激活结构域融合的表达cDNA文库,利用抗病相关基因启动子区的W-box顺式元件采用酵母单杂交方法对该文库进行了筛选,共得到4个阳性克隆.结果为进一步研究与顺式元件W-box相互作用的WRKY蛋白奠定了基础.     

褐飞虱对吡虫啉敏感性的时空变化及现实遗传力

为科学用药,采用稻茎浸渍法测定了我国7省（区）42个田间褐飞虱种群对吡虫啉的敏感性时空变化。结果表明,在1996－2003年,除了1997年广西桂林种群为低水平抗性（6.3倍）外,苏、皖、桂3省13个种群对吡虫啉为敏感至敏感性下降（<5倍）;然而,2005年苏、浙、皖、赣、湘、桂6省（区）16个大田种群对吡虫啉的抗性迅速上升,达高水平至极高水平抗性（79～811倍）;2006年,除江苏通州大田种群的抗性为627倍外,苏、浙、皖、赣、湘、桂、闽7省（区）11个种群的抗性为150～322倍,比2005年有一定程度下降,这可能与暂停使用吡虫啉有关。室内用吡虫啉对褐飞虱筛选18代,其抗性由筛选前的208.3倍上升到筛选后的1110.8倍,抗性现实遗传力（h2）为0.1414。这暗示褐飞虱对吡虫啉产生高水平抗性后,如继续使用吡虫啉防治,其抗性可能会进一步上升。还讨论了稻褐飞虱抗药性的治理策略。     

欧文氏杆菌CXJZ95-198基因组文库的构建

采用改良鸟枪法构建了草本纤维精制高效菌种Erwinia carotovora CXJZ95-198的基因组文库，结合透明圈法，筛选到了8个甘露聚糖酶基因阳性克隆，并采用PCR方法对它们进行了分析鉴定，结果表明它们含有同一个甘露聚糖酶基因。     

蓖麻成熟期胚抑制消减cDNA文库构建及其差异表达基因分析

利用抑制性消减杂交（suppression subtractive hybridization, SSH）技术,以高含油量蓖麻品种“油蓖5号”开花后第15d胚和36d胚为实验材料构建36d成熟期胚消减cDNA文库。文库的插入片段平均长度约400bp,随机挑取700个克隆进行PCR筛选,获得596个阳性克隆,经过点杂交筛选后选择了521个阳性克隆进行测序。经过同源性比对归并后得到96个差异表达基因,其中包括31个未知基因。已知基因涉及油脂合成、糖的分解、蛋白质贮藏与降解等多个方面。本研究还通过RT-PCR检测了部分可能与蓖麻油脂合成相关基因的差异表达水平,对其可能的功能进行了简要的分析。     

野生稻基因组抗性基因富集文库的构建

通过集成候选抗性基因克隆技术和磁珠富集文库技术以及可转化基因组文库技术,提出了基于野生稻基因组富集文库克隆野生稻新抗性基因的策略。包括构建野生稻可转化基因组文库,利用RecA重组蛋白介导生物素标记的探针对文库进行磁珠富集,构建野生稻基因富集文库,然后对富集文库的克隆进行鉴定分析,包括点杂交和克隆末端测序分析,最后对富集文库的阳性克隆进行全序列测定和功能验证。按照上述方法,构建了东乡普通野生稻和小粒野生稻可转化基因组文库,库容量分别达到1.58×105和2.68×105个克隆,进而构建了东乡野生稻基因组候选抗性基因富集文库,单克隆总数1 152个,对富集文库的菌落原位杂交筛选获得12个阳性克隆,对其中5个阳性克隆全序列测定结果表明,4个阳性克隆含有已克隆抗性基因的保守序列,证实构建候选抗性基因富集文库克隆野生稻新抗性基因的策略是可行的。     

