猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)检测方法的建立

根据GeneBank中已经发表的PRRSV毒株的ORF6基因高度保守序列,设计并合成了一对特异性引物,建立了用于检测PRRSV的RT-PCR诊断方法。从感染PRRSV-QD的Marc-145细胞中提取病毒RNA,然后经RT-PCR扩增,获得预期266 bp的目的片断,而猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒(PCV)细胞培养物及Marc-145细胞进行同条件检测,结果为阴性;PRRSV扩增产物测序结果与GeneBank中已发表的PRRSV毒株序列同源性达94.4%~97.4%且应用本研究检测方法对已知基因型的10株PRRSV盲检,检出率100%。上述研究结果表明,所建立的RT-PCR诊断方法特异性好、敏感性高,可进一步应用于猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断。     

烟草环斑病毒RT-PCR检测体系的优化

烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)是豇豆花叶病毒科(Comoviridae)线虫传多面体病毒属(Nepovirus)的代表种,是我国公布的二类进境检疫有害生物.建立特异性强、灵敏性高的检测体系是有效控制TRSV传播的技术保障.本研究在分析引物的特异性、优化退火温度及dNTPs、引物、...     

应用RT-PCR方法快速诊断猪繁殖与呼吸综合征的研究

参照国内外已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF5基因序列设计1对引物,建立检测PRRSV的RT-PCR方法,并对长春周边不同地区10个猪场送检的20份病料进行检测。特异性试验、敏感性试验和重复性试验结果表明,此方法可以用于临床检测PRRSV。应用该方法从3个猪场的4份病料检出PRRSV,证实长春周边地区存在PRRSV感染。     

区分高低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR方法的建立

为了在临床上快速、有效区分高低致病性PRRSV,参考Gen Bank发表的代表性毒株,根据高致病性毒株Nsp2基因上有30个氨基酸不连续缺失的特点,设计并合成1对引物,扩增高低致病性PRRSV Nsp2基因的目的条带长度分别为644、734 bp,从而将二者区分开来。用本方法对长春及其周边地区送检60份病料进行盲检,检出10份高致病性PRRSV。并与N蛋白基因引物RT-PCR诊断方法进行比较,结果均一致,表明该方法准确性高。本研究所建立的RT-PCR方法为PRRSV在临床上的快速诊断和实验室流行病学调查提供了简捷的技术手段。     

李矮缩病毒RT-PCR方法建立及检测应用

 以感病和健康指示植物GF305的总RNA为模板，进行cDNA的合成和PCR 扩增，结果从感病材料中扩增出与预期的172 bp大小一致的目的片段，而健康的材料无此扩增产物。对此PCR 扩增产物克隆测序，进一步佐证了RT-PCR检测结果。经过多次试验验证该检测体系，都可得到很好的重演性，从而建立了李矮缩病毒快速、灵敏、准确的RT-PCR检测技术，并进行了实际应用。     

马铃薯卷叶病毒的RT-PCR快速检测

根据马铃薯卷叶病毒的外壳蛋白基因序列,设计合成了一对寡核苷酸引物。从感染马铃薯卷叶病毒(PLRV)的马铃薯叶片中提取出病毒RNA,进行cDNA合成并运用RT-PCR技术进行体外扩增,得到一条长度约627bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致,而对照未得到任何产物。从而建立了快速灵敏的PLRV检测方法,为PLRV的防治及检测提供了有效手段。     

猪繁殖与呼吸综合征RT-PCR诊断方法的建立

为建立一种方便快捷的检测猪繁殖与呼吸综合征的RT-PCR方法,根据GenBank中已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因设计一对引物,并以合成的cDNA为模板,初步建立了检测猪繁殖与呼吸综合征的RT-PCR方法,进而对对照病毒及采集的病料组织进行了特异性、敏感性和重复性检测。结果显示,该研究建立的RT-PCR方法敏感性高,最低检测阈为10 TCID50/mL,扩增产物的特异性良好,重复性良好,可用于猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断及流行病学调查。     

四川省马铃薯病毒RT-PCR检测体系的建立

根据5种主要的马铃薯病毒外壳蛋白基因序列,分别合成了5对寡聚核苷酸引物,从马铃薯病叶组织中提取出病毒总RNA,进行cDNA合成和PCR扩增,得到了与预期片段长度一致的PCR特异扩增产物。建立了马铃薯病毒检测的RT-PCR体系,并将建立的体系应用于四川省的马铃薯病毒病的检测,在基因水平上为四川省的马铃薯检测提供了新的手段。     

变异型猪繁殖与呼吸综合征病毒在人工感染猪体内分布情况

为了解变异型猪繁殖与呼吸综合征病毒在人工感染猪体内分布规律.把5只35日龄的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体阴性的仔猪随机分成5组,分别为变异性PRRSV( FJ06A株)人工感染组(3只)、同居感染组(1只)和对照组(1只).记录各组猪的临床表现,并于攻毒后14 d屠宰,采集每只猪的心、肝、肺、脾、肾、胰、颌...     

