小麦孢囊线虫江苏群体的形态学与分子特征鉴定

【目的】明确小麦禾谷类作物孢囊线虫（cereal cyst nematodes,CCN）江苏群体的种类组成及群体间遗传变异情况,为抗病品种的选育、利用以及病害综合防治提供依据。【方法】对江苏省的13个代表性CCN群体进行孢囊、阴门锥和2龄幼虫的形态观察和形态测计并与相似种进行比较;PCR扩增上述群体的rDNA-ITS区并克隆测序,构建基于ITS序列的系统发育进化树。【结果】通过形态观察和形态测计值的比较,所测定的江苏群体均与已报道的禾谷孢囊线虫（Heterodera avenae）中国群体的测计值相接近;系统进化关系分析显示CCN江苏群体、国内其它地区以及国外禾谷孢囊线虫群体均处于同一大的进化分子簇,且国内和国外群体分别处于不同的进化分支。【结论】所测定的13个江苏省CCN代表性群体均为禾谷孢囊线虫,各群体间形态及ITS序列变异较小,江苏省目前尚未发现菲利普孢囊线虫（H. filipjevi）。     

青海省当归茎线虫种类鉴定

采集和分离到青海省大通县、互助县4个当归茎线虫群体,通过形态特征和测量值比较,以贝叶斯法构建ITS-rDNA系统发育树,并用4种内切酶DdeⅠ、HinfⅠ、Tru9Ⅰ(MseⅠ)和SduⅠ 进行ITS-RFLP分析。结果表明,青海省大通县、互助县当归茎线虫群体的形态特征与腐烂茎线虫（Ditylenchus destructor）基本一致,体长略小,雄虫尾长和c(体长/体宽)值略大,雌虫a(体长/尾长)值略大,其他测量值均与腐烂茎线虫模式种一致。通过rDNA-ITS序列系统发育分析,发现青海省大通县、互助县茎线虫群体与腐烂茎线虫群体聚为一支,但不能归为目前已知基因型。rDNA-ITS区段PCR-RFLP结果显示,青海省4个群体与已报道的腐烂茎线虫群体酶切结果不一致,且存在明显差异。经形态与分子生物学特征分析,将这4个线虫群体确定为腐烂茎线虫,表明该线虫已在青海省发生与分布。     

陕西不同地区马铃薯腐烂茎线虫的分离鉴定及同源性分析

旨在鉴定陕西不同地区马铃薯腐烂茎线虫生物型,为其防治提供理论依据。对陕西不同地区马铃薯腐烂茎线虫进行分离,对其形态进行观察并测量特征值,通过茎线虫线粒体COⅠ通用引物、ITS区通用引物及A、 B生物型的特异性引物对不同地区采集马铃薯腐烂茎线虫进行PCR检测及序列分析,利用MEGA6.0进行系统发育树构建及种群同源性分析。结果表明,陕北地区腐烂茎线虫的生物型为B型,关中地区为A型。形态特征值数据显示雌成虫体长、体宽均大于雄成虫,A型的体长、体宽均大于B型。系统发育树结果显示,陕北不同地区的B型马铃薯腐烂茎线虫聚为一支,合阳、兴平的A型马铃薯腐烂茎线虫聚为一支,与分子鉴定结果相一致。     

山西省小麦孢囊线虫的形态学和分子特征分析

2010—2011年期间,在小麦扬花抽穗期对山西省不同地区小麦上的孢囊线虫进行系统调查,对主要群体的线虫形态学(包括孢囊和2龄幼虫)进行显微观察、测量和描述,并分析其rDNA分子特征。结果表明:来自山西省的小麦孢囊线虫主要群体均为禾谷孢囊线虫(Heterodera avenae);对所有群体线虫的rDNA-ITS区的PCR扩增和序列测定均得到1条大小为1 045bp的序列;系统发育分析显示,山西省的9个小麦孢囊线虫群体与来自国内的安徽、江苏、河南、北京、河北、青海等地区及国际上印度的禾谷孢囊线虫群体以及澳大利亚的澳洲孢囊线虫(H.australis)的亲缘关系较近,而与欧洲的德国、摩洛哥、西班牙、法国和英国主要群体的禾谷孢囊线虫群体的亲缘关系相对较远。     

