四川松材线虫与拟松材线虫的PCR-RFLP鉴别

应用PCR-RFLP技术对来自四川省8个地方的枯死松树样品中的伞滑刃属线虫(Bursaphelenchus)群体进行了分子鉴定。结果显示来自邻水、雅安的枯死松树样本中含有松材线虫(B.xylophilus),而来自大竹和遂宁的枯死松树样本中含有拟松材线虫(B.mucronatus)。其他伞滑刃属线虫包括莱鲁尔夫伞滑刃线虫(B.rainulf)、霍夫曼伞滑刃线虫(B.hofumanni)、泰国伞滑刃线虫(B.thailandae)、变异伞滑刃线虫(B.aberrans)。本研究中选用的4种限制性内切酶(DraⅠ、SalⅠ、HhaⅠ、AluⅠ)除SalⅠ外均可对所鉴定的这6种伞滑刃属线虫产生特异性的酶切位点,从而可均有效地鉴别出松材线虫、拟松材线虫和其他4种伞滑刃属线虫,其结果可为今后这几种伞滑刃属线虫的分子鉴定提供一定的参照。     

余姚市松木中伞滑刃属线虫种类调查

对宁波余姚市针叶林中的伞滑刃属线虫种类进行了调查,从采集的218份样本中,根据形态学特征共分离和鉴定出伞滑刃属线虫8种,松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus）、莱奴尔夫伞滑刃线虫（B．rainulfi）、拟松材线虫（B．mucronatus）、林伞滑刃线虫（B．1ini）、湖南伞滑刃线虫（B．hunanensis）、泰国伞滑刃线虫（B．thailandae）、中华伞滑刃线虫（B．sinensis）和程氏伞滑刃线虫（B．chengi）。其中,程氏伞滑刃仅在台湾的木质包装中报道：     

广东马尾松木中线虫种类的调查与鉴定

从广东乳源、封开、广州市郊采到276个马尾松松材线虫病死木样本,共分离鉴定出13种线虫:畸刺伞滑刃线虫(Bursaphelenchus teratospicularis),松材线虫(B.xylophilus)、拟松材线虫(B.mucronatus)、变异伞滑刃线虫(B.aberra-ns)、小角伞滑刃线虫(B.corneolus)、利昂伞滑刃线虫(B.leoni)、湖南伞滑刃线虫(B.hunanensis)、红松滑刃线虫(Aphelenchoides resinosi)、滑刃属线虫(Aphelenchoides sp.)、斯坦纳长尾线虫(Seinura steineri)、小茎线虫(Ditylenchus parvusZell)、剑尾齿杆双胃线虫(Odorhabdiplogaster xiphocaudatus)和寄生小杆属线虫(Parasitorhabditis sp.)。其中畸刺伞滑刃线虫为中国新记录种,畸刺伞滑刃线虫、斯坦纳长尾线虫和小茎线虫为马尾松上的新记录种。     

马来西亚贝壳杉中一种伞滑刃线虫的鉴定

    宁波出入境检验检疫局植检实验室在对1批出境的船舶铺垫材料检测时,截获一种伞滑刃属线虫,进行了形态学观察、测量,以及分子鉴定.该线虫属松材线虫组,交合刺较大,长约35～43 μm,明显大于松材线虫B. xylophilus、拟松材线虫B. mucronatus、锥尾伞滑刃线虫B. conicaudatus、伪伞滑刃线虫B. fraudulentus和B. luxuriosae等近似种的交合刺, 与豆伞滑刃线虫B. doui交合刺34～43 μm接近,但该线虫雌虫腹面末端有缺刻,而豆伞滑刃线虫的雌虫靠腹面末端有2～4 μm的尾尖突.该线虫ITS-RFLP图谱与新加坡伞滑刃线虫一致,但交合刺比新加坡伞滑刃线虫交合刺41～48 μm略小,且其雌虫和雄虫的尾均略长,雌虫尾末端多数有缺刻,而新加坡伞滑刃线虫尾末端钝圆,有短尾尖突.该批铺垫材料来自马来西亚,这是马来西亚除莱奴尔夫伞滑刃线虫外发现的第二种伞滑刃线虫.     

