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禽流感病毒血凝素与核蛋白在重组禽痘病毒中的共表达 总被引:4,自引:2,他引:4
为克服禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)仅诱导机体产生亚型特异性免疫应答的不足,本研究拟将病毒核蛋白(NP)基因与HA基因在重组禽痘病毒中实现共表达。首先构建转移载体,从测序质粒pUCNP中切下目的基因克隆到载体pSY538早晚期启动子LP2EP2的下游,再将含有禽痘病毒早晚期启动子LP2EP2的NP基因片段亚克隆到已有的AIVHA基因重组禽痘病毒转移载体中,即得到同时含有HA和NP两种基因的重组转移载体pSY(HA NP)。将转移载体脂质体转染已感染禽痘病毒亲本株S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞。根据报告基因β-半乳糖苷酶(LacZ)基因的表达,蓝白斑法筛选重组病毒,经数轮蚀斑纯化,PCR鉴定及West-ern-blot分析,结果表明所获得的重组病毒能高效表达AIVHA及NP两种蛋白。此研究为进一步研制更为有效的禽流感基因工程活病毒载体疫苗奠定了基础。 相似文献
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中国农科院哈尔滨兽医研究所日前传来消息,设在该所的国家禽流感参考实验室承担的科技部重大专项——“高致病性禽流感防治技术研究与开发”项目近日取得重大突破。该项目中所包含的“H5N1亚型禽流感灭活疫苗的研制与应用开发”、“H5亚型禽流感重组鸡痘病毒基因工程疫苗产业化及其关键技术的研究”、“H5N2亚型禽流感灭活疫苗的新型工艺技术研究”、“高致病性禽流感病毒亚型鉴定技术的研究”等4个课题,日前全部通过了科技部的验收。其中,“H5N1亚型重组禽流感病毒灭活疫苗”和“H5亚型禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗”达到国际先进水平,获得了农业部颁发的农业转基因生物安全证书和新兽药注册证书。 相似文献
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以GPT和GFP为双重筛选标记的禽痘病毒转移载体的构建及鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
为研制和开发以禽痘病毒为载体的重组病毒疫苗,本研究构建了禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt,该载体含有gfp和gpt2种报告基因及背对的痘苗病毒晚期启动子P11和早期启动子P7.5,P11启动gfp和gpt两个基因,P7.5用于启动外源基因,在早期启动子P7.5下游引入NotⅡ和AftⅡ两个酶切位点.用于外源基因的插入.为检测禽痘病毒转移载体pSY681-gfp-gpt的有效性,将H9亚型禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/10/01(H9N2)的HA基因插入到该载体中构建转移载体pSY681-gfp-gpt-HA9,将转移载体转染已感染禽痘病毒S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞,利用gfp和gpt同时进行双重筛选、数轮蚀斑纯化后获得了重组病毒rFPV-gpt-gfp-HA9,通过PCR、western blot鉴定,结果证明,获得了能稳定表达H9亚型禽流感病毒HA蛋白的重组禽痘病毒rFPV-gpt-gfp-HA9,为今后重组禽痘病毒活载体疫苗的研制奠定了基础. 相似文献
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H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗 总被引:1,自引:0,他引:1
H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗系以高度成熟安全的鸡痘病毒为载体研制的新型基因工程禽流感一鸡痘二联疫苗,该疫苗毒株的研制是采用重组DNA技术,将我国H5N1亚型禽流感病毒早期分离株的HA和NA基因同源重组到鸡痘病毒疫苗株的基因组中,构建重组鸡痘病毒(rFPV—HA—NA),经体外、体内试验表明该重组鸡痘病毒具有良好的免疫原性。同时经细胞连续传代,证实了重组鸡痘病毒具有良好的遗传稳定性,从而进一步保证了该疫苗的免疫原性。 相似文献
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本刊讯:中国农科院哈尔滨兽医研究所国家禽流感参考实验室负责人孔宪刚博士4月22日宣布,我国科研人员采用国际先进的流感病毒反向基因操作技术,构建出一株与高致病“H5N1亚型”禽流感病毒流行株抗原一致、鸡胚增殖滴度高的低致病禽流感病毒的新型疫苗。这两种疫苗分别是,“H5N1亚型重组禽流感病毒灭活疫苗”和“H5亚型禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗”。孔宪刚博士介绍,科研人员是用重组DNA技术,把“H5N1亚型”禽流感病毒早期分离株的两个基因同源,重组到鸡痘病毒疫苗株的基因组中,从而构建出重组鸡痘病毒。动物试验表明,重组鸡痘疫苗免… 相似文献
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《中国预防兽医学报》2018,(12)
