| 布鲁氏菌分泌蛋白BPE005的亚细胞定位及与宿主细胞互作蛋白的筛选 |
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| 引用本文： | 邱润辉,关飞虎,陶婷婷,李佳,赵天艺,邓兴梅,史超,孙志华,张辉. 布鲁氏菌分泌蛋白BPE005的亚细胞定位及与宿主细胞互作蛋白的筛选[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(4): 1438-1448. DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.04.026 |
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| 作者姓名： | 邱润辉 关飞虎 陶婷婷 李佳 赵天艺 邓兴梅 史超 孙志华 张辉 |
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| 作者单位： | 1. 石河子大学动物科技学院, 石河子 832000;2. 新疆生产建设兵团动物疾病防控重点实验室, 石河子 832000;3. 动物健康养殖国家国际联合研究中心, 石河子 832000 |
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| 基金项目： | 重点领域科技攻关计划(2021AB012);国际科技合作推进计划(GJHZ201709);动物疾病防控兵团重点实验室开放课题(2020BTDJ06);石河子大学高层次人才科研启动项目(RCZK202038) |
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| 摘 要： | 【目的】 分析布鲁氏菌分泌蛋白BPE005的蛋白结构及细胞定位,筛选宿主细胞内与其存在相互作用的靶蛋白,为后续研究BPE005的生物学功能奠定基础。【方法】 通过生物信息学软件对BPE0005的蛋白结构进行初步分析;构建PDRRED2-C1-BPE005重组荧光定位载体,转染人胚肾上皮细胞293T,通过扫描激光共聚焦显微镜观察BPE005的细胞定位;构建PGBKT7-BPE005诱饵载体,验证诱饵载体是否有细胞毒性和自激活现象;以小鼠巨噬细胞RAW264.7 mRNA的cDNA文库为AD文库菌液,检测文库滴度,通过酵母双杂交系统筛选宿主细胞内与BPE005相互作用的靶蛋白。【结果】 布鲁氏菌分泌蛋白BPE005属于疏水性蛋白,内含有大量的无规则卷曲、α-螺旋和延伸链。成功构建PDRRED2-C1-BPE005荧光定位载体和PGBKT7-BPE005诱饵蛋白载体,BPE005定位于宿主细胞核。PGBKT7-BPE005诱饵蛋白载体无酵母细胞毒性和自激活现象,AD文库菌液滴度>2×107/mL,筛选出4个宿主细胞内与BPE0005存在相互作用的蛋白:RNA聚合酶Ⅱ多肽G、补体因子H、鸟苷酸环化酶2G及颗粒蛋白。经复筛、测序、BLAST比对、一对一验证后,最终筛选出1个在宿主细胞内与BPE005具有较强相互作用的靶蛋白(RNA聚合酶Ⅱ多肽G)。对该蛋白的作用网络分析表明,RNA聚合酶Ⅱ多肽G对宿主细胞内mRNA的转录和合成具有重大影响。【结论】 布鲁氏菌分泌蛋白BPE005定位于宿主细胞核,在宿主细胞内可与RNA聚合酶Ⅱ多肽G产生较强相互作用,对进一步阐明布鲁氏菌感染过程中关键效应分子的作用机制具有指导意义。
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| 关 键 词： | 布鲁氏菌 BPE005 亚细胞定位 酵母双杂交 |
| 收稿时间： | 2021-11-02 |
Subcellular Localization and Screening of Host Interacting Proteins of Brucella Secreted Protein BPE005 |
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| QIU Runhui,GUAN Feihu,TAO Tingting,LI Jia,ZHAO Tianyi,DENG Xingmei,SHI Chao,SUN Zhihua,ZHANG Hui. Subcellular Localization and Screening of Host Interacting Proteins of Brucella Secreted Protein BPE005[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2022, 49(4): 1438-1448. DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.04.026 |
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| Authors: | QIU Runhui GUAN Feihu TAO Tingting LI Jia ZHAO Tianyi DENG Xingmei SHI Chao SUN Zhihua ZHANG Hui |
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| Affiliation: | 1. College of Animal Science and Technology, Shihezi 832000, China;2. Key Laboratory of Control and Prevention of Animal Disease, Xinjiang Production&Construction Corps, Shihezi 832000, China;3. State International Joint Research Center for Animal Health Breeding, Shihezi 832000, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Brucella BPE005 subcellular localization yeast two-hybrid |
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