猪流行性腹泻病毒变异株N基因的克隆及原核表达 |
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引用本文: | 孙冰,李彬,何孔旺,郭容利,倪艳秀,俞正玉,姜平.猪流行性腹泻病毒变异株N基因的克隆及原核表达[J].畜牧与兽医,2014(5):72-76. |
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作者姓名: | 孙冰 李彬 何孔旺 郭容利 倪艳秀 俞正玉 姜平 |
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作者单位: | 南京农业大学动物医学院;江苏省农业科学院兽医研究所 |
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基金项目: | 江苏省农业科技自主创新资金[CX(13)3069] |
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摘 要: | 猪流行性腹泻病(Porcine epidemic diarrhea,PED)是我国猪群近两年的多发疾病。本试验于2012年在安徽分离到一株猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)AH2012。为研究该变异株N基因的特性,采用RT-PCR方法获得了其N基因片段,经测序后与其他代表性的PEDV基因序列进行同源性比较和遗传进化分析,发现该毒株与近年来在我国流行的几株PEDV变异株同源性在99.399.5%之间,进化分析显示该毒株属于目前流行的PEDV变异株。将其克隆到表达载体pET28a(+)中,构建了重组质粒pET28a-N,经测序鉴定正确后,转化至感受态细胞BL21(DE3)中,并进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达分子量为65 ku的融合蛋白,蛋白表达量较高,蛋白免疫印迹结果显示,表达的N蛋白能与PEDV阳性血清发生特异性的免疫反应,表明原核表达的N蛋白具有良好的反应原性。该研究可为猪流行性腹泻病的流行病学调查、诊断与防控方法的建立奠定基础。
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关 键 词: | 猪流行性腹泻病病毒 N基因 序列分析 蛋白表达 |
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