基于RSAP标记的10个白杨派无性系指纹图谱构建及遗传分析

【目的】评判限制性位点扩增多态性(RSAP)标记对杨树无性系良种的鉴定效果,为杨树种质资源保护与品系鉴定提供依据。【方法】以白杨派10个优良无性系(秦白杨1号、秦白杨3号、秦白杨5号、84K、I-101、新疆杨、毛白杨30号、07-17-18、07-23-23、07-30-11)为材料,从9条RSAP引物组成的36对引物组合中筛选出6对扩增效果较好的引物组合,利用毛细管电泳检测法及POPGENE 32软件检测并分析扩增产物多态性,计算遗传多样性相关指标;选取多态性高且能区分所有无性系的引物,构建白杨派10个无性系的指纹图谱;利用NTSYS 2.1软件计算各无性系间的遗传相似系数,基于UPGMA进行聚类分析。【结果】6对引物组合从10个白杨派无性系中共扩增多态位点133个,平均每对引物扩增22.17个,平均Shannon信息指数为0.326,平均Nei’s基因多样性指数为0.488,表明无性系间具有较高的遗传多样性,遗传变异丰富。利用2个引物组合Rs2/Rs4和Rs2/Rs7的6个多态性位点,即可将10个白杨派无性系全部鉴别开来。10个白杨派无性系间的遗传相似系数为0.400～0.817,平均遗传相似系数为0.594。聚类结果显示,在遗传相似系数0.510处,10个白杨派无性系被分成两大类,新疆杨和毛白杨30号聚为一类,其余无性系聚为另一类,与其实际亲缘关系大致相符。【结论】RSAP分子标记可有效用于杨树种质资源鉴定及遗传分析,运用毛细管电泳检测可准确定位多态位点,一定程度上弥补了传统聚丙烯酰胺凝胶电泳的缺点。     

26份鸡冠花遗传资源亲缘关系的AFLP分析

利用扩增片段长度多态性(Amplified fragment length polymorphism,AFLP)分子标记技术,对26份鸡冠花种质资源进行亲缘关系探讨。结果表明:1)采用8对引物组合共扩增出8 063条谱带,其中多态性条带为7 959条,多态性条带比率为98.71%,平均每对引物扩增出1 007.9个位点和994.9个多态性位点。26份种质的相似性系数居于0.264 2~0.664 8,平均值为0.464 5,每个位点的有效等位基因数为1.078 0,平均多样性指数为0.208 7,遗传相似性系数最高的是1和3号,达到0.664 8,最低的是13和24号,为0.264 2。根据遗传相似性系数进行聚类分析,在遗传相似性系数0.46处切割时,可将图中26个鸡冠花种质资源分为3个类群:24号杂交种粉色头状鸡冠花单独聚为一类,8号多头红色鸡冠花单独聚为一类;其他24个鸡冠花材料聚为一类。根据不同的花型和花色,24个鸡冠花材料又可分成6个小类群。分子聚类结果和形态聚类结果较为一致。24号杂交粉色头状鸡冠花和8号多头鸡冠花‘威信’,与其他24个鸡冠花材料的亲缘关系较远;来源于相同地区的种质资源,如19和25号同为来自于甘肃的品种亲缘关系较近;来自科研所自育品种16和23号单独聚为一类,与其他种质的亲缘关系较远。     

黄淮产区地黄种质遗传多样性分析及SSR指纹图谱构建

为明确我国黄淮产区地黄种质间遗传多样性,解析种质间的亲缘关系,为该区地黄品种选育和种质鉴定提供依据,利用毛细管电泳技术和108对SSR引物对地黄种质进行分析,以获取种质间遗传相似系数、多态性引物、种质分辨率,利用软件TASSEL 3.0和Fig Tree(V 1.4.3)进行聚类分析和作图,选取多态性好、稳定性强的引物构建地黄种质的SSR指纹图谱。结果表明,共获得多态性引物50对,其片段长度在107～365 bp,种质间遗传相似系数在0.552～0.984,平均为0.729,野生种质的平均遗传相似系数明显低于地方品种和当前主栽品种。聚类结果显示,17个地黄种质分为3个亚群。选取并利用多态性强和分辨率高、扩增稳定的15对引物构建了地黄种质的SSR指纹图谱,实现了对每个地黄种质的快速鉴定。综上,SSR分析是实现地黄鉴真、聚类、DNA指纹图谱构建的一种有效方法。     