安徽省小麦上两个孢囊线虫群体的鉴定

１９９３年，在安徽省固镇县和淮北市郊小麦根土中采集到两个孢囊线虫群体。其孢囊均呈柠檬形，阴门膜孔为双膜孔型，无下桥，有泡状突，阴门裂较短，属Ｍｕｌｖｅｙ所分５个组的第三组。这两个群体中的２龄幼虫口针平均长２４μｍ，透明尾与口针长度的比值约为１．６；在扫描电镜下观察唇区类型，属Ｓｔｏｎｅ划分的６个类型的第四类；侧区有４条侧线形成３条侧带，两条外带与横纹交叉呈网格状。上述特征均与燕麦孢囊线虫相吻合，故     

大豆孢囊线虫侵染绿豆的国内首次报道

[目的]本研究对采自山西绿豆根际的孢囊线虫进行种类鉴定,并测定孢囊线虫对绿豆的致病性。[方法]将绿豆根际孢囊线虫进行分离、观察和测量,采用通用引物对其28S、ITS和COI基因进行PCR扩增和序列分析,利用Geneious软件构建系统发育树,并采用人工接种方法测定孢囊线虫的致病性。[结果]孢囊呈柠檬形,初期白色,后期褐色或黄褐色;阴门锥明显,两侧双半膜孔型,阴门裂35.9～48.7μm,膜孔长39.7～42.4μm,膜孔宽28.0～36.3μm,下桥89.2～97.8μm,有明显的泡状突。二龄幼虫呈蠕虫形,体长401～456μm,口针长21.5～25.0μm,尾部圆锥形,透明尾长19～31μm。该种群的形态特征和测量值与大豆孢囊线虫(Heterodera glycines)一致。基于ITS+28S序列构建系统发育树,本试验种群与大豆孢囊线虫和苜蓿孢囊线虫(H. medicaginis)位于同一分支上,置信度达100%。基于COI序列构建系统发育树,本试验种群与大豆孢囊线虫(MK093154,MK093153,KY775596和MN720172)位于同一分支上,置信度达100%。将孢囊线虫回接到健康绿豆上可引起植株发病,并在根部形成孢囊。[结论]将绿豆根际分离到的孢囊线虫鉴定为大豆孢囊线虫(H. glycines Ichinohe,1952),该孢囊线虫回接到健康绿豆可侵染致病并形成孢囊,这是首次在中国发现大豆孢囊线虫在田间侵染绿豆。     

真菌AT9对禾谷孢囊线虫的寄生作用及种类鉴定

【目的】小麦孢囊线虫病是一种土传病害,用化学药剂防治存在毒性大、易残留等问题,所以筛选对该病害有生防作用的菌株,对该虫病的防治具有重要意义.【方法】通过室内试验测定菌株AT9分生孢子悬浮液对小麦禾谷孢囊线虫卵的寄生作用和对孵化的抑制作用,并进行形态学和rDNA-ITS分子鉴定.【结果】不同浓度AT9分生孢子悬浮液对卵具有明显的寄生和抑制孵化作用,且不同浓度之间存在差异;寄生率和孵化抑制率随着AT9分生孢子悬浮液浓度的增加而增大;时间越长,寄生和抑制孵化作用越明显.在第12天浓度为4.42×107 CFU/mL的AT9分生孢子悬浮液对卵的寄生率为76.17%,卵孵化的相对抑制率为60.83%.菌株AT9鉴定为土曲霉Aspergillus terreus.【结论】菌株AT9是防治小麦禾谷孢囊线虫病具有较大潜在开发价值的生防菌株.     

大豆抗孢囊线虫育种研究进展

综述了大豆抗孢囊线虫的生化机制及DNA分子标记(RFLP、RAPD)技术在大豆抗孢囊线虫病研究中的应用,大豆抗孢囊线虫各个生理小种的遗传分析,大豆抗孢囊线虫病育种的研究概况及抗病品种鉴定方法的进展,并对未来研究方向作了展望.     

