黄芩内生细菌的分离及抑菌研究

从黄芩根中分离出内生细菌8株,以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌为供试菌,分别对其液体发酵液进行了抗菌活性的研究.结果表明:黄芩内生细菌对3种供试菌有一定的抑菌活性.     

山苍子内生细菌的分离及抑菌活性研究

[目的]探讨山苍子内生细菌的抑菌活性及生防效果。[方法]从山苍子的根、茎、叶和果中分离出内生细菌52株(其中根23株、茎8株、叶7株、果实14株),采用对峙生长法检测其对植物病原真菌的抑制效果。[结果]5株来自叶和果的内生细菌分别对杨树溃疡病菌、小麦纹枯病菌、番茄灰霉病菌、小麦赤霉病菌、苹果炭疽病菌和辣椒疫霉病菌有较好的拮抗作用。田间试验结果表明,1株16S rD-NA序列(序列号为JN252095)与Bacillus megaterium最为接近的山苍子叶内生细菌对辣椒疫霉病的防治效果较好,且可促进辣椒植株生长。[结论]山苍子内生细菌作为农作物生防细菌效果明显,值得进一步研究。     

汉麻内生菌的分离及其抑菌活性研究

本研究以汉麻作为材料,对其内生菌进行了系统分离,并对汉麻内生细菌对病原菌的抑菌活性进行了测定。结果表明,从汉麻中分离得到64株内生菌,汉麻叶中的内生菌资源较丰富;汉麻内生细菌中有抑菌活性的菌株比例较高且抑菌谱较广,对于供试细菌金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌均表现出一定的抑制作用。     

红肉蜜柚内生菌的分离及抑菌活性分析

选取牛肉膏蛋白胨、马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)和高氏1号3种培养基,利用组织块法对红肉蜜柚(Citrus grandis)果实的内生菌进行分离纯化,得到9株菌株,经生物学性状分析,9株菌株均为放线菌,分属于诺卡氏菌属(Norcardia)和链霉菌属(Streptomyces)。采用平皿对峙法测定供试菌株的拮抗活性,有6株表现出不同程度的拮抗作用,占全部分离菌株的66.7%,其中1株对大肠杆菌(Escherichia coli)、4株对金色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、3株对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)具有明显的抑菌效果;在3种柑橘病原菌的抑菌试验中,有7株菌株表现出不同程度的拮抗作用,占全部分离菌株的77.8%,其中7株对指状青霉(Penicillium digitatum Sacc.)、3株对意大利青霉(Penicillium italicum Wehmer)、3株对柑橘链格孢(Alternaria citri Ellis et.Pierce)的抑菌率超过75%。菌株P1、R2对3种柑橘病原菌均有很高的抑菌活性。     

火棘内生真菌的分离及抑菌活性测定

从蔷薇科植物火棘的茎、叶、果中分离出内生真菌15株,其中茎中分离到4株(J1～J4),叶中分离到8株(Y1～Y8),果实中分离到3株(G1～G3);分别测定15株内生真菌的液体培养物(发酵液和菌丝体混合物)对9种植物病原真菌的抑菌活性,结果表明,有13株内生真菌(86.67%)对某些植物病原真菌表现出50%以上的抑菌活性,其中J4菌株对9种植物病原真菌的抑菌活性都在50%以上,最高可达97.14%,其抗菌谱较广,值得进一步研究。     

刺五加内生真菌分离及分布研究

采用平板粘插法分离刺五加内生真菌,并对内生真菌的形态进行鉴定,比较不同产地刺五加内生真菌的分布情况。结果表明,从5地区刺五加体内共分离出75株内生真菌（分属于12个属及未产孢类群）。     

汉麻内生菌的分离及抑菌活性研究

本研究以汉麻为植物材料,对其内生菌进行较为系统的分离,并进行抑菌活性的筛选,以期得到能够产生较高杀菌活性物质的菌株。为筛选具有生防作用的汉麻内生菌提供理论依据和技术支持。筛选出的汉麻新菌种可以用作生物农药,与多种生物肥料复配,生产出新型复合微生物菌剂。     

