牛血清乙酰胆碱脂酶的分离纯化

以牛血清为原材料，采用硫酸铵分级沉淀、Sephadex G—100凝胶柱和DEAE-纤维素DE23柱层析对牛血清中的乙酰胆碱酯酶进行分离纯化。结果表明，经以上三步分离纯化后，可获得电泳纯的乙酰胆碱酯酶，最终收集的酶液经聚丙烯酰胺pAGE凝胶电泳鉴定后，仅出现一条谱带；对Sephadex G-100凝胶和Sephadex G-75凝胶分离纯化乙酰胆碱脂酶的效果进行了比较．发现两者对乙酰胆碱酯酶的分离效果相差不大。     

鸡血液中乙酰胆碱酯酶的提取研究

[目的]为了研究硫酸铵盐析法在乙酰胆碱酯酶分离纯化中的效果,从而利用乙酰胆碱酯酶的活性变化反映农药的污染情况。[方法]采用硫酸铵盐析和等电点区分的方法从鸡血中提取乙酰胆碱酯酶,并探讨其适宜的pH值范围。[结果]结果表明:pH值4.5左右大量的杂蛋白能被除去,可获得较高乙酰胆碱酯酶得率;采用饱和度为50%~60%的硫酸铵盐析效果较好,据此得出较佳的提取工艺。[结论]该研究结果为后续鸡血AChE的提取、分离、纯化等工作提供了相应的参考,同时为利用乙酰胆碱酯酶指示环境受有机磷和氨基甲酸酯类农药污染的后续研究和应用提供了理论依据。     

蚊虫乙酰胆碱酯酶的真核表达、纯化及活性测定

利用Trizol法从尖音库蚊中提取总RNA,构建cDNA文库,并克隆出乙酰胆碱酯酶外显子序列;利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对蚊虫乙酰胆碱酯酶进行真核表达,并利用Ni-琼脂糖对酶进行纯化。采用SDS-PAGE对纯化产物进行检测,结果表明得到了纯度较高的乙酰胆碱酯酶。参照Ellman法对酶的活性进行测定,结果显示纯酶的活力为2.219×10-4 mol/(min.g)。     

乙酰胆碱酯酶的分离纯化及生物学研究进展

乙酰胆碱酯酶在神经突触间隙中通过催化水解神经递质乙酰胆碱来维持神经冲动的正常传递,广泛存在于各种动物组织中,如脑、红血球、鱼肉组织和动物血清中。总结了最近国内外关于乙酰胆碱酯酶的研究进展,包括乙酰胆碱酯酶的提取、纯化和固定化研究,且综述了有关乙酰胆碱酯酶传感器的应用进展,以及在治疗疾病如阿尔茨海默病方面的应用,这将为以乙酰胆碱酯酶为目标的研究提供信息框架。     

Expression and purification of acetylcholinesterase from culex by Bac-to-Bac baculovirus system and the activity determination

利用Trizol法从尖音库蚊中提取总RNA,构建cDNA文库,并克隆出乙酰胆碱酯酶外显子序列;利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对蚊虫乙酰胆碱酯酶进行真核表达,并利用Ni-琼脂糖对酶进行纯化.采用SDS-PAGE对纯化产物进行检测,结果表明得到了纯度较高的乙酰胆碱酯酶.参照Ellman法对酶的活性进行测定,结果显示纯酶的活力为2.219×10-4mol/(min·g).     

重组人乙酰胆碱酯酶基因在毕赤酵母中分泌表达及其对农药的敏感性评估

乙酰胆碱酯酶是用酶抑制法检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的关键用酶,本研究利用毕赤酵母表达系统分泌表达人乙酰胆碱酯酶,并评估其对8种农药的敏感性,为工业化大规模生产高敏感性酶源奠定基础。根据GenBank上已发表的人乙酰胆碱酯酶(human acetylcholinesterase, hAChE)基因核酸序列设计引物,从pReceiverM02-h AChE-ORF质粒中扩增出hAChE的开放阅读框(open reading frame, ORF)片段,接着利用SnaBⅠ和AvrⅡ双酶切将其克隆至载体pPIC9K中,构建pPIC9K-hAChE表达载体,然后将SalⅠ线性化的pPIC9K-hAChE电转化至毕赤酵母GS115中,在含4.00 mg/mL G418抗性平板上筛选获得阳性克隆,最后经0.5%甲醇诱导分泌表达144 h,发现其发酵上清液的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱在65 kDa处有一条明显的蛋白条带,大小与预期的hAChE蛋白一致。利用Q-Sepharose FF柱层析法对其总蛋白进行纯化,获得了较纯的人乙酰胆碱酯酶。用Bradford法测得发酵上清液中hAChE蛋白质量浓度为1.330 mg/mL,占总蛋白的5.58%,纯化后比酶活达到1 080nmol/(min·mL)。通过初步计算比对重组工程菌发酵上清液对8种常见农药的半抑制浓度,得出敌百虫敌敌畏克百威马拉硫磷乐果甲胺磷甲萘威毒死蜱,即人乙酰胆碱酯酶对毒死蜱最敏感。     

