紫外线对柑桔原生质体的影响初探

用强度约为５６μＷ／ｍｍ２的紫外线ＵＶ分别照射Ｐａｇｅ和Ｍｕｒｃｏｔ原生质体３０ｓ、１ｍｉｎ和５ｍｉｎ,发现随着辐照时间的延长,原生质体活力趋于下降。Ｍｕｒｃｏｔ的原生质体较Ｐａｇｅ的原生质体对ＵＶ敏感。辐射１ｍｉｎ和５ｍｉｎ的原生质体在培养过程中未能出现分裂,而是慢慢地发生质壁分离,最后破裂。而辐射３０ｓ的原生质体与对照都恢复分裂形成细胞团并长出愈伤组织。     

月季原生质体分离条件的研究

采用质壁分离和冰冻预处理月季幼叶.用纤维素酶、果胶酶、甘露醇的混合酶液分离原生质体,并对影响原生质体产量及活力因素进行分析.结果表明,纤维素酶对原生质体产量有极显著影响,适宜月季幼叶原生质体提取的酶液组合为:纤维素酶1.5%、果胶酶0.5%、甘露醇0.6 mol/L、酶解12 h;质壁分离后,原生质体产量增加,但活力降低;冰冻处理使产量提高,处理12 h时,原生质体活力达到最高.     

马铃薯成熟花粉原生质体分离

 初步研究了马铃薯成熟花粉原生质体的分离条件,首次采用"低温-萌发-酶解"三步法从马铃薯成熟花粉中分离出原生质体。其分离途径是：经6℃低温处理的成熟花粉在萌发液中萌发出短花粉管时转入酶液。在酶液作用下,花粉发生质壁分离,花粉管脱落,随后原生质体缓慢地从花粉管断裂处挤出。在萌发30 min和1.0 mol·L-1甘露醇渗透压下,原生质体分离效果最佳,分离率最高达19.40%。用0.1%荧光增白剂检测脱壁完全,FDA荧光检测表明花粉原生质体具有生活力。     

野大麦幼根和幼叶悬浮细胞系的原生质体培养

以野大麦的幼根,幼叶为外植体,诱导愈伤组织,建立悬浮细胞系,利用胚性悬浮细胞系进行质壁分离处理再游离原生质体,在不同的光照条件下进行原生质体培养,并由原生质体再生出小细胞团。     

野大麦幼根和幼叶悬浮细胞系的原生质体培养

以野大麦（Ｈｏｒｄｅｕｍｂｒｅｖｉｓｕｂｕｌａｔｕｍ（Ｔｒｉｎ．）Ｌｉｎｋ）的幼根、幼叶为外植体,诱导愈伤组织,建立悬浮细胞系。利用胚性悬浮细胞系进行质壁分离处理再游离原生质体,在不同的光照条件下进行原生质体培养,并由原生质体再生出小细胞团。     

木薯叶片原生质体分离条件研究

本试验以木薯叶片为材料,研究了质壁分离时间、酶液组合、酶解时间、酶液中甘露醇浓度等不同因素对原生质体分离的影响.结果表明:叶片在CPW9M溶液中质壁分离0.5h后,置于1％离析酶+0.5％纤维素酶+1％半纤维素酶+9％甘露醇的酶液中,黑暗条件下酶解14～16 h,其原生质体产量和活力最高.     

水分胁迫对柑橘叶片和根系细胞超微结构的影响

以枳壳、枳橙、纽荷尔、山下红、沙田柚为试材,应用JEM-1010型透射电镜观察研究了不同水分胁迫下柑橘叶片和根系细胞超微结构的变化.结果表明,柑橘叶肉细胞及叶绿体超微结构随水分胁迫强度的增加而受损加剧.在正常灌水条件下,叶片结构完整,叶绿体片层排列均匀、整齐;60%土壤含水率处理下,枳橙和枳壳叶片大部分细胞刚开始质壁分离,但纽荷尔、山下红、沙田柚大部叶肉细胞已经开始质壁分离,叶绿体变形,片层紊乱,排列发生变化,淀粉粒数量减少;40%土壤含水率处理下,绝大部分叶片细胞已经质壁分离,叶绿体形状发生变化,结构被破坏,基粒片层排列紊乱;20%土壤含水率处理下,枳橙、枳壳叶片绝大部分细胞已经质壁分离,叶绿体形状发生变化,叶绿体的双层膜损坏,结构解体,基粒片层结构被破坏,而纽荷尔、山下红、沙田柚叶片绝大部分细胞结构已经被破坏,叶绿体与其他细胞器向细胞中心漂移并缩于细胞中心,结构被完全破坏.水分胁迫对纽荷尔,山下红,沙田柚叶肉细胞及叶绿体超微结构的破坏程度比枳壳、枳橙严重,说明枳壳,枳橙的抗旱能力比栽培品种纽荷尔、山下红、沙田柚强.柑橘根系细胞的超微结构亦有类似的变化,随水分胁迫强度的增加而受损程度加剧.     

