| 猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP12蛋白的表达与鉴定 |
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| 引用本文： | 张文超,虞凌雪,姜一峰,高飞,黄勤峰,李丽薇,李慧春,陈鹏飞,杨德强,刘欢,童光志,杜雅楠,周艳君.猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP12蛋白的表达与鉴定[J].中国动物传染病学报,2018(1). |
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| 作者姓名： | 张文超 虞凌雪 姜一峰 高飞 黄勤峰 李丽薇 李慧春 陈鹏飞 杨德强 刘欢 童光志 杜雅楠 周艳君 |
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| 作者单位： | 内蒙古农业大学兽医学院;中国农业科学院上海兽医研究所; |
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| 摘 要： | 本研究扩增了高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)Hu N4株的NSP12基因,将其克隆于pCold-Ⅰ载体中,获得重组质粒pCold-Ⅰ-NSP12,并转化于E.coli/BL21感受态细胞,在16℃条件下用1 mmol/L的IPTG诱导20 h后,用SDS-PAGE电泳检测表达产物,结果显示在大约18 kDa处出现目标蛋白。用PRRSV特异性阳性猪血清对表达蛋白进行Western blot鉴定,结果显示该蛋白可以被PRRSV阳性猪血清识别。将重组NSP12蛋白纯化后,免疫6周龄BALB/c小鼠制备多克隆抗体。在MARC-145细胞中,对获得的NSP12多抗血清分别进行Western blot和间接免疫荧光检测(indirect immunofluorescence assay,IFA)鉴定,结果显示本研究制备的NSP12多抗血清均可与感染的MARC-145细胞的PRRSV Hu N4株以及在MARC-145细胞中特异表达的NSP12蛋白发生免疫反应。PRRSV NSP12蛋白的表达及其多克隆抗体的制备为进一步研究NSP12在病毒感染过程中的作用奠定了基础。
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