腐马素研究进展

腐马素,是由南非的Gelderblom等于1988年首次发现,它主要由串珠镰刀菌(Fusarium moniliforme)产生.现已确定,腐马素共包括8种组分,分别为FA1、FA2、FB1、FB2、FB3、FB4、FC1、FC4.其中FB1是天然污染的玉米样品或真菌培养物中腐马素的主要成分,有致癌性,FA1,FA2无毒性.腐马素的结构与神经鞘氨醇十分相似,溶于水,且具有热稳定性,在胃肠道吸收较少.腐马素自被发现12年来,各界学者对其毒性、毒副作用机制、检测方法等进行了深入细致的研究,综述如下.     

应用高效液相色谱法测定玉米中的腐马素

研究了高效液相色谱法(HPLC)测定玉米中腐马素残留的分析方法。方法采用阴离子交换柱(SAX)对样品中的腐马素进行富集、以邻苯二甲醛(OPA)进行衍生，利用荧光检测器能够有效地检测到玉米中的腐马素，回收率超过80％，FB1检出限为50ng／mL，FB2为80ng／mL。应用本方法对4个不同地区玉米样品中的腐马素含量进行了检测，FB1含量在0．25～1．23μg／g之间，FB2残留低于0．47μg／g。     

抗氯霉素单克隆抗体的制备及鉴定

用人工合成的氯霉素-人血清白蛋白(CAP-HSA)作抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术建立了1株分泌抗CAP单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞1F9.经检测,其分泌的抗体亚类为IgG1,杂交瘤染色体数目84～96条,间接ELISA检测细胞培养上清效价为1256,诱生小鼠腹水的抗体效价可达16×105.该细胞连续培养生物学性状稳定,竞争间接酶联免疫吸附试验(ciELISA)显示,其与供试抗生素交叉反应小,表明该单抗具有较大的应用价值.     

禽脑脊髓炎病毒单克隆抗体的制备及鉴定

选用AEV(VR株 )CEF适应毒制备抗原 ,免疫Balb/c小鼠。应用杂交瘤技术以间接ELISA方法筛选获得一株分泌抗AEV(VR)单克隆抗体的杂交瘤细胞。制备细胞上清及腹水进行单抗特性鉴定 ,经染色体计数、免疫球蛋白类及亚类测定、特异性试验、稳定性试验、SDS PAGE电泳 ,表明该杂交瘤细胞染色体数目介于 90～ 110之间 ,该单克隆抗体亚类为IgG2a,分子量为 142KD ,ELISA测定细胞上清效价为 1∶1× 10 4 ,腹水效价为 1∶1× 10 6,与其它病原无交叉反应 ,抗体分泌稳定。     

抗氯霉素单克隆抗体的制备与鉴定

本文用人工合成的氯霉素 -牛血清白蛋白 (CAP- BSA)免疫 BAL B/ C小鼠 ,通过杂交瘤技术建立了 2株分泌抗氯霉素的单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞 1D1 0 和 5 E6 。经间接酶联免疫吸附试验 (ci EL ISA)检测细胞培养上清效价为 1∶ 5 12 ,诱生腹水的效价可达 1× 10 8。两株单克隆抗体的亚型为 Ig G1 ,杂交瘤染色体数目为 84～ 96条。该细胞株体外传代和冻存复苏后抗体分泌稳定。ci EL ISA检测显示其与常见抗生素及结构类似物的交叉反应小 ,其灵敏度为 0 .1ng/ ml,IC50 为 2 .38ng/ m l,这表明该单抗具有较大的应用价值     

抗猪支原体共同抗原单克隆抗体的制备与鉴定

以猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)168菌株F332作为抗原，免疫8周龄BALB/c小鼠，利用淋巴细胞杂交瘤技术，获得两株能稳定分泌特异单克隆抗体的杂交瘤细胞株。两株单抗与Mhp和猪鼻支原体（M.hyorhinis,Mh)等反应，而不与鸡支原体，对照血清等反应。结果表明两株单抗可能是针对猪支原体共同抗原的单抗，用SDS-PAGE电泳和Western-blot分析猪支原体的膜蛋白成分。结果显示，猪支原体的共同抗原是80kd和30kd蛋白，两株单抗均与Mhp和Mh的30kd蛋白条带反应，表明这两株单抗特异地针对猪支原体的共同抗原成分30kd蛋白，可以看出，这两株单抗在Mhp的抗原分析，血清学诊断和疫苗质量监测以及猪源支原体污染细胞检测等方面有重要应用价值。     

大豆凝集素单克隆抗体的制备及鉴定

为获得分泌抗大豆凝集素(SBA)单克隆抗体的杂交瘤细胞,以纯化的SBA为抗原,免疫BALB/c小鼠,加强免疫3 d后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,应用有限稀释法和间接ELISA 方法克隆筛选出2株分泌抗SBA单克隆抗体的杂交瘤细胞系A7、F12。细胞上清抗体效价均在1∶2×10³以上,腹水抗体效价均为1∶1×10⁶,单抗亚型鉴定结果均为IgG2b型,分子质量为189.6 ku,亲和常数为7.1×10⁷ mol/L,Western blotting结果表明,2株单抗具有较高的特异性。该McAb的制备为建立SBA定量检测方法奠定了基础。     