△^6-脂肪酸脱氢酶基因克隆及其共转化表达载体的构建

采用RT—PCR的方法从海南玻璃苣中克隆了△^6-脂肪酸脱氢酶基因(△^6-dsa)。DNA序列测定结果表明，△^6-dsa全长1347bp编码448个氨基酸。△^6-dsa序列在genbank中采用BLAST程序进行同源序列分析，结果表明，△^6-dsa核苷酸序列与克隆自美国德克萨斯州的玻璃苣△^6-脂肪酸脱氢酶基因的核苷酸序列完全相同。△^6-dsa克隆进T—easy Vector后形成质粒pG△^6-DSA。把质粒pG△^6-DSA上的△^6-脂肪酸脱氢酶基因片段克隆进含有T—DNA和35S启动子的质粒pGIN22中，形成含有目的基因的表达载体pGIN23。把表达载体pGIN23与另一个含有T—DNA、启动子、筛选标记基因的表达载体pLPN28进行亚克隆，使得筛选标记基因和△^6-dsa分别插入到同一质粒的2个相互独立的T—DNA内，构建成共转化表达载体pLIN61。     

Genetic analysis for resistance to the green leafhopper, Nephotettix virescens (Distant), in some cultivars of rice, Oryza sativa L.

The genetics of resistance to green leafhopper Nephotettix virescens (Distant) was studied in 17 cultivars of rice (Oryza sativa L.). Seedlings at the one-leaf stage were infested with second- and third-instar nymphs of green leafhopper. Reactions to seedling injury were recorded 7–8 days after infestation. The reactions of F₁, F₂, and F₃ populations from the crosses of resistant varieties with susceptible parent TN1 revealed that resistance of Tilakkachray, Kalimekri 77-5, and Tilockkachari was governed by two dominant genes and resistance of IR42 was conveyed by a single recessive gene. Single dominant genes govern resistance in the remaining 13 cultivars. Allele tests revealed that a single dominant gene of Segon Perak and one of the two genes of Kalimekri 77-5 are allelic to Glh 1. The single dominant gene of Ernest, Bignou and ARC614 and one of the two genes of each of Tilakkachray, Kalimekri 77-5, and Tilockkachari are allelic to Glh 2. A single dominant gene, which is allelic to Glh 3, conditions resistance in Arai and IR30. The single recessive gene which conveys resistance in IR42 appears to be allelic to glh 4. The allelic relationships of one of the two genes of Tilakkachray and Tilockkachari and single dominant genes of Fulkari 653, Chao Pho Kha, Amoule Borome, Kabero, Aus Murali, IR28 and IR34, with each other and with Glh 5 are not known.     

水稻抗性基因Pi对福建省稻瘟病菌优势菌群的抗性分析

【目的】抗病品种的合理利用和布局是实现水稻抗瘟持久化的关键因子之一。为明确水稻24个抗性基因在福建省的抗病性及其应用前景,【方法】首先分别采用全国稻瘟病菌生理小种鉴别品种和CO39近等基因系来鉴定2012-2015年间从福建省各稻区种植的普感品种丽江新团黑谷上采集的347株稻瘟病菌单孢菌株的生理小种类型和致病型,再测定24个抗性基因对福建省稻瘟病菌的抗性。【结果】根据全国稻瘟病菌生理小种鉴别品种对菌株的抗感反应,可将供试稻瘟病菌的生理小种划分为6个群36个生理小种,其中ZA、ZB和ZC为主要种群,ZC15、ZD7和ZB15为优势生理小种。根据CO39近等基因系的接种结果,将供试稻瘟病菌划分为17个致病类型,其中I34.1为优势致病型。供试的24个抗性基因对347株福建省稻瘟病菌菌株的抗性频率不同,抗谱为9.80%~89.91%。其中,Pi-k~m、Pi-7(t)、Pi-9(t)、Pi-k~p、Pi-k、Pi-k~h、Pi-z~5和Pi-ta(1)等8个抗性基因的抗病性较强,抗谱均高于70.00%。【结论】说明这8个抗性基因在福建省具有较好的应用前景,育种时可以考虑联合利用这些抗性基因。同时,实验结果表明,这8个抗性基因对主要生理小种的抗谱和主要致病型的抗谱均值高于69.00%,与其对所有测试菌株的抗谱吻合。说明利用稻瘟病菌的优势种群或优势致病型来鉴定水稻品种的抗病性是可靠的。     

大豆高代抗虫转基因后代分子检测与抗蚜虫鉴定分析

采用PCR扩增对大豆抗虫转基因高代株系目的基因进行检测,并通过生物鉴定的方法检测转基因后代抗虫性.结果表明:在共转化的3个目标基因中,含有单基因植株共409株,双基因179株,三基因36株,占所检测植株总数的百分比分别为37.8%、17.0%和3.4%;含有单个pta基因的植株数量最多,为239株,占检测植株总数的22...     

