NO对柔嫩艾美耳球虫感染鸡盲肠粘膜大细胞及组胺的影响

将试验鸡分为5组，每组18只，除空白对照组外，其他组鸡均用柔艾美耳球虫（E.tenella)进行免疫和攻毒接种，其中3组分别给予氨基胍（AG），N^W-硝基－L－精氨酸甲酯（L－NAME）和L-精氨酸（NOS底物，L－Arg）处理，结果表明，血清中NO^-2浓度以AG处理组最低，L－NAME处理组和L－Arg处理组比空白对照组明显升高，但都显著低于免疫攻毒组（P＜0．05），AG处理组盲肠肥大细胞（MC）数与空白对照组无明显差异，而极显著地高于其他组（P＜0．01），免疫攻毒组盲肠MC数明显高于L－NAME处理组和L－Arg处理组，而L－NAME处理组与L－Arg处理组之间则没有明显差异，AG处理组鸡盲肠组胺（HT）含量极显著高于其他组（P＜0．01）；LAME处理和L－Arg处理组的HT含量差异不显著，但都高于空白对照组而你于免疫攻毒组。体外试验明，磷酸组织胺能够明显抑制伴刀豆球蛋白A对鸡外周血淋巴细胞的诱导增殖作用（P＜0．01），结果提示，E.tenella感染鸡盲肠MC数与HT含量之间未见明显的相关性，活化的MC或其分泌物HT和NO产生有一定抑制作用，另一方面，NO也可能抑制MC的增殖。     

柔嫩艾美耳球虫感染肉鸡后盲肠粘膜iNOS活性变化

本研究旨在探讨肉鸡柔嫩艾美耳球虫 (Eimeria tenella)感染与盲肠粘膜诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)活性之间的时间 -效应和剂量 -效应关系。 1日龄黄羽肉鸡 ,在实验室条件下用雏鸡日粮饲养两周后供试。在时间 -效应关系试验中 ,4 5只肉鸡中用 5只鸡作对照 ,其余每只鸡接种 1.0× 10 4 个球虫孢子化卵囊 ,接种前捕杀对照组雏鸡 ,于接种后每 2 4 h分别捕杀 5只 ,取其盲肠粘膜样本 ,按分光光度法检测 i NOS活性 ,连续 8天。试验结果表明 ,与对照组相比 ,肉鸡盲肠组织 i NOS的活性在接种球虫后不同时间明显不同 ,其中接种后第 96 h活性最高 (2 3.70± 7.6 5) ;在剂量 -效应关系试验中 ,4 0只肉鸡以不同的剂量 0、0 .5× 10 4 、1.0× 10 4 、1.5× 10 4 、2 .0× 10 4 、2 .5× 10 4 、3.0× 10 4 、3.5× 10 4 个 /只分别口服接种 ,然后按时间 -效应关系中酶活性最高的时间点取样 ,以同法检测 i NOS活性。试验结果显示 ,接种不同剂量的雏鸡 ,其盲肠组织中 i NOS活性不同 ,与对照组相比各剂量组 i NOS活性均显著增高 (P<0 .0 1) ,在 7个剂量组中 ,以 2 .5× 10 4 个 /只剂量组活性最高 (2 3.37± 8.32 )     

益生菌对柔嫩艾美耳球虫感染鸡保护效果研究

接种柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)孢子化卵囊和益生菌,以血便记分、存活率、体增重和抗球虫指数为指标,探讨益生菌的抗球虫活性。在接种第7天后检测结果显示,益生菌抗球虫指数为137,能降低球虫感染鸡的血便记分,减轻鸡盲肠组织病理学结构的损伤,提高球虫感染鸡体增重和存活率,提示益生菌可以辅助应用于临床球虫病的防治。     

鸡柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法的建立

为了建立一种能够快速实现对鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)和巨型艾美耳球虫(E.maxima)同时进行检测的双重PCR方法,基于2种艾美耳球虫各自的ITS-1基因筛选2对特异性引物,对制备的阳性DNA样品进行PCR扩增,凝胶电泳检测结果显示,分别在约450bp和150bp处出现目的条带。对PCR反应中的退火温度、MgCl2浓度、DNA模板量等进行优化。结果表明,当退火温度为59℃、MgCl2浓度为2.5mmol/L、DNA模板量为2μL时,双重PCR扩增结果最佳。特异性检测结果显示,所建立的双重PCR对环形泰勒虫、羊巴贝斯虫、隐孢子虫和蓝氏贾第虫的扩增结果均呈阴性,表明建立的方法具有较高的特异性。成功建立了柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法,为临床中鸡球虫病的快速诊断提供了一种可靠的检测方法。     