数量分类学方法在松材线虫组线虫形态分类上的应用

用数量分类学的方法对14种松材线虫组线虫形态进行了聚类分析。结果表明,拟松材线虫、大尖尾伞滑刃线虫、伪伞滑刃线虫、锥尾伞滑刃线虫、豆伞滑刃线虫和吉拉尼伞滑刃线虫在所选取的形态特征上表现出一致性;新加坡伞滑刃线虫、韩国伞滑刃线虫、杨伞滑刃线虫也表现出较高的一致性;拟灰黄锦天牛伞滑刃线虫、日本冷杉伞滑刃线虫、鲍嘉伞滑刃线虫和灰黄锦天牛伞滑刃线虫在形态上较为相近;松材线虫相对独立为一支。     

伞滑刃线虫属分类研究进展

 伞滑刃属线虫是重要的寄生线虫。该属松材线虫是中国林业上一种重要的外来入侵性有害生物。随着松材线虫及其近缘种拟松材线虫对森林资源危害性的加重,该属越来越受到广泛重视。迄今报道已有63个种,其中3个种有待查考（species inquirendae）、1个种有待确认（species indeterminatae）、1个种发现地不详（species incertae sedis）、5个裸名（nomen nuda）。对松材线虫和拟松材线虫的区分至关重要。为了弥补形态鉴定的不足,还辅以PCR技术鉴别。已开发出的PCR鉴别技术有RAPD,PCR直接鉴别法、RFLP和SSCP等。     

日本针叶木伪伞滑刃线虫鉴定及其与近似种的比较

首次从日本进境的针叶木包装箱中截获了伪伞滑刃线虫BursaphelenchusfraudulentusRühm,1956,该种在我国尚未记载,在形态上与松材线虫、拟松材线虫较为相似.本文对这3个近似种进行了形态学比较.     

利用rDNA的PCR-RFLP对伞滑刃属线虫群体的分子鉴别

应用对rDNA中ITS的PCR-RFLPs技术和方法对来自中国、日本和韩国的松树或木质包装箱中分离出来的伞滑刃属(Bursaphelenchus)6个线虫群体进行了分子鉴定.其中来自浙江镇海的松树和日本的木质包装箱中分离出的各一线虫群体被鉴定为松材线虫(B.xylophilus),而来自浙江富阳的松树和韩国、香港及日本的木质包装箱中的另一个群体等4群体被鉴定为拟松材线虫(B.mucronatus).本研究中选用的4种限制性内切酶(Hinf Ⅰ、Hae Ⅲ、MspⅠ、cfo Ⅰ)的特异性酶切位点均可以有效地鉴别松材线虫和拟松材线虫.     

枯草芽孢杆菌OKB105菌株不同培养基发酵上清液的杀线活性

采用室内离体测定方法,测试枯草芽孢杆菌OKB105菌株在不同培养基(Landy、LB、λ肉汤、TY、超级肉汤、胰化蛋白胨肉汤、TYGPN、A、M63、M9)的发酵滤液中对植物寄生线虫[南方根结线虫(Meloidogyne incognita)2龄幼虫、程氏伞滑刃线虫(Bursaphelenchus chengi)、豆伞滑刃线虫(B.doui)、拟松材线虫(B.mucronatus)]的生物活性,以期获得具有较高防效的发酵培养基。结果表明:OKB105菌株的培养滤液分别处理植物寄生线虫6 h后,对南方根结线虫2龄幼虫防效较佳的发酵培养基是TYGPN、LB、LANDY、TY、胰化蛋白胨肉汤、超级肉汤等6个培养基;对豆伞滑刃线虫防效较佳的是TYGPN和TY等2个培养基;对豆伞滑刃线虫、拟松材线虫防效最佳的是TYGPN培养基;OKB105菌株TYGPN培养基发酵上清液对4种标靶线虫都具有较强的拮抗性。     

拟松材线虫对黑松致病性研究

松材线虫病（Ｂｕｒａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓｍｕｃｒｏｎａｔｕｓ）是发生在松树上的一种毁灭性病害 ,目前已在日本、中国、美国、加拿大和韩国等分布 ,并在日本和中国造成巨大的损失。在北美洲 ,松材线虫分布也很广。针叶树中还有一些形态与松材线虫非常相近的伞滑刃线虫 ,统称松材线虫复合种（ＰＷＮＣ） ,其中最常见的是拟松材线虫。拟松材线虫在东亚、美洲、欧洲都有 ,分布极广泛。杂交试验和ＤＮＡ分析证实松材线虫和拟松材线虫有密切的关系 ,能用ＲＡＰＤ和ＲＦＬＰ技术进行区分 ,拟松材线虫的ＤＮＡ有东亚和欧洲两种类型 ,前者主要分…     