水稻早世代稳定性的遗传分析

 利用具有早世代稳定特性的水稻(早稳）和常规品种作为主体亲本，进行了早稳×早稳、早稳×常规品种、常规品种×常规品种等三种类型的杂交。结果显示，在早稳×早稳组合和早稳×常规品种的一些组合中分别以不同频率出现早世代稳定株系，常规品种之间的杂交组合后代没有出现早世代稳定株系。水稻早世代稳定特性是早世代稳定水稻亲本所特有的,早世代稳定株系出现频率与杂交组合双亲有密切关系；早世代稳定性状既不是质量性状也不是数量性状，既不是隐性基因控制也不是显性基因控制。水稻早世代稳定特性可以通过杂交传递到F1单株，并以F2群体中的株系为传递的基本单位。稳定株系的农艺性状与相应F1单株农艺性状一致。另一方面，同一杂交组合的F2群体中，既有农艺性状整齐一致的稳定株系，又有按孟德尔分离规律的分离株系存在。初步推断水稻早世代稳定亲本中存在特有的控制因子，在杂种合子细胞分裂启动时作用于有丝分裂的开关基因，关闭有丝分裂，启动了减数分裂，体细胞减数分裂导致染色体重排，并产生纯合胚，形成了农艺性状整齐一致的F2株系。     

New genes for resistance to green leafhopper, Nephotettix virescens (distant) in rice, Oryza sativa L.

The inheritance of resistance to the green leafhopper, Nephotettix virescens (Distant) (Homoptera: Cicadellidae), in 12 cultivars of rice (Oryza sativa L.) was studied at Joydebpur, Bangladesh. The resistance of Kosatawee is governed by a single recessive gene. The remaining 11 varieties possess single dominant genes for resistance, which are different from the genes Glh 1, Glh 2, Glh 3 and Glh 5. The single dominant genes conveying resistance in TAPL 796, Ptb 18 and IR36 are allelic to each other but are non-allelic to the dominant resistance gene of Maddai Karuppan. The resistance genes in TAPL 796 and Maddai Karuppan were designated Glh 6 and Glh 7 respectively. The dominant resistance gene in Sulai is independent of Glh 6, but its allelic relationship to Glh 7 is not known. The allelic relationships of the dominant genes for resistance of Sulai, TAPL 628, TAPL 651, Leu-Wei-Theu, Bir-co-se-mao-17, Gu-win-gu-gi-goo, and Dikwee to Glh 6 and Glh 7 need to be investigated.     

Genome-wide association mapping of phenolic acids in tetraploid wheats

Phenolic acids are major components of cell walls in wheat and have important implications on human health as antioxidants with anti-tumor activity. Our objectives were to identify phenolic acid genes in wheat by single nucleotide polymorphisms (SNPs) detected within the coding sequences of candidate genes, and to identify chromosomal regions associated with single phenolic acids and total soluble phenolic compounds. A set of candidate genes involved in the biosynthesis of hydroxycinnamic acid derivatives were identified by comparative genomics. SNPs found in the coding sequences of six genes (PAL1, PAL2, C4H, C3H, COMT1 and COMT2) were used to determine their chromosomal location and accurate map position on two reference consensus linkage maps. The genome-wide association study (GWAS), based on genotyping a tetraploid wheat collection with 81,587 gene-associated SNPs, detected 22 quantitative trait loci (QTL) distributed on almost all durum wheat chromosomes. Two QTL for p-coumaric acid were coincident with the phenylalanine ammonia-lyase (PAL2) and p-coumarate 3-hydroxylase (C3H) genes on chromosome arms 2AL and 1AL, respectively. The availability of candidate gene-based markers can allow elucidating the mechanism of phenolic acids accumulation in wheat kernels and exploiting the genetic variability of phenolic acids content for the nutritional improvement of wheat end-products.     