为研究表达鹅γ干扰素(GoIFN-γ)基因重组禽痘病毒的抗病毒活性,本研究构建了在禽痘病毒(FPV)早晚期启动子LP2EP2控制下的IFN-γ基因重组禽痘病毒转移载体,将其转染至亲本禽痘病毒S-FPV-017预感染的鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEF),使其与禽痘病毒基因组进行同源重组,经过9轮筛选和纯化并进行PCR和间接免疫荧光检测,获得能稳定表达外源基因的重组病毒r FPV-IFNγ-LacZ。利用细胞病变抑制法检测抗病毒活性结果显示,在鸡胚成纤维细胞中重组禽痘病毒表达的IFN-γ对鹅细小病毒的复制具有显著抑制作用。本研究为制备共表达保护性抗原和γ干扰素基因的重组基因工程疫苗研究奠定基础。 相似文献
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禽痘病毒感染对禽流感重组禽痘病毒疫苗免疫效力的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
表达禽流感病毒 (AIV)HA和NA基因的重组禽痘病毒rFPV_HA_NA能够诱导鸡体产生 10 0 %抵抗高致病性禽流感病毒 (HPAIV)H5N1的攻击。而当鸡群已进行禽痘疫苗免疫或者感染了禽痘病毒的情况下 ,此重组疫苗的免疫效力如何 ?首先用禽痘病毒S_FPV_0 17人工感染SPF试验鸡 ,既而在感染后的不同间隔时间接种重组疫苗 ,免疫后检测鸡群的HI抗体水平 ,同时用 10 0LD50 的HPAIVH5N1进行攻击。结果重组疫苗免疫与禽痘病毒人工感染时间间隔在 4周 (或以上 )时 ,预先感染禽痘病毒对重组疫苗的免疫效力不构成影响 ,对禽流感的保护力为 10 0 % ,而间隔时间在 1、2、3周时 ,重组疫苗的免疫保护效力则受到不同程度的影响。 相似文献
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《兽药与饲料添加剂》2004,(2)
在农业部和科技部共同主持及国家“973”、“863”和“攻关”项目资助下,具有国际先进水平的高效、安全新型H5N1亚型禽流感灭活疫苗和重组禽痘病毒活载体疫苗,近日由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所研制成功。新型H5N1亚型禽流感灭活疫苗系由高度致弱的H5N1亚型疫苗种子株制备, 相似文献
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禽痘病毒载体在新城疫病毒重组疫苗研究中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
介绍了禽痘病毒粒子及其基因组的特点和禽痘病毒作为重组疫苗载体的优点 ,简述了构建禽痘病毒疫苗的基本方法和国内外以此作载体的新城疫病毒重组活疫苗的研究进展 ,认为以禽痘病毒作载体构建禽类重组疫苗具有广阔的应用前景。 相似文献
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《兽药与饲料添加剂》2004,9(2):41-41
在农业部和科技部共同主持及国家“973”、“863”和“攻关”项目资助下.具有国际先进水平的高效、安全新型H5N1亚型禽流感灭活疫苗和重组禽痘病毒活载体疫苗.近日由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所研制成功。 相似文献
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新城疫基因工程疫苗研究 总被引:8,自引:0,他引:8
本文介绍了国内外研制新城疫基因工程疫苗的主要技术路线和已取得的进展,并着重探讨了以重组痘病毒为基础的基因工程疫苗的免疫机理和免疫效果,展示了基因工程疫苗的良好应用前景。 相似文献
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本刊讯 :在农业部和科技部共同主持及国家“973”、“863”和“攻关”项目资助下 ,通过30多位科研人员不懈的努力 ,具有国际先进水平的高效、安全新型H5N1亚型禽流感灭活疫苗和重组禽痘病毒活载体疫苗 ,近日由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所的农业部动物流感重点开放实验室及国家禽流感参考实验室研制成功。新型H5亚型禽流感灭活疫苗系由高度致弱的H5N1亚型疫苗种子株制备 ,该疫苗种子株的研制采用了当前国际先进的流感疫苗株构建策略 -流感病毒反向基因操作技术 ,其决定免疫保护原性的表面基因来自H5N1亚型高致病性禽流感流行株 ,并人… 相似文献
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表达新城疫病毒融合蛋白基因禽痘病毒重组体的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
通过RT-PCR扩增新城疫病毒F基因,利用禽痘病毒复合启动子、SV40 PolyA终止信号序列构建F基因表达盒。将F基因表达盒与loxp-GFP-loxP序列串联插入禽痘病毒重组臂,构建了禽痘病毒转移质粒载体。在脂质体介导下转染CEF,获得了带有绿色荧光信号的重组病毒rFPVFGFP。通过二次转染,利用Cre-loxP位点特异性重组将重组病毒基因组的GFP自动去除,结果获得了只含新城疫病毒F基因表达盒的重组禽痘病毒rFPVF。试验结果表明,rFPVF复制稳定,表达的F蛋白具有免疫原性,能够刺激鸡只产生抗新城疫病毒的中和抗体。 相似文献