松墨天牛幼虫真菌病侵染途径研究

为了探讨生物防治方法控制松材线虫病的发生和发展,开展了松材线虫病死木昆虫区系调查及虫种鉴定,进行了白僵菌孢子萌发试验和人工侵染试验。结果表明,在松材线虫病死木中,松纵坑切小蠹、马尾松梢小蠹、松瘤小蠹、额毛小蠹、松墨天牛为优势种。所用白僵菌株的孢子萌发率和萌发时间之间存在显著相关,相关系数均达0.9以上。中山陵地区的几种主要小蠹均能被白僵菌所感染,即均具有携带白僵菌孢子的能力。由此推测,松墨天牛幼虫感染白僵菌的途径很可能是:某种小蠹虫先感染白僵菌,然后该小蠹虫经过二次侵染,将白僵菌孢子转移给松墨天牛幼虫,从而导致松墨天牛幼虫感病。     

松材线虫及携带细菌对黑松复合的侵染

从不同松树上分离松材线虫、拟松材线虫、滑刃线虫和小杆线虫,并从松材线虫和小杆线虫体上分离细菌,将线虫无菌化处理后与从线虫体上分离到的荧光假单胞杆菌、产气肠杆菌混合接种无菌黑松苗和愈伤组织。结果表明,单独接种无菌线虫或细菌不能使黑松致病,无菌松材线虫、无菌拟松材线虫只有与有毒性的荧光假单胞杆菌混合接种时才能使黑松无菌苗和愈伤组织发病,细菌通过线虫携带在树体内传播扩散,使松树致病。研究进一步证明了线虫和细菌在松材线虫病致病过程中起协同作用。     

松木包装板材的伞滑刃线虫种类鉴定

记述了输入福建省的松木包装板材中分离到的松材线虫(Bursaphelenchusxylophilus)和拟松材线虫(B.mucronatus),讨论了松材线虫对福建省林业构成的威胁.     

华平县松树萎蔫死亡主要原因初步研究

 对华坪县11个乡镇林区萎蔫死亡松树进行采样调查，多数样本分离到线虫，该线虫经纯化培养后鉴定为拟松材线虫（Bursaphelenchus mucronatus）。采样调查结果表明，华坪县全县已有5个乡镇的松林发生不同程度的萎蔫死亡。拟松材线虫和松墨天牛共同危害（松墨天牛作为拟松材线虫的媒介昆虫）是松树死亡的主要原因，而且在华坪县这种共同危害正成为一种危害趋势。     

松材线虫两种实用分子检测技术

为检验已开发的SCAR标记与实时PCR两种分子检测方法鉴定松材线虫的可靠性,本文选用线虫未知种样品7个以及已知种样品3个为实验材料,采用上述两种分子检测方法进行检测,并且对7个线虫未知种样品进行形态鉴定。结果表明：1）运用SCAR标记检测,第2、3、4、7号4个未知种样品与8号松材线虫样品出现了一条清晰、明亮的860b...     

松材线虫快速检测技术方法的比较研究

为了获取准确、快速检测松材线虫的方法，利用纤维素酶活性、苯乙酸与苯甲酸含量和显色剂检测松材线虫的方法进行了比较研究．纤维素酶活性检测结果为病树与健树酶活性差异显著．病树的光吸收值与健树的光吸收值差异不显著，但测定结果不稳定．显色剂测定病树内与健树内的显色差异明显，病树的显色结果呈深红色至浅红色，线虫愈多色泽愈深；健康材呈无色，感染拟松材线虫的松材呈清白色或无色．显色剂检测是简单、快速和有应用价值的方法。     

松材线虫内生细菌与病原细菌的互作关系分析

采用16S rRNA基因文库和 illumina Miseq技术测序对松材线虫内生细菌群落的宏基因组进行初步分析,文库显示优势菌群为黄单胞菌科(22.41%)、鞘脂杆菌科(17.66%)、丛毛单胞菌科(14.71%)、根瘤菌科(10.17%)。采用稀释平板法,从松材线虫体内分离出5株内生细菌。利用形态学、生理学及16S rRNA 序列特征等对这些内生细菌进行了分类鉴定。研究发现这些内生细菌在体外均显示较强的杀线虫活性,其中克雷伯氏菌属sct5的杀虫活性最大,作用4 d松材线虫的死亡率即可达到100％。该细菌产生毒性蛋白酶并在体外快速形成生物膜。进一步研究发现,该内生细菌与杀线虫芽孢杆菌B16之间具有强亲和性,混合2个菌株sct5+B16作用1 d对松材线虫的防效为75％,明显好于单菌株sct5 (60％)和B16(40％)。而另一内生细菌肠杆菌属sct29与B16存在拮抗关系,两者不亲和,混合菌株sct29+B16作用1 d对松材线虫的防效仅为13％。本研究首次系统地报道了松材线虫可培养内生细菌的杀虫活性及其与杀线虫芽孢杆菌B16的亲和关系,对研制开发组合生防菌剂、提高生防菌株的稳定性等奠定理论基础,本研究从新的视角阐释了松材线虫内生细菌与病原细菌之间的互作关系。