人工感染柔嫩艾美耳球虫对雏鸡盲肠正常菌群的影响

在对雏鸡人工感染柔嫩艾美耳球虫后6、8、13、20天,分别对感染雏与未感染雏盲肠内容物中梭杆菌、真杆菌、消化球菌、乳酸杆菌、类杆菌、肠球菌、葡萄球菌和肠杆菌等8种主要正常菌群进行定性、定量分析。结果发现在球虫感染第20天,感染组有益菌如乳酸杆菌的数量低于对照组,差异极显著(P<0.01),有害菌如梭杆菌、葡萄球菌数量感染组高于对照组,其中梭杆菌差异显著(P<0.05),葡萄球菌差异极显著(P<0.01)。     

柔嫩艾美耳球虫病鸡盲肠上皮细胞凋亡的分析

从细胞凋亡的角度探讨柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)对鸡盲肠黏膜的损伤机理,为鸡球虫病的防治提供理论依据.用E.tenella孢子化卵囊感染雏鸡,于感染后不同时间段取盲肠组织,运用常规病理组织学、超微病理学和原位末端标记技术对感染E.tenella病鸡肓肠黏膜上皮细胞和肠腺上皮细胞进行观察和分析.结果表明:鸡感染E.tenella的第2天,盲肠黏膜上皮细胞凋亡数即开始增加,感染后第4～6天是病变最严重且具有特征性的阶段,主要表现为中、后段盲肠黏膜深层严重出血,大最黏膜上皮脱落,严重者可见整个黏膜几乎完全脱落,肠腺破坏,其表面被覆盖大量脱落的变性、坏死的上皮细胞和红细胞,残存的黏膜上皮细胞和肠腺上皮细胞凋亡速度加快,大多数上皮细胞处于凋亡状态,凋亡指数极显著(P≤0.01)高于空白对照组,凋亡细胞体积缩小,细胞线粒体肿胀,严重时破裂成大空泡,染色质致密边集或断裂成核碎片,形成膜包裹性凋亡小体.结果提示E.tenella感染鸡后盲肠上皮细胞凋亡加重,以裂殖生殖阶段最为明项,且与损伤程度和病程密切相关.     

鸡球虫病四价活疫苗对毒害艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫的免疫效果观察

为评价一种商品化鸡球虫病四价活疫苗[柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)、毒害艾美耳球虫(E.necatrix)、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫]对E.necatrix和E.tenella的免疫保护效果,本研究基于试验鸡血便记分、存活率、相对增重率、病变值、卵囊值及抗球虫指数(ACI)等指标对其免疫效果进行检测.结果表明,免疫攻虫组抗E.necatrix和E.tenella的ACI分别为157.3和135.6,均低于160,表明该球虫疫苗抗两种球虫的效果均为低效.然而,免疫攻虫组鸡血便数量、血便记分、增重、卵囊产量和病变记分等指标均优于阳性对照组.综合指标显示,该疫苗对E.necatrix和E.tenella具有一定的免疫保护力,但单纯采用疫苗并不能够达到防控鸡球虫病的目的.     

柔嫩艾美耳球虫细胞培养液对鸡胚盲肠上皮细胞活性的影响

为了探讨鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)分泌物及代谢产物对鸡胚盲肠上皮细胞活性的影响,用E.tenella裂殖生殖期细胞培养液培养鸡胚盲肠上皮细胞24 h,通过MTT法检测细胞活性,HE染色观察细胞形态变化。结果:用含25%的48 h及72 h攻虫培养液的混合培养基可使鸡盲肠上皮细胞的活性显著下降(P0.01)。表明E.tenella裂殖生殖期的分泌物及代谢产物可降低未感染鸡胚盲肠细胞的活性。     

