产气荚膜梭菌ε毒素突变体的表达及免疫保护力评价 |
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引用本文: | 杜吉革,张秀坤,朱真,薛麒,李启红,印春生,彭小兵,王磊,姚文生,康 凯,陈小云.产气荚膜梭菌ε毒素突变体的表达及免疫保护力评价[J].中国兽药杂志,2018,52(6):13-20. |
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作者姓名: | 杜吉革 张秀坤 朱真 薛麒 李启红 印春生 彭小兵 王磊 姚文生 康 凯 陈小云 |
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作者单位: | 中国兽医药品监察所 |
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基金项目: | 科技部十三五“牛羊重要疫病免疫防控新技术研究”重点专项子课题(2017WFD0500903);中国兽医药品监察所所级课题(201702)。 |
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摘 要: | 为获得产气荚膜梭菌ε毒素(ETX)的重组突变体,并评价其毒力及免疫原性。对已知的D型产气荚膜梭菌ETX编码基因进行优化设计,并将第106位组氨酸突变为脯氨酸,经人工合成获得基因片段GETXH106P。将GETXH106P克隆至原核表达载体p ET30a(+),转染BL21(DE3)菌中进行表达与纯化,从而获得重组蛋白r ETXH106P。利用Western blot方法检测r ETXH106P与D型产气荚膜梭菌抗血清的反应性,并检测其对犬肾细胞系(MDCK细胞)以及小鼠的毒力。随后,将r ETXH106P与Montanide ISA 201佐剂混合乳化制备疫苗,免疫4只健康家兔,按照《中华人民共和国兽药典》(2015年版)规定的方法检测一免及二免后兔血清的中和抗体效价。结果表明,r ETXH106P为可溶性表达,通过灰度扫描,其可溶性表达量比例可达30%;该重组蛋白能与D型产气荚膜梭菌毒素抗血清反应;细胞毒性试验结果显示,100μg/m L的重组蛋白仍无细胞毒性;小鼠安全性实验结果显示,6.25×106ng/kg剂量的重组蛋白对小鼠仍无致死性;每毫升的一免抗血清可中和450~700个最小致死量(MLD)、二免抗血清可中和3000~4000个MLD的D型产气荚膜梭菌毒素;用1 MLD的D型产气荚膜梭菌毒素攻毒后,对照组家兔4/4死亡,免疫组家兔4/4保护。以上结果表明,产气荚膜梭菌r ETXH106P重组蛋白毒力基本消失,且保留了良好的免疫原性,是D型产气荚膜梭菌病基因工程亚单位疫苗的理想候选抗原蛋白。
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关 键 词: | 产气荚膜梭菌ε毒素 突变 重组表达 毒力 抗原性 |
收稿时间: | 2018/1/12 0:00:00 |
修稿时间: | 2018/6/11 0:00:00 |
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