薰衣草提取物对乙酰胆碱酯酶的抑制作用

为从薰衣草提取物中寻找潜在的治疗阿尔茨海默病的乙酰胆碱酯酶抑制剂。采用经乙醇提取,聚酰胺柱、HP20树脂柱及制备液相分离纯化后,得到30个薰衣草提取物,测定其多酚含量,并以石杉碱甲为阳性对照,采用酶标仪测定405nm处吸光度值以筛选其乙酰胆碱酯酶抑制活性并计算抑制率,分析二者相关性。结果表明:薰衣草提取物对乙酰胆碱酯酶表现出了不同的抑制作用(抑制率3.00%～82.78%),其中7个提取物作用较为显著,抑制率均大于50%;有4个提取物表现出了微弱的抑制作用(抑制率小于10%);另外,近一半的薰衣草提取物多酚含量大于20μg·mL-1。薰衣草提取物具有乙酰胆碱酯酶抑制活性,表明其含有抑制乙酰胆碱酯酶的成分,经过相关性分析,多酚可能不是起主要作用的活性物质,为进一步跟踪分离活性成分奠定基础。     

几种淡水鱼肌肉乙酰胆碱酯酶的盐析提取及农药敏感性研究

以鲢鱼、镛鱼和罗非鱼肌肉组织为材料,研究乙酰胆碱酯酶AChE的盐析提取方法及农药敏感性。结果表明,3种淡水鱼肌肉组织在55%硫酸铵饱和度时得到的沉淀酶总活力最高,乙酰胆碱酯酶的比活力分别达到0.264,0.263,0.221 U/mg,纯化倍数分别为1.222,1.277,1.190,回收率分别为27.626%,37.621%,26.441%。5种有机磷农药（敌敌畏,辛硫磷,马拉硫磷,乙酰甲胺磷,氧化乐果）对3种淡水鱼肌肉乙酰胆碱酯酶有抑制作用,其中罗非鱼AChE对敌敌畏最敏感,抑制中浓度I50为0.14μg/mL,对马拉硫磷最不敏感,抑制中浓度I50为11.202μg/mL     

罗非鱼肝脏乙酰胆碱酯酶的双水相萃取

乙酰胆碱酯酶是监测环境中有机磷和氨基甲酸酯类农药的重要靶标物质.应用聚乙二醇(PEG)/磷酸氢二钾(K2HPO4)双水相体系对罗非鱼肝脏乙酰胆碱酯酶的萃取分离进行了研究.采用单因素试验,探讨了PEG1000的质量分数、K2HPO4的质量分数、pH值及NaCl的质量分数对酶萃取的影响,并通过正交试验进一步优化萃取条件.结果表明:K2HPO4质量分数、PEG质量分数、pH值对酶的萃取影响最大.室温下在K2HPO4质量分数为15.0％、PEG1000质量分数为22.0％、pH值为7.0的双水相体系中,酶的分配系数最大、可达5.65,萃取率为72％.放大试验结果表明,该双水相体系对乙酰胆碱酯酶的萃取效果比较稳定,是提取分离乙酰胆碱酯酶的一种新方法.     

萝卜叶不同萃取物对乙酰胆碱酯酶抑制活性研究

[目的]研究萝卜叶不同萃取组分对乙酰胆碱酯酶的抑制活性。[方法]通过对萝卜叶水提原液、水提不同萃取组分及萃取后的水相进行乙酰胆碱酯酶抑制活性测试,对萝卜叶抑制乙酰胆碱酯酶能力进行评价。[结果]以石杉碱甲为对照,萝卜叶不同萃取物对乙酰胆碱酯酶的抑制能力从大到小依次为石杉碱甲、二氯甲烷组分、乙酸乙酯组分、石油醚组分、正丁醇组分、水相、萝卜叶水提原液。[结论]萝卜叶具有较好的乙酰胆碱酯酶抑制活性,并呈现一定的浓度依赖性。     

秸秆层隔治盐研究

研究了20 cm土壤埋入不同秸秆层隔治盐碱的效果。结果表明,不同秸秆层隔0～20 cm土层中的盐分含量均低于对照,且随层隔数量增加而减少。以层隔2.0 kg/m2的效果最佳,与对照相比,0～20 cm土层盐分含量降低0.12%,土壤有机质增加0.8 g/kg,大豆增产29.67%。说明秸秆层隔可以阻断下层土壤盐分随毛管水的上升,降低上层土壤盐分含量,而且兼备秸秆还田功效,增加了土壤有机质含量,改善了作物生长条件,提高了作物产量。     