内源性NO在雏鸡球虫感染中的作用

以腹腔注射途径给予感染柔嫩艾美耳球虫 (E.tenella)雏鸡细菌脂多糖 (L PS)和地塞米松 (Dex) ,用铜离子活化镉还原法检测血清 NO- 2 水平 ,并通过测定 NBT阳性细胞百分率、雏鸡增重、免疫器官的脏器系数、OPG值以及盲肠病变记分等指标 ,探讨了 NO在雏鸡感染球虫过程中的作用。试验结果表明 ,与空白对照组相比 ,给予 L PS可使 NBT阳性细胞百分率明显升高 (P<0 .0 1) ,并使盲肠病变及球虫感染引起的增重下降有所减轻 ,这提示 L PS对雏鸡具一定的保护作用 ;而给予 Dex不仅降低了感染雏鸡血清 NO- 2 的水平、NBT阳性细胞百分率、增重和胸腺的脏器系数 ,还增加了 OPG值和盲肠病变记分 ,说明在雏鸡感染球虫过程中 ,Dex会减少 NO的生成 ,并使雏鸡抗球虫免疫力下降。     

雏鸡感染柔嫩艾美耳球虫后脂质过氧化物的变化

为了探讨柔嫩艾美耳球虫 (E.tenella)对感染雏鸡的损伤机制 ,本试验给 10日龄海兰白公雏鸡口服柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊 8× 10 4个 /只 ,在感染后 2、4、6、7、9、12、16和 2 1d分别各取 5只雏鸡剖检 ,取盲肠并采血 ,观察盲肠病理组织学变化 ,测定盲肠组织及血清中的丙二醛 (MDA )、超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)的水平。结果表明 ,雏鸡在感染 E.tenella后 2～ 4d,盲肠开始出现损伤 ,同时 SOD和 GSH- Px活性也开始下降 ;感染后 4～ 7d,盲肠粘膜上皮和肠腺上皮细胞大量变性、坏死崩解 ,发生严重损伤时 ,盲肠及血清中 MDA含量显著增加 ,并持续到 9d,同时 SOD和 GSH- Px活性也显著下降 ;感染 9d后 ,损伤的盲肠组织及 MDA、SOD和 GSH- Px水平逐渐恢复 ,至 2 1d基本达到正常     

藏鸡和隐性白羽鸡感染柔嫩艾美耳球虫后免疫相关基因的表达变化分析

试验旨在从免疫遗传学的角度初步探讨藏鸡（TC）和隐性白羽鸡（RWC）对柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）易感性差异的分子机制,分别用1×10⁵个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊感染对球虫具有抗性的藏鸡和易感的隐性白羽鸡。应用实时荧光定量PCR检测藏鸡和隐性白羽鸡感染前0 d和感染后第2、4、6和8天脾脏、盲肠、胸腺、法氏囊中γ-干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-2（IL-2）、IL-16、Toll样受体（TLR3）和TLR15免疫相关基因的转录水平变化。结果显示,藏鸡脾脏IFN-γ、IL-2、IL-16及TLR3、TLR15免疫相关基因转录水平于感染后第4和8天明显上调,隐性白羽鸡则无明显变化。藏鸡盲肠IFN-γ转录水平在感染后第2天显著上调（P<0.05）,TLR3在感染后第4天起显著上调（P<0.05）,其余免疫相关基因变化幅度不大;隐性白羽鸡盲肠IFN-γ转录水平在感染后第8天显著上调（P<0.05）,IL-2在感染后第2天起显著上调（P<0.05）,IL-16在感染后第6天起显著上调（P<0.05）,TLR3在感染后第2和8天显著上调（P<0.05）,TLR15变化幅度不大。各免疫相关基因在2个品种鸡胸腺和法氏囊中均出现上调或下调,但除藏鸡法氏囊TLR3和TLR15转录水平变化幅度相对较大外,其余免疫相关基因与感染前相比变化幅度不大。以上结果显示,球虫感染主要导致藏鸡和隐性白羽鸡脾脏和盲肠中的各免疫相关基因出现显著变化,表明宿主的遗传背景在一定程度上可影响球虫感染的免疫应答。     

地克珠利对球虫感染雏鸡血清抗氧化功能的影响

选择120只14日龄雏鸡,随机分为对照组(Ⅰ)、感染组(Ⅱ)和地克珠利组(Ⅲ),每组40只.除Ⅰ组外,其余每只鸡口服感染8.0x104个E.tenella孢子化卵囊,分别于感染后第0、3、6、9、12天,每组随机取鸡5只,心脏采血,对血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量进行测定.结果表明,与Ⅰ组比较,Ⅱ组血清SOD活性在感染后3、6、9 d极显著降低(P《0.01),GSH-Px活性在感染后6 d下降显著(p《0.05),MDA含量和CAT活性均表现不同程度的升降,但差异不显著(p》0.05).在感染高峰期(6 d),Ⅲ组血清SOD、GSH-Px、CAT活性虽然与Ⅱ组的差异未达显著水平,但分别较其提高了7.33%、19.82%和52.08%,MDA含量降低了14.58%,且GSH-Px、CAT活性与MDA含量与Ⅰ组比较差异不显著.提示地克珠利在一定程度上能增强球虫感染鸡的抗氧化能力.     