药用植物鸦胆子内生细菌分离及其抑菌活性研究

【目的】从药用植物鸦胆子中分离对植物病原真菌具有拮抗活性的内生细菌,为新型生物杀菌剂的开发提供依据。【方法】采用组织匀浆法对鸦胆子内生细菌进行分离,通过离体和活体组织抑菌试验筛选活性菌株;根据形态特征、生理生化测定、16S rDNA序列分析和Biolog系统对筛选获得的高活性菌株进行鉴定。【结果】从鸦胆子的根、叶、茎和果实部位分别分离得到43、19、15和8株内生细菌,其中分离自根部的YGB-11菌株对柑桔绿霉病菌、香蕉煤纹病菌等7种植物病原菌的抑菌率均超过80.00%,表现出较好的抗菌特性,结合形态特征、生理生化特征、16S rDNA序列分析和Biolog系统鉴定,确定YGB-11菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefacien)。【结论】内生细菌YGB-11菌株具有抑菌谱广、抑菌活性较高等特点,具有良好的应用前景。     

药用白花泡桐内生细菌的分离鉴定及抑菌活性检测

为开发新的抑菌活性物质,以湘西药用白花泡桐叶片为材料,采用组织分离法从药用白花泡桐叶片中分离内生细菌,通过对峙培养法检测内生细菌发酵液对2株病原真菌的抑菌活性,根据菌株形态、生理生化特性及16S rRNA基因序列系统发育分析对活性菌株进行鉴定.结果表明:从白花泡桐叶片中筛选出对水稻纹枯病菌(Rhizoctonia so...     

胡杨内生真菌分离及其抑菌活性研究

从健康胡杨的叶、皮、枝、干、根分离获得182株内生真菌,经形态观察分类鉴定属于4目5科25属。采用两点对峙培养拮抗试验、孢子萌发试验和人工接种试验,对杨树烂皮病菌(Cytospora chrysosperma)、松苗立枯病菌(Fusarium oxysporum)、豆角炭疽菌病菌(Colleotrichumsp.)、杨灰斑病菌(Coryneum populinum)进行抑菌活性测定。结果表明,所获内生真菌菌株对病原真菌菌丝生长和孢子萌发均存在不同程度的抑制作用,其中,青霉属(Penicilliumsp.)和木霉属(Trichodermasp.)真菌的菌株抑菌效果表现最明显。青霉菌和木霉菌可迅速对病原菌菌落包围、覆盖,从而使植物病原菌生长受到抑制。孢子萌发试验中,青霉菌培养3d时的滤液可对病原菌孢子萌发产生抑制作用,表现出一定的抑菌活性。     

人参内生菌的分离及拮抗菌株的筛选

利用研磨法和组织块法对我国吉林省5个不同地区来源的健康人参植株分别进行了内生细菌和内生真菌的分离,并采用菌体初筛和发酵液复筛相结合的方法,筛选了对6种人参主要病害病原菌具有抑菌活性的内生菌株.结果显示:在人参根、茎、叶不同器官中共分离获得152株内生细菌和46株内生真菌,初筛后得到对2种以上病原菌有抑菌活性的内生细菌16株,内生真菌3株,复筛后对4种以上病原菌具有抑菌活性的内生细菌2株,内生真菌1株,还发现了对灰霉病菌具有明显抑制作用的菌株3株.     

鹅掌楸内生菌分离纯化及其抗菌活性初步研究

从鹅掌楸的茎、叶中分离出内生菌5株,以金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureu）、大肠杆菌（Escherichia coli）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）为供试菌,用杯碟法分别对其液体发酵液进行了抗菌活性的研究。结果表明：鹅掌楸内生菌对4种供试菌有一定的押菌活性,不同组织中内生菌的抑菌活性存在差异,其中J1、Y3对供试菌具有普遍抑茼作用。     

刺五加的同工酶与遗传分化的研究(Ⅰ)--花丝长度不同的刺五加植株同工酶电泳分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对花丝长度不同的刺五加植株进行了6种同工酶比较分析.结果显示,花丝长度不同的刺五加在酸性磷酸酶(ACP)、苹果酸脱氢酶(MDH)、乙醇脱氢酶(ADH)、异柠檬酸脱氢酶(IDH)、细胞色素氧化酶(CCO)和过氧化物酶(POD)等6种同工酶酶谱上表现出不同程度的差异,由此对花丝长度不同的刺五加的遗传分化做出推测.     

刺五加GAPDH 基因全长cDNA 的克隆与生物信息学分析

采用cDNA末端RACE技术,从刺五加叶片中克隆到GAPDH基因cDNA的全长序列,并运用生物信息学方法对该基因的cDNA序列、保守区、氨基酸序列、亲缘关系等特征进行分析,并预测其编码蛋白质的结构和功能.研究结果表明,刺五加GA PGH基因的cDNA全长为1 437 bp,开放阅读框全长为1 023 bp,编码一个具有340个氨基酸残基的蛋白,蛋白分子质量为37.070 ku,理论等电点(pI)为7.71.刺五加GAPDH蛋白不存在跨膜结构域,定位于细胞质中,属于亲水蛋白.     