小麦孢囊线虫病的研究：Ⅱ.病原燕麦孢囊线虫的孵化

用湖北天门小麦病田土壤中分离的燕麦孢囊线虫接种，并种植小麦，待小麦收割后，于不同时间内分离孢囊，在不同条件下进行孵化试验。结果表明，在室温下，旬平均９－１２℃ｘ孵出的幼虫总数多。在１５±１℃恒温下，孢囊孵出的幼虫显高于２０℃，１０℃，５℃的处理。黄棕壤土浸液，小麦根汁５倍液有抑制孢囊孵化的作用，小麦根叶汁１０倍液对孢囊孵化无显影响，小麦根汁２０倍液对孢囊孵化有利。室外自然条件下，６－１０月线虫     

中国云南省石榴根结线虫的种类初报

从云南省主要石榴产区蒙自县和会泽县，采集了根结线虫标本，采用形态特征进行鉴定。结果表明，危害蒙自石榴的根结线虫主要为：南方根结线虫[Meloidogyne Pincognita （Koforid ＆ White，1919）Chitwood，1949]、北方根结线虫（M.haplu Chitwood，1949）；危害会泽石榴的根结线虫主要为：南方根结线虫[Meloidogyme incognita（Koforid ＆ White，1919）Chitwood，1949]、花生根结线虫[M.arenaria（Neal，1889）Chitwood，1949]。     

安徽省小麦孢囊线虫的发生分布与鉴定

为了解小麦孢囊线虫(Cereal cyst nematode,CCN)在安徽省的分布和主要麦区CCN的种类,以及群体间关系,调查了淮北等麦区小麦根系白雌虫,用"Zig-Zag"法在怀远等地采集土样,用Fenwick&Oostenbrink法分离土样中的孢囊并孵化得2龄幼虫,利用孢囊阴门锥形态及de-man法鉴定CCN种类,扩增ITS特征片段,用MEGA5.05构建系统发育树。结果表明,安徽省52%采样点检出CCN,淮河以北采样点均检出CCN,江淮麦区7%的采样点检出CCN,长江以南麦区采样点未检出CCN。发生在怀远、凤台、灵璧、界首和颍上麦区小麦根际CCN鉴定为禾谷孢囊线虫(Heterodera avenae),淮河以北发生H.avenae麦区占淮北小麦种植面积的41.6%,另外,怀远H.avenae群体和其他群体亲缘关系较远,群体间形态有一定差异,但和亲缘关系差异无一致性。     

烟台地区小麦孢囊线虫的种类鉴定

2010、2011年从烟台地区麦田采集土样,分离到褐色和白色胞囊,通过分别对胞囊、2龄幼虫和卵的观察、相关数值测量并拍照,鉴定该种线虫为燕麦胞囊线虫Heterodera avenae Wollenweber,1924.这是首次在烟台地区发现该种线虫.     

江苏省小麦禾谷孢囊线虫群体核糖体DNA-ITS区序列分析

对采集自江苏省徐州、宿迁、连云港和盐城4个地区的15个小麦禾谷孢囊线虫群体进行核糖体DNA-ITS区的RFLP分析。结果表明:测定的所有群体均具有相同的酶切图谱,既具有与国外B型群体(印度群体)相同的AluⅠ和RsaⅠ酶切图谱,同时也具有中国群体独特的HinfⅠ和Tru9Ⅰ酶切图谱(C型)。采用Neighbor-Joining法(MEGA4.0)构建的ITS序列系统进化树显示:所有15个江苏群体均聚在小麦禾谷孢囊线虫组(Heterodera avenae group)下的小麦禾谷孢囊线虫复合种群(H.avenae complex)分支内,且多数江苏群体与草地孢囊线虫(H.pratensis)德国和俄罗斯群体的遗传距离相对较近。通过江苏群体与其他近源群体的ITS序列分析比较,河南郑州群体与澳州孢囊线虫(H.australis)的遗传距离较近,青海群体和河南郑州群体在分子遗传水平上具有明显的地域性,而江苏省和我国其他省份的小麦孢囊线虫群体具有丰富的遗传多样性。     