小麦＋多花黑麦草不对称体细胞杂交获得杂种再生植株

为转移野生种的有利性状，进行了小麦体细胞不对称杂交研究，由小麦品种“京花１号”和多花黑麦草的悬浮系分离原生质体通过电融合得到了大量的再生愈伤组织，并分化出了９９株绿苗和大量白化苗。同工酶检测表明，所得到的植株带有多花黑麦草的部分遗传性状，是真杂种，为抑制亲本原生质体的分裂，分离原生质体前，多花黑麦草的悬浮细胞用软Ｘ－射线照射，以杀死部分细胞核，小麦的原生质体用２￣４ｍｍｏｌ／Ｌ的ＩＯＡ室温暗处理１     

新抗生素B—3543生产菌原生质体制备和再生条件

新抗生素Ｂ－３５４３生产菌的菌丝在１号和２号培养基上生长最佳，用溶壁酶酶解经洗涤和过滤纯化，可制得纯度在９４％以上的原生质体，其再生率在７７％以上，在３１４株再生株中获得１株高产菌株Ｒ－２０３，传代后其效价在６５００Ｕ左右。     

拟布里特班克虫草(Cordyceps brittlebankisoides Liu & Liang)原生质体形成及再生

研究了拟布里特班克虫草——金龟子绿僵菌大孢变种原生质体的分离制备条件，以10～15mg／mL溶壁酶为酶液、0．7mol／L NaCl为渗压稳定剂，30℃处理1．5h是其原生质体最适合的分离条件。对原生质体释放和再生的形态学过程进行了观察和描述。     

低温处理对不同耐寒性黄瓜幼苗叶片超微结构的影响

应用透射电镜观察了低温处理对黄瓜幼苗叶片超微结构的影响.结果表明,低温胁迫对耐寒性不同的黄瓜幼苗叶片超微结构的影响程度不同,低温胁迫对耐低温品系叶片超微结构的破坏较小,发生轻微质壁分离,叶绿体内淀粉粒减少,少部分线粒体形状发生改变,其他无明显差异,而低温胁迫对冷敏感品系叶片超微结构的破坏较大,发生严重质壁分离,叶绿体被膜解体,基粒片层解体,线粒体膜破坏.     

水稻小孢子原生质体分离研究

初步研究了分离水稻小孢子原生质体的条件,首次从具小萌发孔的水稻小孢子中分离出原生质体．小孢子原生质体的分离途径是：小孢子在混合酶液作用下,质膜先脱离小孢子壁,然后原生质体缓慢地从萌发孔中挤出．混合酶液中的渗透压高低和分离时的温度条件对小孢子原生质体的分离有很大影响,在２４℃温度和０．６ｍｏｌ／Ｌ甘露醇的渗透压下分离效果最佳,此时原生质体的分离率达到９．８％～１１．２％．     

蕙兰原生质体分离条件的研究

用蕙兰无菌苗的幼叶和幼原球茎以及花蕾时的花瓣和花粉块为材料，研究了纤维素酶（商品名ＯｎｏｚｕｋａＲ－１０）浓度、渗透压稳定剂甘露醇浓度和酶解时间等因素对蕙兰原生质体分离的影响，结果表明：①花粉块和花瓣的分离条件为１．５％纤维素酶、０．３％果胶酶、１１％甘露醇、酶解时间６．５ｈ时，其原生质体最高得率分别为４．５６×１０６和２．１２×１０６个／ｇＦＷ。②幼叶的分离条件为１．０％纤维素酶、０．３％果胶酶、１３％甘露醇、酶解时间２０ｈ时，其原生质体最高得率为３．３６×１０６个／ｇＦＷ。③幼原球茎的分离条件为１．０％纤维素酶、０．３％果胶酶、１１％甘露醇、酶解时间１６ｈ时，其原生质体最高得率为１．８７×１０５个／ｇＦＷ。此外，花粉块与叶片的原生质体溶液中杂质很少，有利于提纯；花瓣原生质体溶液中碎屑较多，且有少量的针晶；原球茎原生质体溶液中的淀粉粒与针晶很多，非常不易提纯。因此，花粉块与叶片为蕙兰原生质体分离的较好材料     

