| 大豆RACK1基因RNAi载体构建及植株转化 |
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| 引用本文： | 李大红,刘喜平,甄萍萍. 大豆RACK1基因RNAi载体构建及植株转化[J]. 南方农业学报, 2014, 45(6): 944-949. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.6.944 |
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| 作者姓名： | 李大红 刘喜平 甄萍萍 |
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| 作者单位： | 黄淮学院生物工程系,河南驻马店,463000临邑县农业局,山东临邑,251500 |
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| 基金项目： | 河南省科技发展计划项目 |
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| 摘 要： | [目的]筛选大豆RACK1基因的RNAi突变体,为研究RACK1基因在大豆生长发育过程的调控作用提供依据.[方法]采用RT-PCR克隆大豆叶片RACK1基因核心保守序列片段,以植物表达载体pCAMBIA 1301为基本载体,构建抑制大豆RACK基因表达的RNAi载体.通过农杆菌介导转入大豆子叶节,经潮霉素筛选转基因植株,利用PCR、Southern blot及RT-qPCR进行转基因植株检测.[结果]克隆获得大豆RACK1基因核心保守序列片段432 bp;将该基因片段连接到pCAMBIA1301表达载体内含子两侧,通过酶切分析,RNAi载体构建正确.通过农杆菌介导,将该载体转入大豆中黄13号,获得23个转基因大豆株系;经PCR和Southern blot检测,确定大豆RACK1基因RNAi片段已融合到大豆基因组中.经定量RT-qPCR分析,不同转基因大豆株系RACK1基因mRNA的表达量具有明显差异,其在株系5的表达量最高,为对照的68.5%;株系7最低,降至对照的19.9%.[结论]成功构建了大豆RACK1 RNAi表达载体并导入大豆基因组中,获得23个农杆菌介导的RACK1 RNA干扰表达的大豆转基因植株,为研究RACK1基因在大豆生长发育过程中的功能和作用奠定了基础.
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| 关 键 词： | 大豆 RACK1 RNAi 载体构建 Southern blot RT-qPCR |
Construction of RNAi vector carrying RACKI gene and transformation in soybean |
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| LI Da-hong,LIU Xi-ping,ZHEN Ping-ping. Construction of RNAi vector carrying RACKI gene and transformation in soybean[J]. Journal of Southern Agriculture, 2014, 45(6): 944-949. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.6.944 |
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| Authors: | LI Da-hong LIU Xi-ping ZHEN Ping-ping |
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