一步法提取大豆孢囊线虫DNA

本文详细介绍了一种快速提取大豆孢囊线虫DNA的方法，包括提取液的配制过程，提取DNA的步骤、PCR扩增的反应体系以及循环参数。     

抗孢囊线虫大豆新品系选育简结

<正> 大豆孢囊线虫在青岛地区发生面积达20.8万亩,占播种面积的37％,影响了青岛地区大豆生产的发展。为此我们从1984～1991年进行了抗大豆孢囊线虫的育种工作。通过杂交并经逐代筛选,育成了抗大豆孢囊线虫的三个高产优良品系,1991年秋青岛市科委邀请山东省农业科学院、山     

基于线粒体DNA-COI序列的禾谷孢囊线虫和菲利普孢囊线虫双重PCR检测

【目的】设计禾谷孢囊线虫（Heterodera avenae）和菲利普孢囊线虫（Heterodera filipjevi）特异性引物,建立同步快速检测这两种线虫的双重PCR体系,为中国小麦孢囊线虫（cereal cyst nematodes,CCN）的田间快速诊断与综合治理提供技术支持。【方法】通过比对分析10种植物寄生线虫24个群体的线粒体DNA（mtDNA）COI序列,分别设计并筛选禾谷孢囊线虫和菲利普孢囊线虫的上游特异性引物HaF8和HfF9,以及下游通用引物HafR8;通过引物浓度比和退火温度的优化,建立针对这两种CCN的双重PCR检测体系;利用该体系对中国黄淮麦区部分CCN样品进行种类鉴定。【结果】筛选并获得的特异性引物HaF8/HafR8及HfF9/HafR8,可在一步PCR反应中实现对禾谷孢囊线虫和菲利普孢囊线虫的特异性检测。引物HaF8/HafR8对禾谷孢囊线虫的特异性扩增产物为200 bp,而HfF9/HafR8对菲利普孢囊线虫的特异性扩增产物为320 bp,条带区分较明显。对双重PCR检测体系的优化发现,引物HaF8、HfF9、HafR8的退火温度为58℃时,该检测体系具有较高的特异性和扩增效率;引物HaF8﹕HfF9﹕HafR8浓度比为0.24﹕0.16﹕0.4 μ·L^-1时,该检测体系能从不同供试线虫中同时特异性地检测出禾谷孢囊线虫和菲利普孢囊线虫,且扩增效率较高。该检测体系对禾谷孢囊线虫和菲利普孢囊线虫单孢囊的检测灵敏度为1/2 000 000个孢囊,而对2龄幼虫的检测灵敏度则分别为1/640条线虫和1/1 280条线虫。对采集自中国黄淮麦区CCN病田的14份土样进行双重PCR检测,发现有8个样本只扩增出200 bp的条带,表明这些样本的CCN种类为禾谷孢囊线虫,有4个样本只扩增出320 bp的条带,表明CCN种类为菲利普孢囊线虫,2个样本同时扩增出200和320 bp两个条带,表明样品为禾谷孢囊线虫和菲利普孢囊线虫的混合发生。以上结果表明,该检测体系可以成功用于两种小麦孢囊线虫田间复合侵染情况的快速诊断。【结论】基于mtDNA-COI序列开发的特异性引物以及建立的双重PCR检测体系,可用于禾谷孢囊线虫和菲利普孢囊线虫田间单一和混合发生样本的同步快速检测。     

西安地区小麦孢囊线虫的发生与分布

2011年4-5月,于小麦抽穗至灌浆期在西安地区每涉农区县按东西南北方位选40块麦田,采用5点取样法,每点调查10株,调查病田率、发病点率、病株率和孢囊数;采根际土壤,运用漂浮法分离孢囊,用生物形态学鉴定。结果表明,小麦孢囊线虫在西安地区3个区县（长安、周至、阎良）发生,其中阎良区、长安区发生相对严重,阎良病田率分别达到50%,长安发病株平均孢囊数10.36个。小麦孢囊线虫在西安地区呈快速传播态势,研究小麦孢囊线虫在西安地区的发生状况与分布,为全面防治小麦孢囊线虫提供依据。     

安徽省大豆品质资源抗大豆孢囊线虫5号小种鉴定研究

１９８６－１９９４年安徽省９０４份大品种资料进行抗大豆孢囊线虫５号生理小种的鉴定。结果鉴定出５个抗病品种，抗性与粒色、花色、茸毛以关系密切，而与株高、生育期和百粒重等性状无关。