苧麻子叶原生质体的分离和初步培养

在成功建立麻悬浮细胞原生质体再生植株技术体系的基础上，对麻子叶原生质体的分离和培养进行了研究。以２℃冷藏或不冷藏的真叶初露期的绿色子叶，用３％ＣｅｌｌｕｌａｓｅＲ－１０，０．５％ＭａｃｅｒｏｚｙｍｅＲ－１０的ＣＰＷ０．６ｍｏｌ／Ｌ甘露醇混合溶液处理５ｈ，原生质体产量最高，可达５×１０６个／ｇ鲜重，原生质体以海藻酸钠包埋培养在附加２，４－Ｄ０．５或１．０ｍｇ／Ｌ，ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ的ＫＭ８ｐ培养基上，仅发生少数几次分裂。     

钙离子对曲霉原生质体的保护与促再生效应

研究了光照和黑暗条件下,钙离子浓度,处理时间对曲霉原生质体的保护和促再生效应。结果表明：黑暗下钙处理使原生质体数量比对照高,９ｈ处理比对照原生质体数量高达１．４３倍和１．６７倍,而光照下,钙处理反而使原生质体数量比对照低。黑暗下,不同浓度钙处理使黑曲霉原生质体再生提高１．４７倍到３．４０倍,使米曲霉提高１．０８倍到２．５８倍,二菌株钙促再生的最佳处理时间分别为２ｈ和４ｈ,最大再生率分别为２８．０８     

平菇原生质体制备及再生培养研究

平菇菌丝原生质体的释放以菌龄４～６ｄ的幼嫩菌丝,用２％Ｌｙｗａｌｚｙｍｅ采用０．６ＭＫＣｌ为渗稳剂在ｐＨ值为５．５、温度为３５℃、酶解２～２．５ｈ生长较好,可达１０７个／ｍＬ,孢子释放原生质体在１．５％溶壁酶和１．５％纤维素酶混合作用,同样外界条件下原生质体转化率可达１００％。原生质体再生以２号培养基在０．６Ｍ甘露醇的作用下,用载片悬浮滴式再生法,再生率可达１２．３％。     

水稻小孢子原生质体分离研究

初步研究了分离水稻小孢子原生质体的条件,首次从具有小萌发孔的水稻小孢子中分离出原生质上孢子原生质体的分离途径是：小孢子在混合酶液作用下,质膜先脱离小孢子壁,然后原生质体缓慢地从萌发孔中挤出,混合酶液中的渗坟高低和分离时的温度条件对小孢子的原生质体的分离有很大影响,在２４℃温度和０．６ｍｏｌ／Ｌ甘露醇的渗透压下分离效果最佳,此时原生质体的分离率达到９．８－１１．２％。     

不同供体原生质体前处理方法对甘蓝与萝卜属间原生质体融合植株？…

用酶法分离甘蓝下胚轴原生质体和萝卜叶肉原生质体，对供体原原质体（萝卜）进行融合前单因素（酶ＥｃｏＲＩ）或双因素复合处理（酶ＥｃｏＲＩ＋ＵＶ０．０３５～０．１０５Ｊ／ｃｍ＾２），用ＰＥＧ法诱导甘蓝与萝卜属间非对称性原生质体融合。结果表明，（１）不同处理方法对植株再生率有明显影响，对称性融合植株再生率为８．５％，非对称性融合植株再生率低３个百分点；单因素处理植株再生率达１１％，双因素复合处理植株再生率     

陆地棉473A核雄性不育系小孢子败育的细胞学研究

陆地棉洞A型衍生棱雄性不育系473A小孢子败育过程的细胞学观察结果表明,大部分花粉母细胞能正常地形成,但其胞质融合以及粘连现象较为普遍;减数分裂过程不正常,常能观察到中期Ⅰ,后期Ⅰ等时期的落后单价体以及染色体的不均衡分离,并产生一分、二分、三分以及多分孢子;主要败育时期是单核早期,在小孢子外壁加厚,刺状外突后,它的原生质体就急剧解体,走向败育,少部分小孢子的败育可延迟至单核中期。绒毡层、中层的发育和解体与小孢子的败育关系不大。     

大花蕙兰原生质体分离的影响因素研究

本文以大花蕙兰为材料，采用正交试验的方法进行了取材部位，纤维素酶浓度，甘露醇浓度以及酶液各成分的浓度等不同因素对其原生质体分离影响的研究。结果表明，以叶片为材料，在１％纤维素酶＋０．３％果胶酶＋０．２％半纤维素酶＋１１％甘露醇的组合中酶解，经２５±１℃，３０ｒ／ｍｉｎ，筛网过滤，离心洗涤，漂浮纯化，获得的原生质体产量最高，可达到１０￣６个鲜重。