基于荧光SSR标记的10个白杨派种质资源遗传多样性分析

为分析白杨派优良无性系之间的遗传关系，采用毛细管电泳荧光SSR分子标记技术，构建10个白杨派优良无性系DNA指纹图谱，并进行遗传分析。结果表明，从20对引物中筛选出7对位点多态性高且重复性好的引物，共扩增出41个多态性位点，平均每对引物扩增5.9个，每个引物扩增多态位点在4~8之间。无性系间遗传相似系数区间为0.415~0.902，平均遗传相似系数为0.657，遗传变异性丰富。Shannon指数和基因多样性指数分别为1.433 4和0.694 3，表明无性系间具有较高的遗传多样性。聚类分析表明，10个白杨派无性系中，秦白杨1号、秦白杨3号、秦白杨5号与84K聚为一类，07-17-18、07-23-23与07-30-11与I-101聚为一类，与实际亲缘关系相符。利用2对多态性SSR引物PMGC-2020和PMGC2607构建了白杨派无性系指纹图谱，该图谱可将无性系全部区分开。     

秦岭山区野生猕猴桃资源遗传多样性分析

【目的】利用有效的分子标记技术,对秦岭山区野生猕猴桃的遗传多样性及系统进化关系进行研究,为猕猴桃新种质的挖掘和品种遗传改良奠定基础。【方法】利用随机扩增多态性DNA标记(RAPD)技术,对采自秦岭山区的野生猕猴桃24个优良单株和中华猕猴桃等6个种或变种及其品种的22份资源进行了遗传多样性和亲缘关系分析。【结果】通过引物筛选,用16个RAPD引物对46份猕猴桃资源扩增出235条带,其中227条为多态性条带,多态性位点比例为96.29%;各猕猴桃资源间的遗传距离为0.139 53~0.807 34;UPGMA聚类分析结果显示,‘野生99-13’与‘武植2号’、‘魁蜜’、‘金阳1号’、‘武植6号’、‘中华♂’和‘广西红肉’等中华系列猕猴桃(A.chinensis Planch.)聚在一起,其余23份野生猕猴桃与‘哑特’、‘秦美’、‘徐冠’、‘徐香’等猕猴桃品种遗传距离较近。【结论】24份秦岭野生猕猴桃资源中,‘野生99-13’属中华系列猕猴桃,其余23份均属于美味猕猴桃(A.deliciosa var.deliciosa)。     

基于EST-SSR标记的蓝莓品种指纹图谱构建及遗传多样性

为给蓝莓品种鉴别、优良杂交组合选配提供分子水平依据,从40对EST-SSR引物中筛选多态性良好的引物组合,选取其中引物CA231构建北高丛蓝莓栽培种的DNA指纹图谱、数字指纹图谱,利用非加权类平均法进行遗传多样性分析。结果表明:10个引物对组合共扩增出206个位点,其中多态性位点203个,占98.12%。每条引物的多态性位点数为9~48个,平均每条引物扩增出20.6个位点,平均多态性位点为20.3个。引物CA231扩增位点数最多,多态性比率为100%,且可以鉴别所有试验材料。构建30个北高丛蓝莓栽培品种的指纹图谱,并对其亲缘关系分析表明,在遗传相似系数为0.52时,30个品种聚为一类,当遗传相似系数为0.63时,77.7%的品种仍聚为一类。     

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为给蓝莓品种鉴别、优良杂交组合选配提供分子水平依据,从40对EST-SSR引物中筛选多态性良好的引物组合,选取其中引物CA231构建北高丛蓝莓栽培种的DNA指纹图谱、数字指纹图谱,利用非加权类平均法进行遗传多样性分析.结果表明.10个引物对组合共扩增出206个位点,其中多态性位点203个,占98.12％.每条引物的多态性位点数为9～48个,平均每条引物扩增出20.6个位点,平均多态性位点为20.3个.引物CA231扩增位点数最多,多态性比率为100％,且可以鉴别所有试验材料.构建30个北高丛蓝莓栽培品种的指纹图谱,并对其亲缘关系分析表明,在遗传相似系数为0.52时,30个品种聚为一类,当遗传相似系数为0.63时,77.7％的品种仍聚为一类.     