柔嫩艾美尔球虫实验感染雏鸡体液免疫机制研究

本文通过人工复制的鸡球虫病鸡,利用免疫组化技术等方法,检测了柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)初次感染雏鸡后,盲肠局部和免疫器官中IgG生成细胞数的动态变化。结果表明:攻毒后雏鸡盲肠粘膜、脾脏、法氏囊、盲肠扁桃体中的IgG生成细胞分别于第3、3、3、2d开始增殖,在第12、12、16、9d达到峰值,随后即开始下降,盲肠扁桃体中的IgG生成细胞数在第22d仍高于对照组,且差异显著(P<0.05)。     

柔嫩艾美耳球虫对藏鸡和隐性白羽鸡致病性差异分析

为进一步明确柔嫩艾美耳球虫对球虫易感性差异鸡种的致病性,本研究以1×10⁵个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊的剂量分别感染对球虫具有抗性的藏鸡和易感的隐性白羽鸡,接种后观察记录各组鸡的临床表征、血便记分、死亡率、增重、盲肠病变记分、卵囊产量,并于感染前和感染后3、6和8 d每个品种分别随机选择5只鸡采集抗凝血,应用流式细胞仪（FCAS）检测外周血CD4⁺T和CD8⁺T淋巴细胞亚群数量。结果显示,柔嫩艾美耳球虫感染后藏鸡相对增重率高于隐性白羽鸡,死亡率、血便记分和盲肠病变记分均低于隐性白羽鸡,但卵囊产量高于隐性白羽鸡。外周血T淋巴细胞亚群变化方面,感染前,藏鸡CD4⁺T淋巴细胞数及CD4⁺/CD8⁺比值均高于隐性白羽鸡。感染后第3天,藏鸡CD4⁺、CD8⁺ T淋巴细胞数及CD4⁺/CD8⁺比值下降,隐性白羽鸡CD8⁺ T淋巴细胞数略有下降,CD4⁺T淋巴细胞数及CD4⁺/CD8⁺比值上升,但CD4⁺/CD8⁺比值仍显著低于藏鸡（P<0.05）。感染后第6天,2个品种鸡CD4⁺ T淋巴细胞数及CD4⁺/CD8⁺比值均下降,其中藏鸡表现为显著下降（P<0.05）,而隐性白羽鸡仅CD4⁺/CD8⁺比值显著降低（P<0.05）,隐性白羽鸡CD8⁺ T淋巴细胞数显著升高（P<0.05）。感染后第8天,2个品种鸡CD4⁺/CD8⁺比值显著下降（P<0.05）,藏鸡CD8⁺ T淋巴细胞数显著高于隐性白羽鸡（P<0.05）,但CD4⁺/CD8⁺比值显著低于隐性白羽鸡（P<0.05）。结果表明,球虫对藏鸡和隐性白羽鸡的致病性存在差异,这种差异与T淋巴细胞介导的免疫应答反应密切相关。     

假蒟提取物对感染柔嫩艾美耳球虫鸡血液指标的影响

本试验旨在研究假蒟提取物对感染柔嫩艾美耳球虫鸡血液指标的影响。270只1日龄海南文昌公鸡,随机分为6个组,每组3个重复,每重复15只,T1、T2和T3组为对照组(依次分为不感染不给药组、感染不给药组、感染给药组);T4、T5和T6组为假蒟添加组,分别在基础日粮中添加200、400、600mg/kg假蒟提取物粉剂。15日龄时,每组随机抽取30只鸡,除T1组灌服生理盐水外,其他各组鸡均经口接种柔嫩艾美耳球虫卵囊悬液,分别于接种前1d,接种后3、6、9d清晨采血测定其血液指标。结果表明,与感染球虫不给药的T2组相比,假蒟组(T4、T5、T6)可以显著降低感染球虫鸡粪便中球虫卵囊值(P0.05)。假蒟组在感染球虫后第6天,与T1组比,RBC、HGB、HCT、Ca2+、Na+、Cl-、TP、ALB、GLB、TG、CHOL、T4等指标呈下降趋势;但在感染球虫后第9天,TP、GLB含量均显著高于T1组(P0.05);在感染球虫后第6天,假蒟组与对照组相比,ALT、AST浓度水平均显著降低(P0.05)。结果提示,假蒟提取物能提高感染球虫后鸡机体免疫机能,降低肝脏损伤,降低鸡感染球虫后粪便卵囊值,具有一定的抗球虫效果。     