两个新的正整数分拆恒等式

正整数的分拆与许多计数问题有着密切的关系,并且关于正整数的分拆产生了许多重要的恒等式,但很多正整数的分拆恒等式常以有序分拆或无序分拆单方面讨论。将正整数的有序分拆和无序分拆联系起来,给出了两个新的与正整数的有序分拆和无序分拆相关的恒等式,并利用组合方法给出了证明。     

PVC单、双壁波纹塑料管用作农田排水暗管比较研究

通过室内材料力学试验和水力学试验，对PVC单、双壁波纹塑料管有关性质进行了比较研究，试验结果表明：PVC双壁波纹塑料管的力学性质和水力学性质均较单壁波纹塑料管优越，适于作农田地下排水暗管。     

绿茶910 EGCG的提取工艺

以绿茶910为原料,采用咖啡碱沉淀—溶剂萃取法对茶叶表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)进行提取,运用二次回归正交旋转组合设计方法分析各影响因子对EGCG提取纯度的影响.结果表明,各因子对EGCG提取纯度影响程度的大小为:氯仿萃取次数>乙酸丙酯萃取次数>水浸提温度>咖啡碱浓度>己酸乙酯萃取次数.EGCG提取的最佳条件为:水浸提温度80℃,咖啡碱浓度30 mmol.L-1,氯仿萃取次数为5,己酸乙酯、乙酸丙酯萃取次数均为3.根据最佳条件提取EGCG,得到纯度为80.3%的EGCG产品.     

根系局部施肥与肥水耦合技术研究综述

肥水耦合研究一直是节水技术和合理施肥研究的一个重要方面。从根系分区施肥技术、肥水耦合对植物根系影响及其作用机理、局部施有机肥与肥水耦合结合对植物叶片光合特性的影响等方面综述了肥水耦合相关研究。     

辽宁省台安县农业生态功能分区研究

应用生态学原理和方法,选择自然地理、土地资源、系统稳定与结构功能、社会经济四个方面共11个指标,采用SPSS软件中的主成分分析方法和聚类分析方法并结合实际情况将辽宁省台安县14个乡镇划分为北部风沙绿化生态恢复区、西南稻鱼洼地生态保护区、东南两河平原生态建设区和中部城镇工业污染控制区4个生态功能区,并根据分区结果,指出了各区以后的发展目标。     

基于模糊综合评价法的农机零件关联度计算及模块划分

为了实现产品的快速设计和创新设计,可以对现有的产品进行模块划分,再通过模块组合,从而以有限资源组合出尽可能多种类的产品,这种设计方法叫做模块化设计,是当前的研究热点。运用合理、实用的方法对现有产品进行模块划分,从而为快速设计和创新设计做好准备工作。使用模糊综合评价法,完成了多个专家对产品零件关联度大小的综合评判,再通过不同算法实现了模块划分。观察和对比划分结果验证了评价模型及划分结果的合理性。     

基于GIS的忻州市土地利用分区研究

以忻州市为例,研究了基于GIS方法的层次分析法和统计聚类法在土地利用分区中的应用。首先建立分区指标体系,并利用层次分析法确定指标权重;然后利用GIS的统计、分析功能获得原始数据,并进行SPSS聚类分析;最后利用GIS的空间叠加分析和图形输出功能,得到较科学的分区结果,将忻州市划分为4个土地利用一级区、12个土地利用亚区,为土地管理者提供决策依据。     

多菌灵草酸盐双向传导本质原因的初步探讨

采用紫外光谱法测定了多菌灵草酸盐和多菌灵分别处理棉苗后，对棉叶的穿透速率和棉苗内的定量分布，以及这两种农药的油水分配系数，并用重量法测定了棉叶、棉根、茎韧皮部和木质部等生物样品的油水分配系数，结果表明：多菌灵草酸盐在棉苗内具有双向传导作用，初步探明向传导的本质原因是由于草酸羧基的引入，使其具有与棉苗各部位的油水分配系数更加接近的油水分配系数，根据相近相通原理，因而更容易穿透棉苗各部位，并进行双向传导。     

土地整理分区研究进展

介绍了土地整理分区研究的背景和意义,从土地整理分区的不同空间尺度和研究对象两个角度,分别对国家尺度、区域尺度和景观尺度的土地整理分区研究以及农用地、农村居民点和城市土地整理分区研究进行了总结,并探讨了当前土地整理分区研究存在的问题和今后的研究方向。