PNRSV RT-PCR检测体系的建立与应用

以指示植物GF305和田间果树为试材,建立并优化了特异性强、灵敏度高、成本低的李属坏死环斑病毒(PNRSV)RT-PCR检测体系,使用该优化体系对樱桃树、桃树和杏树中携带PNRSV的情况进行了调查。结果表明,被检材料的李属坏死环斑病毒(PNRSV)感染率均较高,但程度不同。     

CSFV和PRRSV二联RT-PCR检测方法的建立

参照GenBank中猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)基因保守序列,设计2对特异引物,通过对最佳反应条件的优化,建立了CSFV和PRRSV的二联RT-PCR检测方法,该方法可同时扩增得到2条与试验设计相符的443 bp(CSFV)和246 bp(PRRSV)特异性条带。应用该二联RT-PCR方法检测猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)结果均为阴性,证明该方法有良好的特异性。将已知阳性病毒PCR模板最高稀释倍数作为PCR的敏感度,结果表明该二联RT-PCR体系扩增的敏感度为10-3,可对CSFV和PRRSV单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。     

用反转录-聚合酶链反应检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型毒株的基因序列设计了一对特异性引物P1/P2,扩增的片段为550bp,根据欧洲型毒株设计了一对特异性检测引物P3/P4,扩增的片段为433bp,建立PRRSV的RT-PCR的检测与血清型鉴别方法。特异性试验表明,这2对引物均不能扩增其他常见的繁殖障碍相关病毒的RNA或DNA。敏感性试验表明,这2对引物可以分别到检测10-5TCID50和10-4TCID50的病毒含量。利用该方法对重庆、四川某些猪场中临床上疑似为PRRS的20份送检组织样品进行检测,只有引物P1/P2能扩增出与预期大小相符的RT-PCR产物;其中有15份样品呈PRRSV阳性结果,阳性率为75%,说明送检的样品感染的PRRSV为美洲型。试验结果表明该方法快速检测病料组织中PRRSV是可行的,是临床上对PRRS进行快速诊断和分子流行病学调查的实用方法。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法的建立

根据文献合成1对针对PRRSV毒株ORF6基因高度保守序列的引物,建立用于检测PRRSV的SYBR Green I荧光定量RT-PCR诊断方法.提取PRRSV-LC病毒RNA,经所建立的荧光定量RT-PCR方法扩增,可获得特异的扩增曲线,而日本乙型脑炎病毒(JEV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒(PCV)进行同条件检测,结果为阴性;方法可检测到1 TCID_(50) PRRSV,比琼脂糖凝胶电泳敏感度高10～100倍.结果表明,所建立的PRRSV荧光定量RT-PCR诊断方法特异性好、敏感性高,可进一步应用于猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断和科学研究.     

高致病性蓝耳病毒与低致病性蓝耳病毒RT-PCR检测方法

将高致病性蓝耳病和低致病性蓝耳病病毒接种于Marc145细胞培养并观察细胞病变情况,将有细胞病变的病毒进行连续传代培养。根据高致病性蓝耳病与低致病性蓝耳病在NSP2基因上有87 bp连续缺失,从NCBI上下载7对高致病性蓝耳病保守序列设计一对引物。通过RT-PCR方法进行检测证明实验室所保存的这两株毒株分别为高致病性蓝耳病和低致病性蓝耳病,并且建立了高致病性蓝耳病与低致病性蓝耳病的检测方法。     

重组N蛋白抗原检测PRRSV抗体间接ELISA方法的建立

采用纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒重组核衣壳蛋白作为ELISA试验的标准抗原,通过优化ELISA各种条件,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。该方法具有良好的特异性和重复性。     

用RT—PCR对湖北省部分猪场繁殖与呼吸综合症的检测

猪繁殖与呼吸综合症 (ｐｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅ,ＰＲＲＳ)是目前危害世界养猪业的主要疾病之一 ,能引起母猪严重繁殖障碍及各种年龄的猪出现呼吸道症状 ,育肥猪发病率高、发病后生长缓慢、饲料报酬低、康复猪可长期带毒并排毒。自 1 987年美国首次报道以来 ,世界上很多国家都相继报道 ,并分离到该病毒 ,ＰＲＲＳ已成为国际上危害养猪业最严重的传染病之一。该病病原为ＰＲＲＳ病毒 (ｐｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅｖｉｒ…     

重庆市及其周边地区猪繁殖与呼吸综合征的流行病学研究

采用RT-PCR方法,对2007年6月至2008年1月采自重庆及其周边7个地区9个猪场的68份疑似高致病性蓝耳病病料进行PRRSV检测。结果表明,6个猪场为HP-PRRSV阳性,3个为HP-PRRSV和经典型PRRSV阳性。HP-PRRSV平均阳性率为42.65%(29/68),3个猪场中经典型PRRSV平均阳性率为54.55%(12/22)。同时,从6个猪场采集血清131头份,HP-PRRSV阳性率为4.58%(6/131),经典PRRSV阳性率为12.21%(16/131)。HP-PRRSV RT-PCR阳性产物经序列测定后,进化树分析表明,BQ2、LK、LC、DA3样品中的HP-PRRSV分为4个支系,与JXA1株同源性为96.2%~98.9%。检测结果表明,在灭活疫苗广泛推广应用后,该病流行虽然得到遏制,但时有发生,流行毒株亦存在较大的变异。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学及免疫学的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒是严重危害世界养猪业的病原,其分子生物学及感染机制的研究,对猪繁殖与呼吸综合征的预防和控制非常重要。笔者对猪繁殖与呼吸综合征病毒的病原学特性、分子生物学特征、获得性免疫和免疫调节与逃避机制等方面进行了综述,以期为该病的深入研究提供参考。