基于ISSR标记的藤本月季品种遗传多样性及其分子身份证的构建

38个藤本月季品种ISSR分子标记结果表明,23条引物共扩增出212个多态性位点,多态性比率高达72.35%。基因分化系数GS值变化范围在0.755～0.971,变化幅度较小,品种亲缘关系较近。38个藤本月季品种的群体遗传参数中平均观测等位基因数为1.973 5,平均有效等位基因数1.578 1,平均Nei's基因多样性指数为0.372 6,平均Shannon's信息指数为0.572 3。38个品种间的遗传分化系数(G_(st))为0.785 6,基因流(N_m)为0.058 4,表明38个品种遗传多样性丰富。由聚类分析图可知,38个品种可聚为3个大类7个分支。以23条引物中多态性较好且能区分这38个供试品种的17条引物对不同品种扩增条带进行统计,建立了38个藤本月季品种的分子身份证。     

20份马铃薯品种(系)指纹图谱构建和遗传多样性分析

为明确马铃薯品种(系)的亲缘关系,研究马铃薯品种(系)遗传多样性,利用形态学鉴定和SSR分子标记鉴定,对20份马铃薯材料进行遗传多样性分析,并构建其指纹图谱。形态学聚类结果表明,20份马铃薯材料在欧氏距离19.6处可分为3个类群,第Ⅰ类包括4份材料,第Ⅱ类包括2份材料,第Ⅲ类包括14份材料。SSR分子标记聚类结果表明,12对多态性丰富、条带清晰的引物,共扩增出91个标记位点,其中多态性位点有87个,多态性比率95.6%。每对SSR引物扩增得到多态性位点1～19个,平均7.3个。20份马铃薯材料间的遗传距离范围为0.148 1～0.655 2,平均遗传距离0.486 9,在遗传相似系数为0.51时可被分为3个类群,第Ⅰ类包括1份材料,第Ⅱ类包括8份材料,第Ⅲ类包括11份材料。选用引物STM1052和S25构建DNA指纹图谱,可对20份马铃薯材料进行区分。本试验可为马铃薯种质资源的利用、亲缘关系分析及品种鉴定提供理论依据。     

果桑遗传差异的SRAP和EST-SSR分析

为了从分子水平揭示果桑种质资源间的亲缘关系,指导其种质资源的鉴定和利用,以及快速选育优良果桑新品种,利用SRAP和EST-SSR 2种新型分子标记对供试果桑种质材料的遗传多样性进行分析。从42对SRAP引物中筛选出17对扩增条带清晰的引物,扩增得到306个位点,多态性位点达253个,多态性比率为82.68%,遗传相似系数(GS)为0.390 9~0.811 1。从26对EST-SSR引物中筛选出18对引物,扩增出297个位点,多态性位点236个,多态性比率为79.46%,遗传相似系数(GS)为0.506 8~0.858 1。综合2种分子标记得出供试材料的遗传相似系数(GS)为0.464 3~0.814 3。利用UPGMA构建聚类树状图,最终供试材料被聚为3个类群,呈现出明显的地理分布特征,并由此得出SRAP分子标记更适用于果桑种质亲缘关系的遗传差异分析。     

地黄品种遗传多样性RAPD分析

用CTAB法提取10个地黄品种幼叶的基因组DNA，用紫外分析法和琼脂糖凝胶电泳方法检测基因组DNA的纯度、大小和浓度。结果表明，从80条RAPD引物中分别筛选出适合于地黄RAPD标记分析的引物17条。17条RAPD引物对10个地黄品种（系）扩增出177条带，多态条带比率（PPB）为61．58％，平均多样性指数（I）为0．3135，遗传相似系数（GS）在0．63～0．93，平均GS为0．7545。RAPD标记的聚类分析结果，将10个地黄品种分为2类：第1类含有6个品种，包括组培85—5、大田85—5、组培9302、金白地黄、金状元和大田9302；第2类含有4个品种，包括北京1号、大红袍、地黄9104和野生地黄。     

23份烟草种质遗传多样性的SSR和ISSR标记分析

利用SSR和ISSR标记分析23份烟草种质遗传多样性。结果表明:8个SSR引物和8个ISSR引物分别检测到66个和113个多态性位点。不同烟草种质之间的遗传相异系数在0.3259~0.8588(SSR)或0.1369~0.8161(ISSR)。以SSR、ISSR标记分别聚类以及两种标记混合聚类均在0.63处将23个材料分为4类:2个类群和2个独立个类Coker147、Val16或G140,一类群以红花大金元为基础聚类,另一类群以NC82为基础聚类。两种标记的结果相似,均可用来进行烟草种质资源的遗传多样性分析。     

云南鹅群体遗传结构的随机扩增多态DNA分析

 采用随机扩增多态性DNA标记技术对云南鹅主产区6个不同地点的45个个体进行了群体遗传学分析，从85个随机引物中筛选出的23个引物对所有个体的总基因组DNA进行了PCR扩增，共检测出178条DNA片段，其中150条属多态性片段（多态率84.27%），计算了各座位在群体中的基因频率、杂合度和群体Shannon多样性指数等参数。结果表明：云南鹅的群体遗传变异较丰富。     

