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| 利用CRISPR/Cas9系统敲除葡萄中VviEDR2提高对白粉病的抗性 | |
| 作者姓名： | 杨禄山 郭 晔 胡 洋 文颖强 |
| 作者单位： | 西北农林科技大学园艺学院，农业农村部西北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室，旱区作物逆境生物学国家重点实验室，陕西杨凌 712100 |
| 基金项目： | 国家重点研发计划项目（2018YFD1000300）；国家自然科学基金项目（31772264） |
| 摘 要： | 利用CRISPR/Cas9系统定点编辑葡萄白粉病感病基因VviEDR2(Enhanced disease resistance2),在VviEDR2的DUF1336结构域设计靶位点VviEDR2-T1,构建CRISPR/Cas9敲除载体,通过农杆菌介导法转化‘无核白’葡萄胚性愈伤组织。对PCR阳性植株进行靶位点扩增测序,结果表明,共有8个转基因植株在靶位点处发生不同类型的双等位基因突变,编辑效率为32%;突变体植株生长势较弱,叶片较小,茎秆丛生、细弱。进一步对突变体植株进行抗病检测,结果表明,接种葡萄白粉菌(Erysiphe necator Schw.)5d后,突变体植株叶片上白粉菌孢子仅能萌发出少量较短初级菌丝,表皮细胞产生大量明显的H2O2,而野生型叶片中白粉菌萌发出大量初级菌丝、次级菌丝和吸器,无明显H2O2产生。这些结果表明,可以利用CRISPR/Cas9技术编辑葡萄感病基因VviEDR2,提高葡萄白粉菌抗性。 |
| 关 键 词： | 葡萄 CRISPR/Cas9 基因编辑 VviEDR2 白粉菌 |
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