鼠呼肠孤病毒3型荧光定量RT-PCR检测方法的建立

根据呼肠孤病毒3型(Reo3)M1基因序列保守区设计一对特异性引物,作者建立了一种快速、敏感、特异的实时荧光定量RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行了评价试验。试验结果显示,标准品浓度在1.0×10^2~1.0×10^10copy/μL之间时,其浓度的对数值与荧光定量R T-PCR实验中的Ct值之间有良好的线性相关性(相关系数R^2=0.9990),且该标准品检出限为1.0×10^2个copy/μL。特异性方面,该方法除对Reo3有扩增反应外,对其它相关病毒均无扩增反应,引物具有良好的特异性。同时,该方法实验间的变异系数为0.54%~1.04%之间,均小于2%,表明该方法扩增稳定性高、重复性强。以上研究结果表明,此研究检测方法建立的Reo3荧光R T-PCR检测方法特异、敏感、稳定,可用于实验动物中Reo3的监测以及流行病学研究。