转基因小麦目录

自1992年人类获得第一株转基因小麦以来,转基因小麦研究已获得了许多重大进展。目前国内外已有近200例小麦转基因的报道,其中将抗除草剂基因转入小麦的报道约80例,转抗病虫基因的报道近50例,转改良品质基因约有30例,转抗旱、耐盐基因近20例,转其他基因的也有不少报道。这些报道中,通过基因枪法转化的近120例、花粉管通道法转化的50例、农杆菌介导法转化的近20例。从转单基因到进行多基因组装,从改良生物胁迫和非生物胁迫的抗逆性,到改良品质、高产等生理和农艺性状,是未来转基因小麦的研究方向。本文比较系统地总结了转基因小麦的研究成果,以期为小麦转基因研究提供大量有价值的参考信息。     

三个粳稻品种的稻瘟和白叶枯病抗性遗传分析

分析了城特232、嘉23和浙湖8号等3个粳稻品种对稻瘟病菌ZD_1、ZE_1和ZF_1及白叶枯病菌8810-1的抗性遗传。结果表明,3个抗病亲本对ZD_1和ZF_1的抗性都带有2对显性重复基因,等位性测定表明其中至少有1对是等位的。对ZE_1小种的抗性均受1对显性基因控制,等位性分析三者的抗性基因各不相同。城特232和嘉23对白叶枯病抗性是由1对显性基因控制,而浙湖8号为2对显性互补基因控制。等位性测定表明城特232和嘉23的1对基因是等位的,但与浙湖8号的2对抗性基因是不等位的。推断了抗病亲本的可能的抗性基因。     

黄桃叶绿体基因组的组装与序列分析

以‘锦绣'黄桃为试材,利用Illumina NovaSeq 6000测定‘锦绣'黄桃的DNA序列,用SPAdes v3.10.1组装叶绿体基因组,以桃树叶绿体基因组为参考,对其进行叶绿体基因组特征和进化树分析,为进一步开展‘锦绣'黄桃遗传与鉴定学研究奠定良好基础。结果表明：‘锦绣'黄桃叶绿体基因组全长为157 786 bp,具有典型的四分体环状结构,GC含量为36.77%,AT含量为63.23%,包括1个大单拷贝区（LSC）、1对反向重复区（IR）和1个小单拷贝区（SSC）,序列长度分别为85 924、26 381、19 100 bp,LSC、IR和SSC区域中的GC含量分别为34.61%、42.58%、30.41%。‘锦绣'黄桃的叶绿体基因组共注释得到130个基因,包括85个蛋白编码基因、37个tRNA基因和8个rRNA基因;按照功能分类将其分为光合作用相关基因、自我复制相关基因、其他基因和未知功能基因4大类,在这些基因中包括18个双拷贝基因,分别是1个NADH脱氢酶亚基基因（ndhB）、4个自我复制基因（rpl2、rpl23、rps12、rps7）、4个rRNA基因（rrn16、rrn23、rrn4.5、rrn5）、7个tRNA基因（trnA-UGC、trnI-CAU、trnI-GAU、trnL-CAA、trnN-GUU、trnR-ACG、trnV-GAC）、2个未知功能蛋白基因（ycf1、ycf2）。在‘锦绣'黄桃叶绿体基因组中查找248个SSR位点,分布在LSC、SSC、IR区域的SSR数量分别为165、44、39个,占比分别为66.53%、17.74%、15.73%,以单核苷酸重复占绝对优势,主要是A/T,其次是三核苷酸类型,其优势重复单元类型是ATA、TAT和TTA。进化树分析表明,‘锦绣'黄桃与桃树（Prunus persica,MH169125.1）亲缘关系最近。本研究建立了适于‘锦绣'黄桃完整叶绿体基因组组装及其特征分析的方法,为‘锦绣'黄桃的鉴定和系统发育研究奠定基础。     

稻米表观直链淀粉含量由两对非等位基因控制

利用籼粳交(02428/特青)花培DH群体,研究了稻米表观直链淀粉含量(AAC)及其组成因子——热水不溶性直链淀粉含量(HISAC)和热水可溶性直链淀粉含量(HSAC)的遗传特性。结果表明,HSAC和HISAC都表现为一对主效基因遗传,且两者表现为连锁遗传关系。用Amy-s(t)表示控制HSAC的基因,用Amy-i(t)表示控制HISAC的基因,两基因的连锁遗传距离为12.9 cM。由于Amy-s(t) 和Amy-i(t)相互连锁,因此AAC在总体上表现为一对基因遗传。