重组牛IFN-γ蛋白在昆虫杆状病毒表达系统中的表达、纯化和鉴定 |
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引用本文: | 王睿男,蒋菲,刘亚涛,宋晓晖,刘永生,王文,储岳峰,曹小安,王传彬,孙雨.重组牛IFN-γ蛋白在昆虫杆状病毒表达系统中的表达、纯化和鉴定[J].中国草食动物科学,2021(2). |
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作者姓名: | 王睿男 蒋菲 刘亚涛 宋晓晖 刘永生 王文 储岳峰 曹小安 王传彬 孙雨 |
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作者单位: | 中国动物疫病预防控制中心;新疆维吾尔自治区动物疾病预防控制中心;中国农业科学院兰州兽医研究所 |
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基金项目: | 国家重点计划研发项目(2016YFD0500901);现代农业人才支撑计划(2130106-024);跨境动物疫病防控机制建设(2130114-FK);农业技术实验示范与服务支持(净化)(2130106-039)。 |
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摘 要: | 为合成与天然构象相似的干扰素γ蛋白,通过优化干扰素序列的密码子序列,利用杆状病毒表达系统合成真核重组牛IFN-γ蛋白。实验化学合成牛IFN-γ基因,并将该基因克隆至真核表达载体pFastBacHTA中,将构建成功的重组载体与DH10Bac感受态大肠杆菌进行转座形成穿梭载体,穿梭载体质粒瞬时转染至SF9昆虫细胞中,获得重组杆状病毒,最后利用SF9昆虫细胞悬浮培养大量表达目的蛋白。蛋白纯化后经Western Blotting和BOVIGAM牛分枝杆菌IFN-γELISA检测试剂盒检测分析,具有较好的免疫原性和反应原性。研究结果为牛IFN-γ的单克隆抗体制备以及牛结核病临床诊断奠定了基础。
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关 键 词: | 重组牛IFN-γ蛋白 杆状病毒 真核表达 蛋白纯化 |
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