洋葱内生菌的筛选及其次级代谢产物分析

通过组织块分离法、梯度稀释涂布法和划线分离法,从健康紫皮和白皮洋葱中筛选得到内生菌,采用平板对峙培养法测定其对10株供试指示菌的抑菌活性,再以洋葱提取液为对照,对各拮抗菌株的发酵液进行薄层层析和高效液相色谱分析。结果表明,从2种洋葱中共筛选出87株内生菌,其中内生细菌68株,内生放线菌3株,内生真菌16株。通过抑菌试验,发现12株内生细菌对3至9种指示菌具有抑菌活性,占分离菌株总菌数的23.08%,其中YD–21、YD–23、YD–26、YD–27、YD–32、YD–38、YD–37、YD–22共8株菌株的抗菌谱较广,对9种供试指示菌均具有抑菌活性。薄层层析检测结果表明,菌株YD–27发酵产物在Rf值为0.73处有与洋葱提取液层析带迁移率相同的显色带,液相色谱分析结果表明其属于黄酮类物质。菌株YD–27能发酵产生黄酮类或产生与黄酮类类似的化合物,表明洋葱内生菌具有合成黄酮类次级代谢产物药物的潜力。     

刺五加ATP合酶β亚基基因的克隆与序列分析

[目的]克隆刺五加叶绿体的ATP合酶β亚基cDNA并对其进行生物信息学分析。[方法]根据已知物种叶绿体ATP合酶β亚基基因的序列,设计1对同源引物,通过RT-PCR扩增得到刺五加ATP合酶β亚基cDNA,并对其进行序列比对及结构预测分析。[结果]RT-PCR扩增获得了长1099bp的刺五加ATP合酶β亚基cDNA,该基因编码366个氨基酸。序列比对及结构预测分析表明,刺五加ATP合酶β亚基基因编码的氨基酸与水稻的同源性最高,达96.41%。其二级结构中含有171个α螺旋（alpha helix）,占46.72%;53个延伸链（extended strand）,占14.48%;27个β折叠（beta turn）,占7.38%;115个无规则蜷曲（random coil）,占31.42%。第262～271位氨基酸为ATP合酶β亚基的标志性位点。整个多肽链无明显的疏水区域,初步认定为亲水性蛋白。[结论]该试验克隆得到的ATP合酶β亚基基因为叶绿体ATP合酶β亚基基因,为研究刺五加能量代谢对植物次生代谢的影响及了解植物ATP合酶的结构与功能提供了必要的信息。     

刺五加ATP合酶β亚基基因的克隆与序列分析

[目的]克隆刺五加叶绿体的ATP合酶β亚基cDNA并对其进行生物信息学分析。[方法]根据已知物种叶绿体ATP合酶β亚基基因的序列,设计1对同源引物,通过RT-PCR扩增得到刺五加ATP合酶β亚基cDNA,并对其进行序列比对及结构预测分析。[结果]RT-PCR扩增获得了长1 099 bp的刺五加ATP合酶β亚基cDNA,该基因编码366个氨基酸。序列比对及结构预测分析表明,刺五加ATP合酶β亚基基因编码的氨基酸与水稻的同源性最高,达96.41%。其二级结构中含有171个α螺旋(alpha helix),占46.72%;53个延伸链(extended strand),占14.48%;27个β折叠(beta turn),占7.38%;115个无规则蜷曲(random coil),占31.42%。第262～271位氨基酸为ATP合酶β亚基的标志性位点。整个多肽链无明显的疏水区域,初步认定为亲水性蛋白。[结论]该试验克隆得到的ATP合酶β亚基基因为叶绿体ATP合酶β亚基基因,为研究刺五加能量代谢对植物次生代谢的影响及了解植物ATP合酶的结构与功能提供了必要的信息。     

羊耳菊黄酮类化合物的提取与抑菌作用

采用微波辅助提取法提取羊耳菊总黄酮,在单因素试验的基础上,通过正交试验对提取工艺进行优化,并用所得的提取物对9种微生物的抑菌作用进行了试验研究。结果表明,羊耳菊总黄酮提取的最佳工艺为乙醇体积分数60%、固液比1:25、微波作用时间4min、微波火力为解冻;羊耳菊总黄酮提取物对大多数供试微生物有抑制作用,其中对藤黄八叠球菌抑菌效果最好,其最低抑菌浓度为0.0039g/mL;对粪肠球菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为0.1250g/mL;对大肠埃希氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌最低抑菌浓度为0.5000g/mL;而对普通变形杆菌及白假丝酵母菌抑制作用不明显。