禽流感病毒NP蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为获得禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)NP蛋白的单克隆抗体,将构建的重组表达质粒pET-30a-NP转化BL21细胞,经IPTG诱导表达、纯化后作为免疫原,免疫8周龄Balb/c雌性小鼠,并按常规方法制备杂交瘤细胞。通过ELISA方法、Western-blot方法进行筛选,获得3株杂交瘤细胞株,命名为3A6、2H12、5F7,并进行了培养特性、分泌抗体活性、分泌抗体亚类的鉴定。结果显示：3株细胞株连续传10代均稳定分泌单克隆抗体,分泌的单克隆抗体亚型均为IgG2b,轻链类型均为Kappa。制备并纯化了以上3株单克隆抗体,浓度分别为2.9、2.5、2.8 mg/mL,纯度不低于90%。West-blot检测,单抗与H7血凝抑制试验抗原、H5血凝抑制试验抗原、H9N2病毒能发生特异性反应,说明单抗具有广谱性,且与IBDV、REV、IBV、MDV、ALV、AE、ILT、NDV、EDSV等均无特异性条带出现,说明特异性良好。本研究制备的3株针对禽流感NP蛋白的单抗,具有较好的特异性、保守性和广谱性,为下一步开展AIV诊断试剂如IFA检测试剂盒、ELISA检测试...     

抗猪瘟病毒单克隆抗体的制备及特性鉴定

将纯化后的猪瘟病毒免疫4只SPF级BALB/c小鼠,无菌取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经半固体培养基克隆化和间接ELISA筛选,最终获得了4株稳定分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。ELISA结果显示4株单克隆抗体效价均较高,并与其他病毒及PK-15细胞培养物无交叉反应。Western blotting结果证实3株单克隆抗体可特异性识别猪瘟病毒。间接免疫荧光试验可在细胞膜内观察到特异性绿色荧光,表明3株单克隆抗体与猪瘟病毒具有良好的反应性。该研究为猪瘟病毒新型诊断试剂开发奠定了基础。     

家蚕微孢子虫单克隆抗体的制备及鉴定

用家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)总蛋白为抗原,采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠,取4次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合,第1次融合率为13.3%,第2次融合率为55.4%。建立间接酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体。初检阳性率分别为4.68%和5.26%。经3次亚克隆筛选获得了2株能稳定分泌抗家蚕微孢子虫的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为2G10和2B10。间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence test,IFAT)和Western-bloting分析证实所获得的单克隆抗体是特异针对家蚕微孢子虫蛋白的,将在孢子孢壁蛋白的研究中发挥重要作用。     

禽副粘病毒2型(PMV-2)群特异性单克隆抗体的研究

禽副粘病毒2型（Yucaipa株）鸡胚成纤维细胞适应毒经差速离心和蔗糖密度梯度离心法提纯，免疫Balb/c小鼠，取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，经间接ELISA方法筛选，有限稀释3次克隆，获得了两株分泌PMV-2单克隆抗体的杂交瘤细胞株6E9和7E5。经鉴定两株单抗均为IgG1亚类，杂交瘤细胞的平均染色体分别为96条和98条。细胞培养上清及腹水效价分别为1：25600、1：25600、1：51200和1：10^5、1:10^7。6E9和7E5单抗能稳定分泌抗体且与NDV、AIV、EDSV无交叉反应。间接ELISA实验表明4株PMV-2（Yucaipa株、F4株、F6株和F8株）均含有单抗6E9和7E5所针对的位点。     

抗鸽IgG单克隆抗体的制备及鉴定

鸽卵黄经硫酸铵盐析、酒精沉淀及凝胶（Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００）柱层析后,得到较纯的鸽ＩｇＧ,以其免疫ＢＡＬ Ｂ／Ｃ小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞（ＳＰ２／０）进行细胞融合,经过酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）筛选,得到两株能稳定分泌抗鸽ＩｇＧ的单克隆抗体（以下称单抗）,分别命名为１Ｅ５和４Ｃ２。经亚类鉴定,该类抗均为ＩｇＧ１亚类。在鸽ＩｇＧ包被的９６孔板上用间接用ＥＬＩＳＡ方法测定单抗腹水的ＥＬＩ     

二氟沙星残留检测用单克隆抗体的制备及其鉴定

用DFX-BSA免疫BALB/c小鼠,采用显微克隆技术成功筛选出5株特异性分泌细胞株1a6、2b4、4a4、X1和X2。将X1株细胞株直接注入小鼠腹腔获取腹水,腹水纯化后效价达1:1638400。蛋白质含量为6.86mg/ml,单抗X1属IgG2a亚型。X1株单克隆抗体的检测标准曲线方程为Y=0.4813-3.1067X(R=0.9510),最低检测限(LOD)为2ng/ml,线性范围为0.002-5μg/ml,DFX对其IC50为0.085μg/ml。单抗对氟喹诺酮类药物有一定的交叉反应,对沙拉沙星最高可达10.9%,对兽医临床常用抗菌药物氨苄西林、卡那霉素、盐酸四环素、磺胺甲噁唑和氯霉素等没有交叉反应。Ci-ELISA反应中McAb对低浓度的乙腈和丙酮具有良好的耐受性,而低浓度的甲醇对McAb的结合力有一定的影响。     

