| SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测禽呼肠孤病毒δC和δNS基因方法的建立 |
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| 作者姓名： | 熊文婕 谢芝勋 唐熠 谢丽基 刘加波 庞耀姗 邓显文 谢志勤 |
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| 作者单位： | 广西大学动物科学技术学院,南宁,530005;广西兽医研究所,南宁,530001 |
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| 基金项目： | 国家百千万人才工程入选专项资金项目广西自治区科学基金广西留学回国人员科学基金 |
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| 摘 要： | 为建立一种定量检测禽呼肠孤病毒δC和δNS基因的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR方法,针对δC、δNS基因分别设计了1对特异性引物,同时选择了1对内参基因β-actin引物,将常规PCR扩增的片段分别连接到pMD18-T载体上构建重组质粒,经筛选、鉴定纯化后,梯度倍比稀释作为标准品,用于构建SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测δC、δNS基因及内参基因β-actin的标准曲线.结果表明,建立的标准曲线具有良好的线性关系,R2均在0.99以上;最小检出量为10拷贝/μL的阳性标准品,且具有良好的重复性,能够校正抽提样品中细胞数量不均带来的差异.可见,SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR方法能满足检测微量样品中禽呼肠孤病毒δC和δNS基因表达的要求,具有快速、敏感性高、重复性好等特点.
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| 关 键 词： | 禽呼肠孤病毒 δC基因 δNS基因 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR 相对定量 |
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