柔嫩艾美耳球虫感染后组织抗氧化功能的动态变化

选择 8 0只 33日龄健康罗曼公鸡 ,随机分成感染组 (n=40 )和对照组 (n=40 )。感染组口服接种柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊 1.5× 10 5个 /只 ,对照组不感染。分别于感染前 (0 d)和感染后 (2、4、6、8d)扑杀 ,采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏 ,测定组织中丙二醛 (MDA)及过氧化氢酶 (CAT)、超氧化物歧化酶 (SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)的活性。结果表明 ,柔嫩艾美耳球虫感染后 ,心脏和脾脏 MDA含量与对照组相比差异不显著 (P>0 .0 5 ) ,肝脏、肺脏、肾脏中 MDA含量呈波动变化 ;与对照组相比 ,除肾脏 SOD差异不显著外 ,其他 4种组织 SOD在感染后 2、4、6、8d均显著高于对照组 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ;在整个试验期间 ,心脏、脾脏中 GSH- Px与对照组相比差异不显著 (P>0 .0 5 ) ,肝脏在感染后 6、8d显著高于对照组 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ,肺脏、肾脏 GSH- Px仅在感染后 2 d与对照组相比差异显著 (P<0 .0 5 ) ;肝脏和脾脏 CAT与对照组相比差异不显著 (P>0 .0 5 ) ,心脏 CAT只在感染后 8d差异显著(P<0 .0 5 ) ,肺脏 CAT只在感染后 4d差异显著 (P<0 .0 5 ) ,肾脏 CAT只在感染后 2 d差异显著 (P<0 .0 5 )。提示感染柔嫩艾美耳球虫后 ,机体的抗氧化功能发生了一定的变化 ,自由基参与了球虫病的发病过程     

槟榔提取物对球虫感染鸡血液指标及抗球虫效果的影响

本试验旨在研究槟榔提取物对感染柔嫩艾美耳球虫鸡血液指标及抗球虫效果的影响。选取270只1日龄文昌鸡公鸡,随机分为6个组,分别为空白对照组、阴性对照组、阳性对照组及槟榔1、2、3组,其中,3个对照组均饲喂雏鸡基础日粮,槟榔1、2、3组分别饲喂在基础日粮中添加200、400、600 mg/kg槟榔提取物粉剂的试验日粮。15日龄时,随机从每组中抽取30只体重相近的鸡,除空白对照组外,各组每只试验鸡经口灌服1 mL含1×10⁵个球虫孢子化卵囊的生理盐水混合液。结果表明:①感染后第6、9天,与空白对照组、阳性对照组相比,槟榔1、2、3组和阴性对照组血液中红细胞数、血红蛋白浓度、红细胞比容降低;②感染后第3、9天,与空白对照组相比,阳性对照组和槟榔1组血清中总蛋白、白蛋白、球蛋白含量升高;感染后第9天,槟榔2、3组血清中谷丙转氨酶含量较空白对照组、阳性对照组显著降低(P<0.05),槟榔1组血清中尿酸含量较阴性对照组、阳性对照组及槟榔2、3组显著降低(P<0.05);感染后第6天,阴性对照组血清中Na⁺、Cl^-浓度较空白对照组、阳性对照组显著降低(P<0.05),槟榔1组Na⁺、Cl^-浓度与3个对照组间差异均不显著(P>0.05);③槟榔1、2、3组的抗球虫指数分别为128.48、126.53和141.11。综上所述,日粮中添加200、400和600 mg/kg槟榔提取物粉剂对于球虫感染鸡抗球虫药效中等;200、400 mg/kg槟榔提取物粉剂可维持感染球虫鸡血清中Na⁺、Cl^-浓度的稳定,降低肝脏损伤。