标记探针法用于microRNA的多重可视化检测

为了建立研究microRNA快速、灵敏、多重的可视化检测方法,试验采用创新的夹心ELISA方法,以链霉亲和素包被的微孔板为反应平台,根据检测靶标microRNA序列设计标记biotin的抓取探针CP和标记FAM的检测探针DP,抓取探针CP将靶标microRNA固定到微孔板上,优化其最佳孵育时间;标记FAM的检测探针DP与靶标microRNA结合并间接偶联于微孔板上,anti-FAM-HRP与检测探针DP标记的FAM结合,并对其最佳孵育时间进行优化;HRP催化底物TMB,使其发生显色反应,并通过显色反应与酶标仪对靶标microRNA的特异性、灵敏性进行研究。结果表明:CP孵育的最佳时间为2 h;anti-FAM-HRP的最佳孵育时间为2 h;特异性检测时,除靶标外,其他突变序列均显示阴性;灵敏性检测时,检测限为12.75 pmol/L。说明建立的检测方法特异性良好,灵敏度较高,可以同时进行多序列检测,且检测过程可以在6 h之内完成,具有良好的应用性。