三聚氰胺单克隆抗体的制备与鉴定

本实验利用三聚氰胺类似物与血蓝蛋白、卵清蛋白偶联制备免疫抗原和包被抗原,免疫Balb/c小鼠,采用B细胞杂交瘤技术,经免疫、融合、筛选和克隆等,得到了抗三聚氰胺单克隆抗体。该抗体亚类为IgG1,制备的单克隆抗体腹水效果评价达10-7,与其他三聚氰胺结构类似物无交叉反应。三聚氰胺单克隆抗体的获得为进一步研发三聚氰胺药物残留检测试剂盒的研制奠定了基础。     

犬瘟热病毒单克隆抗体的制备及鉴定

将纯化的犬瘟热病毒(CDV)分别与弗氏完全佐荆(CFA)和弗氏不完全佐剂(IFA)乳化制备的乳化抗原作为免疫原,以有限稀释法和间接ELISA法进行单克隆抗体的筛选,从而获得了3株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株2F7、3G2、5E3.亚型鉴定结果显示,2F7为IgG2a型,3G2为IgGl,5E3为IgGM.用2F7制...     

角蛋白19片段单克隆抗体的制备及鉴定

为制备角蛋白19片段（CYFRA21-1）的单克隆抗体（mAb）,采用间接 ELISA 方法检测免疫小鼠的抗体效价,融合、筛选、克隆化单克隆抗体,将筛选得到的单克隆细胞株注入小鼠腹腔制备腹水,采用辛酸硫酸铵法、蛋白 A 柱纯化腹水抗体,以 SDS-PAGE 凝胶电泳、紫外分光光度法检测抗体纯度和浓度;利用鼠抗体亚型鉴定试剂盒对单克隆抗体进行亚型鉴定;采用阻断 ELISA 法测定 mAb 的敏感性（IC50）。结果表明,筛选获得4株分泌角蛋白19片段 mAb 的细胞株,将4株细胞株2F9、3H5、7C3、6F11注入小鼠腹腔,分别获得效价为2．56×105、5．12×105、5．12×105、2．56×105的单克隆抗体,经纯化,抗体蛋白浓度为12．43 mg／mL～16．00 mg／mL,为 IgG1型抗体,其 IC50在1．03 ng／mL～1．53 ng／mL 之间。说明获得了4株分泌高效价 CYFRA21-1单克隆抗体的细胞株,为建立 CYFRA21-1的检测试剂盒奠定了基础。     

抗氨苄青霉素单克隆抗体的制备及初步鉴定

利用碳化二亚胺(EDC)法将氨苄青 霉素(Ampicillin,AMP)与匙孔嘁血蓝蛋白 (mcKLH)偶联制备免疫原免疫Balb/c小鼠, 应用杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与小鼠骨髓 瘤细胞(SP2/0)融合,建立分泌氨苄青霉素单 克隆抗体的杂交瘤细胞株。同上方法将氨苄 青霉素连接到阳离子化的牛血清白蛋白(cB SA)上制备检测抗原,对AMP KLH偶联物 免疫小鼠产生的抗体进行检测。通过对杂交 瘤细胞培养上清的检测、鉴定,筛选出8株高 亲和力的杂交瘤细胞株,用其制备的腹水 ELISA效价达到2×106,纯化后的单克隆抗 体(McAb)可以应用于氨苄青霉素残留的快 速检测。     

猪塞尼卡谷病毒单克隆抗体的制备及鉴定

【目的】纯化猪塞尼卡谷病毒(Seneca Valley virus, SVV)SVV-CH-HB2016毒株,并制备其结构蛋白VP1、VP2和VP3的单克隆抗体。【方法】以蔗糖密度梯度离心法纯化的SVV-CH-HB2016病毒颗粒作为抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行细胞融合。通过间接免疫荧光试验(IFA)结合间接ELISA筛选阳性细胞株,制备能特异性分泌针对结构蛋白的杂交瘤细胞株。采用Western blotting和IFA方法分别检测单克隆抗体与重组表达蛋白及天然结构蛋白的反应性,并对单克隆抗体的病毒中和保护效果进行测定。利用空斑试验和实时荧光定量PCR方法探究中和性单克隆抗体对SVV-CH-HB2016毒株吸附过程的影响,最后用抗体相加试验来分析14株单克隆抗体的抗原表位。【结果】在蔗糖密度梯度为5%～45%(W/V)时获得了纯度较好、浓度较高的SVV-CH-HB2016毒株结构蛋白,免疫小鼠血清抗体效价均达到了1∶12 800,成功制备了17株能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经验证14株单克隆抗体能与重组结构蛋白发生Western bl...