鱼腥草RAPD分子标记的多态性

采用RAPD（随机扩增多态性DNA）分子标记技术对全国鱼腥草Houttuynia cordata主产区23个种源24个样本进行研究,旨在阐明鱼腥草的遗传关系和遗传多样性,为鱼腥草新品种选育、品系鉴别提供理论依据。结果表明,160条RAPD引物中筛选出23条具有多态性的引物,共检测到165条清晰的条带,其中多态性条带有128条,占总条带的77.58%,平均每条引物可扩增到7.1条带,多态性条带5.5条,说明鱼腥草种内遗传多样性水平较高。通过聚类分析,可将鱼腥草样本分为3个类型,其分类和鱼腥草的形态特征等生物学特性存在显著的相关性,同一类型中遗传多样性与种源的地理分布存在一定关系。     

杏鲍菇种质资源遗传多样性的RAPD分析

[目的]找出一种适合杏鲍菇自身的分子标记方法,为其亲缘关系研究提供借鉴。[方法]利用随机扩增多样性DNA(RAPD)对23种来自我国不同地区的杏鲍菇品种进行遗传多样性分析,寻找一种适合杏鲍菇自身的分子标记方法。[结果]筛选出的12个RAPD引物扩增出谱带121条,多态性谱带95条,多态率为78%,表现出丰富的RAPD多态性;利用NTYS-PC2.1软件进行UPGMA聚类分析,可将该23份材料分为5大类,存在较大的遗传差异性。[结论]RAPD技术用于杏鲍菇遗传多样性的分析是有效的,并且能检测到更高的品种间遗传差异。     

地黄肌动蛋白基因片段的克隆与序列分析

[目的]克隆与分析地黄肌动蛋白基因片段。[方法]根据与地黄相近物种肌动蛋白基因序列的保守区设计兼并引物,通过RT-PCR方法扩增地黄编码区肌动蛋白基因。[结果]扩增片段全长为724 bp,对应编码240个氨基酸。序列比对分析发现其与其他高等植物肌动蛋白基因核苷酸序列同源性在80%以上,氨基酸序列在90%以上。[结论]系统进化分析表明,扩增到的地黄肌动蛋白基因与烟草actin7基因有较近的亲缘关系。     

地黄肌动蛋白基因片段的克隆与序列分析(英文)

[Objective] The aim of this study is to clone and analyze the actin gene from Rehmannia glutinosa. [Method] Degenerate primers were designed according to the conserved regions of actin sequences of Rehmannia glutinosa and its similar species,RT-PCR was next conducted to amplify the actin gene from Rehmannia glutinosa. [Result] The amplified fragment is 724 bp and correspondingly 240 amino acids. The BLAST results indicate that the homology between the amplified fragment and other higher plants for actin gene sequences and amino acid are more than 80% and 90%,respectively,suggesting that the amplified fragment is the actin gene of Rehmannia glutinosa. [Conclusion] Phylogenetic analysis shows that the actin gene of Rehmannia glutinosa has an intimate genetic relationship with actin7 gene of Nicotiana tabacum.     

Cloning and Sequence Analysis of Actin Gene from Rehmannia glutinosa

[Objective] The aim of this study is to clone and analyze the actin gene from Rehmannia glutinosa. [Method] Degenerate primers were designed according to the conserved regions of actin sequences of Rehmannia glutinosa and its similar species,RT-PCR was next conducted to amplify the actin gene from Rehmannia glutinosa. [Result] The amplified fragment is 724 bp and correspondingly 240 amino acids. The BLAST results indicate that the homology between the amplified fragment and other higher plants for actin gene sequences and amino acid are more than 80% and 90%,respectively,suggesting that the amplified fragment is the actin gene of Rehmannia glutinosa. [Conclusion] Phylogenetic analysis shows that the actin gene of Rehmannia glutinosa has an intimate genetic relationship with actin7 gene of Nicotiana tabacum.     

重庆本地山羊群体遗传关系的RAPD分析

采用RAPD技术分析了重庆本地的板角山羊、川东白山羊和重庆黑山羊基因组池DNA的多态性及其亲缘关系。通过100种随机引物扩增筛选。12种多态引物共获得了16个多态标记。各群体间的遗传距离指数和SPSS分层聚类树形图表明：板角山羊与川东白山羊之间的遗传距离较远;重庆黑山羊和板角山羊的遗传距离较近,2者有着密切的亲缘关系。结果还发现,板角山羊、川东白山羊和重庆黑山羊群体都具有一定的遗传稳定性。